短柄南蛇藤不同部位的总黄酮含量测定

丁丽娜刘亮陈东林高玉琼刘建华曾富佳

1．遵义医药高等专科学校，贵州 遵义 563002;2．贵州省生物基地，贵州 贵阳 550002

短柄南蛇藤不同部位的总黄酮含量测定

丁丽娜1刘亮1陈东林1高玉琼2刘建华2曾富佳1

1．遵义医药高等专科学校，贵州 遵义 563002;2．贵州省生物基地，贵州 贵阳 550002

目的:建立短柄南蛇藤总黄酮含量测定的方法，对短柄南蛇藤各部位总黄酮含量进行对比研究。方法:以芦丁为对照品，超声波提取和三氯化铝法显色，采用紫外分光光度法在417nm处测定短柄南蛇藤不同部位的总黄酮含量。结果:芦丁的线性范围为2.40～25.16μg/mL，回归方程A=0.0263C+0.0384，r=0.9996(n=6);平均加样回收率为101.2%，RSD=2.22%。不同部位总黄酮含量由高至低依次为:种子＞叶＞根皮＞果壳＞假种皮＞茎。结论:该文首次测定短柄南蛇藤总黄酮含量，并对不同部位总黄酮含量进行对比研究。

短柄南蛇藤;总黄酮;含量测定;紫外分光光度法

短柄南蛇藤(Celastrus rosthornianus Loes)为卫矛科南蛇藤属植物，分布于我国大部分地区，其根、茎叶、果实等均可入药，根及茎叶可治疗治风湿疼痛，跌打损伤，疝气痛，疮疡肿毒，带状疱疹，湿疹，毒蛇咬伤;果实可宁心安神，主治失眠多梦［1］。该植物主要有倍半萜、三萜及其衍生物、生物碱、黄酮类化合物等，黄酮化合物主要存在于南蛇藤属植物的叶、翅中，是抗炎、抗氧化活性成分［2－6］。目前关于短柄南蛇藤总黄酮含量测定未见报道。根据文献资料，短柄南蛇藤分不同的部位入药，其不同部位的功效、剂量、毒性都有一定的差别。本文采用紫外分光光度法，以芦丁为对照品对短柄南蛇藤中总黄酮的含量测定进行了方法学的考察，并对不同部位的总黄酮含量进行对比研究，为短柄南蛇藤的进一步开发利用提供参考数据，充分发挥该植物的药用潜力。

1 仪器和试药

SYFM－8Ⅱ型微粉碎机(济南松岳机器有限责任公司);202－00台式电热恒温干燥箱(中国天津泰斯特仪器有限公司);AL－204型电子天平(上海梅特勒－托得多仪器有限公司);KQ－500DE型医用超声波清洗机(昆山超声仪器有限公司);TU－1810紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)。

短柄南蛇藤(采自贵州镇远地区，经贵阳中医学院孙庆文老师鉴定为卫矛科南蛇藤属植物短柄南蛇藤Celastrus rosthornianus Loes)。样品按不同部位分离，得到根皮、茎、叶、果壳、假种皮、种子六个部位，自然晾干，粉碎过80目筛，得到短柄南蛇藤不同部位的粉末，干燥器内保存备用。芦丁对照品(中国药品生物制品检定所，100080－200306)，实验中所使用的试剂均为国产分析纯试剂，重蒸水为本实验室自制。

2 方法与结果

2.1 供试品溶液的制备

分别精密称取短柄南蛇藤不同部位的干燥粉末2g，置于锥形瓶中，加入30mL60%乙醇溶液，浸润后，超声提取60分钟，过滤，滤液置100mL容量瓶中，用60%的乙醇定容，摇匀，得供试品溶液，备用。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取在105℃干燥至恒重的芦丁对照品0.0150g于50mL容量瓶中，用30%乙醇溶解定容至刻度，摇匀，作为对照品溶液(每1mL含芦丁0.3mg)。

2.3 检测波长的选择

分别精密量取供试品溶液、对照品溶液各5mL分别置于25mL容量瓶中，加入1ml 0.5mol/L的三氯化铝溶液，摇匀，放置15min，用PH=5.8的NaAc－HAc缓冲溶液定容，摇匀，超声处理5min。在200～600nm波长范围内扫描吸收曲线(以不加黄酮样品的试剂空白做参比)，芦丁标准溶液、供试品溶液显色后都在417nm处有最大吸收，故以417nm波长为测定波长。

