静脉注射sCD14对严重烫伤内毒素血症小鼠血清C-反应蛋白和降钙素原以及血糖水平的影响

万 玲，胡晓潞，张 萍，王 浈，王占科

(解放军第九四医院检验科，南京军区检验医学专科中心，江西 南昌 330002)

内毒素是通过其细胞膜上的受提发挥作用，有文献报告，细胞膜内毒素受体为膜白细胞分化抗原14(mCD14)[1]。严重创伤患者血液LPS水平升高与感染等有关，靶组织细胞mCD14与血液中内毒素结合，启动内毒素信号转导，导致机体全身炎症反应综合征 (SIRS)和多器官功能不全综合征(MODS)[2]。可溶性白细胞分化抗原14(sCD14)游离存在于血液和各种体液中，可通过竞争膜受体与LPS结合，对LPS病理效应起到抑制作用[3]，sCD14对严重创伤感染机体C-反应蛋白和降钙素原以及血糖水平的影响，国内外报道不多。本文以严重烫伤内毒素血症小鼠为创伤感染动物模型，观察静脉注射sCD14对严重创伤感染机体C-反应蛋白和降钙素原以及血糖水平的影响，旨在证明sCD14可作为拮抗炎症反应的有效药物并改善糖代谢障碍提供实验依据，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 烫伤模型制作与分组 昆明种小鼠 (南昌大学医学院实验动物中心提供,合格证号JXA2000176)18～20g，雌雄不拘，自由喂养，按30%体表面积背部剪毛，89oC热水浸泡9s，制作III度烫伤模型(烫伤皮肤病理切片见图1)，随机分为sCD14治疗组(n=20)、及sCD14治疗对照组(n=20,除不注射药物外，其他与药物治疗组同)；另设正常对照组(n=20,不进行烫伤，其余同烫伤模型组)。

图1 严重烫伤小鼠Ⅲ度烫伤皮肤病理切片(HE染色，×400)

1.2 材料来源 基因工程产品sCD14从深圳晶美生物工程有限公司购买。血糖和C-反应蛋白测定试剂盒从宁波美康生物诊断有限公司购买；降钙素原测定试剂盒从罗氏诊断公司购买。

1.3 治疗方法 基因工程产品sCD14用生理盐水稀释，参考文献[4]，每天按5mg/kg体重，分2次尾静脉注射，连续3d。治疗对照组和正常对照组只注射生理盐水，其它同治疗组。各组小鼠均在治疗3d后，第4d断头处死，肝素抗凝，收集血液标本，4 000r/min离心，分离血浆。血糖测定小鼠，需要空腹8h以上。

1.4 测定方法 血清C-反应蛋白采用免疫比浊法，血糖采用葡萄糖氧化酶法，通过AU2700全自动生化分析仪测定；降钙素原采用磁珠电化学发光法，通过全自动罗氏电化学发光测定仪测定。

2 结果

2.1 血清C-反应蛋白和降钙素原以及血糖水平变化见表1。

表1 各组小鼠血清C-反应蛋白和降钙素原以及血糖水平变化

由表1结果可见，sCD14治疗组小鼠血清C-反应蛋白和降钙素原以及血糖水平均明显低于治疗对照组(P<0.01),但均明显高于正常对照组(P<0.01)。

3 讨论

sCD14为体内天然存在的单链多肽分子，其N端可与LPS结合，但由于sCD14没有在细胞膜上，也缺少膜CD14的跨膜区和膜内区，因此，属于无效结合。在生理情况下，正常人和动物血清中可检测到sCD14水平[5]。在严重感染情况下，血清sCD14水平明显升高[6]，sCD14在LPS高浓度条件下，是LPS负反馈效应的表现，可拮抗LPS病理作用，sCD14升高但仍相对LPS升高不足，导致sCD14和LPS比值下降，可能促进创伤MODS发生与发展[7]。

CRP(C反应蛋白)是一种能与肺炎球菌C多糖体反应形成复合物的急性时相反应蛋白。CRP可作为炎症反应的非特异性标志物，并应用于临床诊断，血清CRP可作为评价感染后炎症反应严重程度的重要指标[8]。PCT是降钙素前体，属于一种无激素活性的糖蛋白，由116个氨基酸组成。在生理情况下，PCT通过甲状腺的C细胞产生并裂解出降钙素；严重感染时血PCT水平明显增高，此时PCT主要由甲状腺外组织产生[9]。严重全身性细菌、真菌、寄生虫、急性疟疾感染，血浆PCT浓度异常升高，而且升高程度与感染炎症严重程度及预后有关。血糖水平是反映糖代谢障碍程度的重要指标，感染导致的过度炎症反应可诱发胰岛素抵抗和胰岛B细胞功能障碍，造成高血糖反应[3]。

我们结果表明，治疗对照组血清C-反应蛋白和降钙素原以及血糖水平明显高于正常对照组，提示严重内毒素血症烫伤小鼠存在过度炎症反应和糖代谢障碍。我们结果还表明，sCD14可有效降低严重创伤机体C-反应蛋白和降钙素原以及血糖水平，提示sCD14具有拮抗LPS病理作用发挥抗炎效果。此外，我们结果表明，sCD14治疗组血清C-反应蛋白和降钙素原以及血糖水平虽然相对治疗对照组下降，但仍高于正常对照组，提示sCD14不能完全拮抗LPS的病理作用，也可能是严重感染机体内毒素血症不是造成C-反应蛋白和降钙素原以及血糖水平升高的唯一原因。

sCD14通过与LPS无效结合，在高浓度LPS条件下，拮抗LPS的病理作用，也有文献报道，sCD14可延长LPS在体内的半衰期，促进LPS的病理作用[6]。在严重创伤感染、SIRS以及MODS条件下，LPS过度升高，sCD14作为防治创伤MODS的有效药物，已引起国内外高度重视[4]，我们结果支持sCD14可作为防治严重创伤MODS有效药物的观点。

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