HPLC法测定维吾尔药制剂清涩比黑马尔江散中没食子酸的含量

阿依努尔·阿木提 司马义江·阿布都热西提

新疆喀什地区药品检验所，新疆 喀什 844000

HPLC法测定维吾尔药制剂清涩比黑马尔江散中没食子酸的含量

阿依努尔·阿木提 司马义江·阿布都热西提

新疆喀什地区药品检验所，新疆 喀什 844000

目的:高效液相色谱法测定清涩比黑马尔江散中没食子酸的含量。方法:甲醇一0.025%磷酸溶液(4:96);流速lmL/min;检测波长270 nm柱温:25℃;进样量:l0μL;分析方法:外标法。结果:没食子酸在10.6～106.0μg范围内线性良好(r=0.9996)，方法精密度为RSD为0.42%(n=5)，平均回收率为99.0%，RSD为1.3%(n=6)。结论:该方法简便、准确、测得结果稳定重现性好，可作为该制剂中没食子酸的含量测定方法。

HPLC;没食子酸;清涩比黑马尔江散

清涩比黑马尔江散由新疆维吾尔族习用药材欧菝葜跟、马钱子、没食子、黑种草籽、珊瑚、芫荽子等8味药材组成，属部颁标准一维吾尔药分册收录品种，具有清楚异常粘液质，调节鼻腔气质，清腔通气，消炎止痛，收剑固涩之功效。临床上用于咽喉肿痛、鼻塞、流涕、流血不止、瘙痒等的治疗。部颁标准仅采用定性鉴别试验来控制该制剂的质量。没食子酸是清涩比黑马尔江散的主要有效成分之一，研究该成分的含量测定方法可以更好的反映和控制本品的内在质量。

1 仪器和试药

岛津高效液相色谱系统:包括LC 20AT型双泵，SIL 20AC型自动进样器，SPD-M 20A型PDA检测器;岛津uv－2450紫外可见分光光度计;BP211D型分析天平(德国Sartorius公司);没食子酸对照品(0831—9501):中国药品生物制品鉴定所;样品:新疆维吾尔自治区维吾尔医医院(批号:20101019，20101123，20101207);甲醇:色谱纯(美国TEDIA试剂公司);磷酸:分析纯(天津市永大化学试剂开发中心);所有色谱用试剂均用O.45gm微孔滤膜过滤;水为重蒸馏水;其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱岛津VP－ODS 250×4.6mm 5μm;流动相:甲醇一0.025%磷酸溶液(4:96);流速lmL/min;检测波长270 nm柱温:25℃;进样量:l0μL;分析方法:外标法。

2.2 系统适应性试验

分别按照2.5、2.6项下方法制备对照品溶液及供试品溶液，按2.1项下色谱条件，各进样10μl，同时采集270nm光谱数据。结果显示，供试品溶液相应色谱峰的光谱与对照品没食子酸一致。没食子酸对照品保留时间为16.2min，理论塔板数大于5000。

2.3 对照品溶液的配制

精密称取没食子酸对照品，加流动相溶解制成0.1060mg/mL的溶液，作为对照品溶液储备液。精密量取对照品溶液储备液5mL置50mL量瓶中加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.4 供试品溶液的配制

精密称取样品(批号:20101123)1.0040g，置50mL容量瓶中，加甲醇30mL超声处理1个小时、加甲醇稀释至刻度摇匀、滤过，取续滤液1mL置10mL容量瓶中，加甲醇即得。微孔滤膜滤过，备用。

2.5 线性关系考察

精密量取对照品储备液(0.1060mg/mL)1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL，置10mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，分别取10μL，按“2.1”色谱条件下操作，以6次测定的峰面积平均值考察线性范围。

线性方程为:Y=2.4×104X－1.4×103，r=0.9996。

结果表明，没食子酸在:10.6～106.0μg范围内线性关系良好。

2.6 精密度实验

精密量取对照品溶液储备液(0.1060mg/mL)5mL置50mL量瓶中加流动相稀释至刻度，摇匀，取10μL，重复进样5次，以峰面积计算RSD(n=5)为O.42%。证明本法有较高的精密度。

2.7 稳定性实验

取同一批号本品(20101123)，按“2.6”方法配制溶液，分别于O、1、2、4、6h进样，进样量为10μL，测定没食子酸的峰面积，RSD为1.24%。

2.8 重复性实验

取同一批号本品(20101123)，平行制备5份样品，按样品测定法测定，并对所得数据进行处理，结果测得没食子酸含量的RSD为0.89%。

2.9 加样回收率实验

精密量取已知含量的样品(批号为20101123，含量4.11mg/g)6分各1g，分别精密加入一定量的没食子酸对照品，按供试品溶液的制备方法操作，在上述色谱条件下进行测定，计算回收率，结果见表1。

表1 加样回收率实验结果(n=6)

2.10 样品测定

取样品按“2.4”方法制备供试品溶液，按“2.1”色谱条件下测定，按外标法计算没食子酸含量。结果见表2。对照品和供试品色谱图见图1

表2 清涩比黑马尔江散中没食子酸含量测定结果(n=3)

3 讨论

3.1 检测波长的选择

取没食子酸对照品适量，用流动相溶解并稀释成0.1mg.mL－1溶液，用紫外可见分光光度计于200～400nm处进行扫描，从其紫外图谱中可见其在220nm、270 nm处有最大吸收，但在220nm检测波长下，流动相中甲醇及样品中其他物质的紫外吸收干扰较大，基线不稳，故选择270 nm为检测波长。

3.2 流动相的选择

报道的方法试验，流动相用甲醇一水(5∶95)，水一乙酸(98∶2)，甲醇一0.5%冰醋酸(15∶85)，在该制剂中没食子酸的分离效果均不佳，考虑到没食子酸显酸性，故流动相的pH值对没食子酸的分离影响较大，通过不断改变甲醇与磷酸水溶液的比例及流速，选定甲醇一0.025%磷酸水溶液(4:96)及流速lmL/min比较合适，分离度好且保留时间适宜。

本实验测定了不同批号的清涩比黑马尔江散，结果均能检出没食子酸，但含量有所差异。本篇通过实验研究，建立了清涩比黑马尔江散中没食子酸含量的HPLC测定法。本法取样量少，方法简单，重现性好，结果准确，可作为质量控制分析方法，为没食子酸的含量测定提供了有效的方法。

参考文献

［1］ 国家药典委员会．卫生部药品标准［S］．维吾尔药分册，1998:123．

［2］ 徐小平．王曙HPLC测定4种藏药中没食子酸的含量［J］．华西药学杂志，2003，18(6):448．

Determination of Uygur medicine preparation Qingse bi hei ma er jiang powder rinse solution of gallic acid by high performance liquid chromatography Ayinuer·Amuti，Simayijiang·Abudurexiti

Kashi Institute for Drug Control，Kashi 844000，China

Objective:Determination of Qing Se Bi Hei Ma er jiang powder in gallic acid．Methods:a 0.025%methanol，phosphoric acid(four ninety－six);flow lmL．min－1;detection wavelength 270 nm column temperature:25℃;injection volume:l0μL;analysis methods external standard method．results:gallic acid in 10.6～106.0μg．range of good linearity(r=0.9996)，method precision was RSD=0.42%(n=5)，the average recovery was 99.0%，RSD was 1.3%(n=6)．Conclusion:The method is simple，accurate and measured results are stable and reproducible and can be used in the preparation of gallic acid method．

HPLC;gallic acid;Bi Hei Ma er jiang powder

R927.2

A

1007－8517(2012)15－0011－02

2012.02.24)