2.4 标准曲线的绘制［7］

分别精密量取0.3mg/mL芦丁对照品溶液0.2mL、0.5mL、1mL、1.5mL、2mL、2.5mL于25mL容量瓶中，分别加入1mL0.5mol/L的AlCl3溶液，摇匀，放置15min，用PH=5.8的NaAc－HAc缓冲溶液定容，摇匀，超声振荡5min后以PH=5.8的NaAc－HAc缓冲溶液为参比，于417nm处测定吸光度。结果如图1，芦丁回归方程为A=0.0263C+0.0384，r=0.9996(其中C为芦丁浓度μg/mL;A为吸光度)，在2.40～25.16μg/mL浓度范围内呈线性。

图1 三氯化铝显色后芦丁的标准曲线

2.5 稳定性试验

精密吸取供试品溶液5mL，按“2.4”项下操作测定吸光度，每隔5分钟测一次，共6次，RSD为1.61%，在30min内样品溶液的稳定性较好，时间延长，样品吸收度下降较多，故选择测定时间在30min以内。

2.6 精密度试验

精密量取样品液5mL6份于25mL容量瓶中，按“2.4”项下操作测定吸光度，总黄酮含量RSD为1.21%，表明该法的精密度较好。

2.7 重现性试验

精密称取同批果壳粉末2.0g，平行6份，按照“2.1”项下制备供试品溶液，按“2.4”项下操作测定吸光度，总黄酮含量RSD为2.35%，证明该方法的重现性较好。

2.8 加标回收率试验

精密称取短柄南蛇藤果壳粉末2.0g，平行9份，按“2.1”项下处理，精密量取5mL的样品溶液，分别加入新配置不同量的芦丁标准品(0.3mg/mL)(每个加标量级别3个平行样)，摇匀，按“2.4”项下操作测定吸光度，总黄酮含量平均回收率为101.2%，RSD为2.22%，测得结果均在95%～105%之间，说明总黄酮的提取和检测方法可行。

表1 加标回收率试验结果

2.9 样品的含量测定

按“2.4”项下对“2.1”项下制备的各部位供试品溶液进行测定，计算总黄酮含量，结果见表2。不同部位总黄酮含量由高至低依次为:种子＞叶＞根皮＞果壳＞种皮＞茎。

表2 不同部位总黄酮含量测定结果(mg/g，X=∑Xi/n，n=3)

3 小结

本实验以芦丁为对照品，采用超声波提取和三氯化铝法显色，对短柄南蛇藤中总黄酮的含量测定进行了方法学考察，实验过程中严格控制时间，显色后30min内测定。本法操作简单，精密度高，重复性和回收率效果较好，测得的总黄酮含量也较为合理，为短柄南蛇藤的质量控制提供了新的有效手段。实验结果显示，短柄南蛇藤六个不同部位所含的总黄酮不同，种子中的总黄酮含量最高，其次是叶、根皮、果壳、种皮，茎中含量较少，为该药材的深度开发和利用提供了参考依据。

［1］ 国家中医药管理局《中华本草编委会》．中华本草［M］．上海:上海科学技术出版社，1999，5:175～176．

［2］ Kui－wu Wang，Cui－rong Sun，Xiao－dan Wu．Novel bioactive dammarane caffeoyl esters from Celastrus rosthornianus［J］．Planta Med，2006 Mar，72(4):370－2．

［3］ 张舰，刘延庆．南蛇藤属植物的化学成分与药理作用［J］．国外医药(植物药分册)，2005，20(5):197－199．

［4］ Kui－wu Wang．A new fatty acid ester of triterpenoid from Celastrus rosthornianus with anti－tumor activitives［J］．Nat Prod Res，2007 Jun，21(7):669－74．

［5］ Kui－wu Wang．A new tritepenoidal ester from Celastrus rosthornianus［J］．Fitoterapia，2008，2:9．

［6］ 高玉琼，丁丽娜，赵德刚等．短柄南蛇藤叶微粉与普通粉挥发油化学组成的对比研究［J］．中山大学学报(自然科学版)，2009，(48)2:45－47．［7］陈丛瑾，黄克瀛，李德良等．AlCl3显色分光光度法测定香椿叶中总黄酮［J］．分析实验室，2006，25(12):91－94．

R927.2

A

1007－8517(2012)15－0056－02

丁丽娜(1981)，女，汉族，硕士学位，主要从事天然药物化学成分及质量研究。

曾富佳(1986－)，女，汉族，硕士学位，主要从事天然药物生物活性研究。

2012.05.18)