HPLC法测定双黄连注射液中木犀草苷的含量

姚文冰

广西北海食品药品检验所，广西 北海 536000

HPLC法测定双黄连注射液中木犀草苷的含量

姚文冰

广西北海食品药品检验所，广西 北海 536000

目的:建立高效液相色谱法同时测定双黄连注射液中木犀草苷含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Agilent ZORBAX SB－phenyl(4.6mm×250mm，5μm)，流动相为乙腈(A)—0.5%冰醋酸(B)(A+B=100%)作梯度洗脱，流速:0.8 ml*min－1，检测波长为350nm，柱温为室温，供试品进样量30μL、对照品进样量10μL。结果:木犀草苷的进样量在0.82～4.91μg(r=0.9999)范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系;平均回收率为103.31%，RSD为1.87%(n=6)。结论:表明该方法简单、快速、准确，可用于双黄连注射液的质量控制。

高效液相色谱法双黄连注射液;木犀草苷

双黄连注射液是由金银花、黄芩、连翘三味药材经提取加工而成复方制剂，具有清热解毒，清宣风热。用于外感风热引起的发热、咳嗽、咽痛。适用于病毒及细菌感染的上呼吸道感染、肺炎、扁桃体炎、咽炎等。目前，双黄连注射液收载于《卫生部中药成方制剂》，原质量标准中只收载了黄芩苷的含量测定方法，未见金银花的含量测定方法，因此本文通过系统摸索，增加了高效液相色谱法测定双黄连注射液中木犀草苷指标性成分的含量。本方法准确、可靠，有效用于双黄连注射液的质量控制。

1 仪器与试药

1200 型高效液相色谱仪(美国Agi lent公司);CP225D型电子天平(德国赛多利斯公司);AW－120型电子天平(西班牙COBOS公司)。

木犀草苷对照品(中国药品生物制品检定所;批号为110795－200806);双黄连注射液(湖北香连药业有限责任公司，编号:1、2、3);乙腈为色谱纯，其它试剂为分析纯，水为超纯水。

2 实验方法

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Agilent ZORBAX SB－phenyl(4.6mm×250mm，5μm);流动相:乙腈(A)—0.5%冰醋酸(B)(A+B=100%)作梯度洗脱，t=0→30min，A:10%→70%;t=30→40min，A:70%→30%;t=40→45min，A:30%→10%。检测波长:350nm;流速:0.8 ml*min－1;柱温:室温;进样量:供试品30?L、对照品10μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液配制

精密称取经五氧化二磷减压干燥12h以上的木犀草苷对照品适量，加入50%甲醇制成每1mL含木犀草苷40μg对照品溶液，作为对照品储备液。

2.2.2 供试品溶液配制

精密量取本品20ml，置水浴上浓缩至约1ml，加中性氧化铝2g，搅拌混匀后，至中性氧化铝柱(粒度量100～200目)，5g，内径1cm)上，用70%乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加50%甲醇适量，温热使溶解，转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，制得供试品溶液(1)。该法制备的供试品溶液所得的峰形、出峰时间及分离都可达到较好效果。

2.2.3 阴性样品溶液配制

取不含金银花的阴性样品，采用供试品溶液制备方法(2.2.2)制备阴性样品溶液，进样分析。

2.3 专属性考察

分别吸取木犀草苷对照品溶液10μL、供试品溶液、阴性样品溶液各30μL进样，按“2.1”项下色谱条件进行检测。结果供试品溶液中木犀草苷与杂峰完全分离，阴性样品溶液无干扰。谱图见图1、2、3。

2.4 线性关系考察

分别取“2.2.1”的木犀草苷对照品溶液，加50%甲醇制成每1mL含木犀草苷0.16μg对照品溶液，作为系列浓度的对照品溶液。依次自动进样5、10、15、20、25、30μL，记录色谱图。以对照品进样量X(μg)为横坐标，峰面积Y为纵坐标，进行线性回归。得到结果见表1，结果表明，各组分在表1浓度范围内的线性关系良好。

表1 木犀草苷的线性与范围

2.5 精密度考察

精密吸取对“2.2.1”的木犀草苷对照品溶液各10uL，在相同的色谱条件下连续进样6次，分别测定峰面积的积分值。木犀草苷的RSD分别为0.32%(n=6)，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

取同一供试品溶液，于室温下0、2、4、6、8、12、24h分别按上述色谱条件测定，得到木犀草苷的RSD分别为0.86%(n=6)，表明供试品溶液在24h内基本稳定。

2.7 重复性试验

取同一批样品(编号:3)共6份，，按供试品溶液制备方法平行制备溶液并测定，木犀草苷的平均含量2.80μg*ml－1，RSD分别为1.87%(n=6)，表明分析方法重复性良好。

2.8 加样回收率试验

取已知含量的样品(编号:3)10ml，分别精密加入一定量的木犀草苷对照品，按“2.2.2”项下的方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，计算加样回收率。结果见表2，木犀草苷的平均回收率为103.31%，RSD分别为1.87%(n=6)。

表2 加样回收率试验测定结果

2.9 样品含量测定

取3批双黄连注射液，按“2.2.2”项下的方法制备供试品溶液，按最佳色谱条件测定，结果见表3。

表3 样品含量测定结果

3 结论

通过对双黄连注射液中的木犀草苷含量的连续测定的色谱条件的摸索和阴性溶液干扰试验、样品稳定性、精密度及回收实验的研究，表明该方法可行，可用于双黄连注射液中木犀草苷含量的分析。

［1］ 国家药典委员会编．中华人民共和国药典(一部)［S］．2010年版．北京:化学工业出版社，2010:611．

Determination of luteolin in Shuanghuanglian injection by HPLC

YAO Wen－bing
Guangxi Beihai Institute for Food and Drug Control，Beihai 536000，China

OBJECTIVE:To establish a HPLC method for the content determination of luteolin in Shuanghuanglian injection.METHODS:HPLC method was adopted.Agilent ZORBAX SB－phenyl(4.6mm×250mm，5μm)column was used.Acetonitrile－0.5%acetic acid was used as mobile phase at the flow rate of 0.8 ml*min－1，and the detection wavelength was set at 350 nm.colum temperature for room temperature，for try products into sample volume 30μL，and controlled products into sample volume 10μL.RESULTS:The linear ranges of luteolin was 0.82～4.91μg(R=0.9999)respectively.The average recoverie was 103.31%，RSD=1.87%，(n=6)，respectively.CONCLUSION:The method is simple，rapid and accurate，which can be used for quality control of Shuanghuanglian injection.

High performance liquid chromatography;Shuanghuanglian injection;luteolin

R927.2

A

1007－8517(2012)15－0046－02

2012.05.27)