单刀根对小鼠疼痛模型的影响

王曙光，高 敏，赵 远，李小凤

（1.云南省中医中药研究院，云南 昆明650223；2.昆明医科大学，云南 昆明650500）

在临床应用中，传统药物显示出一定的治疗效果。针对镇痛发生的作用及机理，本实验用相应动物模型实验来证实受试品的镇痛作用，从而为挖掘出更多的镇痛类中药，充分发挥丰富的自然资源在临床中的应用，缓解疼痛患者的病痛寻找新资源。单刀根是傣族民间习用的有镇痛作用的草药。为了进一步证实其镇痛的药效，本实验拟通过动物模型来研究其镇痛作用。

1 材料和方法

1.1 材料 热板测痛仪GJ－8402型 生产厂家：宁海白石电子医药仪器厂；UGO BASLE Tail Flick 37360 Model 37360 UGO BASILE S.R.L微量移液器20～200μL生产厂家：大龙医疗设备（上海）有限公司；单刀根药材生药粉、单刀根药材水提取物、单刀根药材醇提取物，均由云南省中医中药研究院药理室提供；己烯雌酚注射液 规格：1 mL：2 mg产品批号：100504 050608生产厂家：上海通用药业股份有限公司；缩宫素注射液 规格：1 mL：10单位产品批号：100404生产厂家：上海禾丰制药有限公司；阿司匹林肠溶片 规格：每片含0.1阿司匹林 产品批号：BJ00981生产企业：Bayer Healt hcare Manu－facturing s.r.l；吗啡注射液 规格：1 mL：10 mg产品批号：950505生产厂家：沈阳第一制药厂。

1.2 实验动物 昆明种SPF小鼠级提供单位：昆明医学院实验动物中心许可证号：SCXK 2005－0008雌性135只；雄性90只，体重（20±2）g。

1.3 受试物 DDG药材小提取物，浓度为2 g生药／mL；DDG药材95%乙醇提取物，浓度为2 g生药／mL，均由云南中医中药研究院药理室提供。

2 实验方法

2.1 扭体法［1～3］雄小鼠90只，体重（20±2）g。随机分为6组，每组15只。空白对照组，等体积灌胃给予生理盐水；单刀根水提液大剂量组，按小鼠10 mL／kg的剂量（每mL含生药量2 g）灌胃给药；单刀根水提液小剂量组，按小鼠5 mL／kg的剂量（每mL含生药量2 g）灌胃给药；单刀根醇提液大剂量组，按小鼠10 mL／kg的剂量（每mL含生药量2 g）灌胃给药；单刀根醇提液小剂量组，按小鼠5 mL／kg的剂量（每mL含生药量2 g）灌胃给药；阿司匹林组，按小鼠20 mL／kg（78 mg／kg）的剂量灌胃给药。各受试组连续灌胃5 d，实验所得结果见表1。

2.2 耳肿胀法［4］雄小鼠90只，体重（20± 2）g。随机分为6组，每组15只。空白对照组，等体积灌胃给予生理盐水；单刀根水提液大剂量组，按小鼠10 mL／kg的剂量（每mL含生药量2 g）灌胃给药；单刀根水提液小剂量组，按小鼠5 mL／kg的剂量（每mL含生药量2 g）灌胃给药；单刀根醇提液大剂量组，按小鼠10 mL／kg的剂量（每mL含生药量2 g）灌胃给药。阿司匹林组，按小鼠20 mL／kg（78 mg／kg）的剂量灌胃给药。各受试组连续灌胃5 d，于最后1次灌胃结束后，在小鼠右耳的前后两面涂布0.05 mL／只二甲苯。1 h后，将小鼠麻醉处死，剪下双耳用8 mm直径打孔器分别在同一部位打下小鼠圆耳片称重，记录数据，数据进行统计分析。实验所得结果见表2。

2.3 热板法［1，5］雌小鼠90只，体重（20± 2）g。把小鼠放于温度为（50±5）℃的热板仪上，记录各小鼠从接触热板仪到舔后足的时间。每组小鼠测定2次，测量完毕后，算出两次测量时间平均值作为基础痛阈值。挑选时间为5～30 s内舔足小鼠为合格小鼠。把合格小鼠随机分为6组，每组15只。空白对照组，等体积灌胃给予生理盐水，连续给药10 d；单刀根水提液大剂量组，按小鼠10 mL／kg的剂量（每mL含生药量2 g）灌胃给药；单刀根水提液小剂量组，按小鼠5 mL／kg的剂量（每mL含生药量2 g）灌胃给药；单刀根醇提液大剂量组，按小鼠10 mL／kg的剂量（每mL含生药量2 g）灌胃给药；单刀根醇提液小剂量组，按小鼠5 mL／kg的剂量（每mL含生药量2 g）灌胃给药；各受试组连续灌胃给药3 d。各灌胃组小鼠，于最后一次灌胃30 min后，置于热板仪上测定舔足时间，时间间隔30 min，共重复4次。吗啡组，按小鼠10 mL／kg（1.95 mg／kg）的剂量给予小鼠皮下注射吗啡即刻置于热板仪上，按间隔30 min，重复测定4次舔足时间。实验所得结果，见表3。

2.4 单刀根药物诱导的痛经实验［6～7］雌小鼠105只，体重（20±2）g。随机分为7组，每组15只。空白对照组，等体积灌胃给予生理盐水，连续灌胃12天；各受试组，按小鼠2 mg／kg（0.4 mg／mL，5 mL／kg）的剂量给小鼠肌肉注射乙烯雌酚，连续注射12 d；模型组只给乙烯雌酚，不给予受试药。在注射乙烯雌酚第8 d起，单刀根水提液大剂量组，按小鼠10 mL／kg的剂量（每mL含生药量2 g）灌胃给药；单刀根水提液小剂量组，按小鼠5 mL／kg的剂量（每mL含生药量2 g）灌胃给药；单刀根醇提液大剂量组，按小鼠10 mL／kg的剂量（每mL含生药量2 g）灌胃给药；单刀根醇提液小剂量组，按小鼠5 mL／kg的剂量（每mL含生药量2 g）灌胃给药；各受试组连续灌胃给药5 d。吗啡组，在注射乙烯雌酚第12 d，按小鼠10 mL／kg（1.95 mg／kg）的剂量给予小鼠注射吗啡。所有实验组，于第12天给药结束30 min后，按小鼠20 u／kg（2u／mL，10 mL／kg）的剂量，给小鼠腹腔注射缩宫素。并观察小鼠在注射完催产素30 min内的扭体次数，并记录数据，数据进行统计分析。实验所得结果，见表4。

2.5 统计学方法 所有数据均进行统计分析，均采用t检验。

3 实验结果

表1 单刀根对小鼠的镇痛作用（扭体法）（－x±s）

表2 单刀根对小鼠的抗炎作用（耳肿胀法）（－x±s）

表4 单刀根对小鼠痛经模型的作用（－x±s）

表3 单刀根对小鼠的镇痛作用（热板法）（－x±s）

3.1 实验结果小结 经统计学分析，扭体实验各受试组与空白组相比，P＜0.05，有显著性差异；鼠耳肿胀实验各受试组P＞0.05，无显著性差异；热板法实验除单刀根水提液大剂量组，给药30、60、90、120 min后，P＞0.05无显著性差异，单刀根水提液小剂量组，给药90 min后，P＜0.05有显著性差异。单刀根醇提液大剂量组，给药30、90、120 min后，P＜0.05有显著性差异。单刀根醇提液小剂量组，给药30、60、90 min后，P＜0.05有显著性差异。吗啡组给药30 min后，P＜0.05有显著性差异。痛经实验受试组与空白组相比，经统计学分析，各受试组P＜0.05，有显著性差异。

4 讨论

本研究可选方法均为传统、经典镇痛实验方法，成熟、可靠，能不同程度反映受试品的镇痛作用。痛经模型能较好地表现动物疼痛状态，模型组均显100%的疼痛反应。单刀根生药受试品不同程度反映出镇痛作用。单刀根不同溶媒提取物在痛经实验中，结果均与阳性药物数据反映一致，均呈现有镇痛作用。并显一定的量效、时效相关性。对单刀根的镇痛机理和有效部位，还需进一步研究证实，为开发本品做好基础。

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