生脉注射液对酒精性肝损伤大鼠的治疗作用

何锋辉， 王 超， 田如平， 李 贵， 王曜晖

(1.遵义医学院 2007级民族1班， 贵州 遵义 563000；2.遵义医学院 病理生理学教研室， 贵州 遵义 563000)

生脉注射液对酒精性肝损伤大鼠的治疗作用

何锋辉1， 王 超1， 田如平1， 李 贵1， 王曜晖2

(1.遵义医学院 2007级民族1班， 贵州 遵义 563000；2.遵义医学院 病理生理学教研室， 贵州 遵义 563000)

目的研究生脉注射液对酒精性肝损伤大鼠的治疗作用。方法白酒灌胃大鼠复制酒精性肝损伤模型，采用低、高剂量的生脉注射液腹腔注射进行治疗，腹主动脉采血，检测各组血清ALT、AST水平；检测各组肝组织匀浆SOD、MDA水平，以及肝细胞凋亡率。结果酒精灌胃3 d后血清AST增加，与对照组相比，低、高剂量生脉注射液治疗组SOD增加，ALT和AST均降低，肝细胞凋亡率降低，MDA也显著降低，形态学改变不明显。低、高剂量生脉注射液治疗组各组数据无明显差异。结论生脉注射液对酒精性肝损伤大鼠有一定治疗作用。

生脉注射液；酒精；肝损伤；大鼠

酒精性肝损伤已逐渐发展为仅次于病毒性肝炎的第二大肝病[1],目前尚未发现治疗酒精性肝损伤的特效药物。生脉注射液为一种中成药，主要由红参、麦冬、五味子组成[2]，广泛用于治疗心绞痛[3]、、失血性休克[4]、病毒性心肌炎[5]、心肌梗塞等病征[6]。生脉注射液中红参的有效成分为人参皂甙，具有改善循环、调整血压和促进物质代谢等功效[7]；麦冬的有效成分为麦冬皂甙，具有改善心肌收缩力、抗心律失常和抗菌等功效；五味子的有效成分为五味子素，具有增强肝脏解毒功能，促进肝脏蛋白质和糖原生物合成等功效[8]。本课题拟利用生脉注射液对大鼠酒精性肝损伤进行治疗，以检测其对酒精性肝损伤的治疗效果。

1 材料与方法

1.1 动物、药品与试剂 SD大鼠(第三军医大学实验动物中心)、生脉注射液(吉林省集安益盛药业股份有限公司10 ml×10支)、56度红星二锅头(北京红星股份有限公司100ml/瓶)凯基凋亡细胞形态学检测试剂盒(南京凯基生物科技发展有限公司)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase SOD)试剂盒(南京建成生物工程研究所)、丙二醛(Maleic Dialdehyde MDA)试剂盒(南京建成生物工程研究所)、谷丙转氨酶(Alanine Aminotransferase ALT)试剂盒(南京建成生物工程研究所)、谷草转氨酶(Aspartate Aminotransferase AST)试剂盒(南京建成生物工程研究所)。

1.2 实验动物分组 40只雄性SD大鼠，随机分为正常对照组10只，酒精性肝损伤组30只再随机分为生理盐水治疗组(以下简称生理盐水组)、低剂量生脉注射液治疗组(以下简称低生脉治疗组)和高剂量生脉注射液治疗组(以下简称高生脉治疗组)各10只。

2 实验方法

2.1 动物模型的制备 酒精性肝损伤组大鼠每天禁食不禁水6 h后，按0.8 ml/100 g给大鼠灌胃红星二锅头酒(56度)，1 h后重复一次，正常对照组灌服同等量生理盐水，用法同酒精性肝损伤组，连续灌胃5 d。于第5天末次灌胃后2 h(即禁食不禁水9 h后)，各组大鼠腹主动脉采血2 ml，离心后检测各组血清ALT，结果显示酒精性肝损伤组ALT水平明显高于正常组水平，说明酒精性肝损伤模型复制成功[11]。

2.2 动物给药与取材 高生脉治疗组，左下腹腹腔注射生脉注射液(1 ml/100 g)；低生脉治疗组，左下腹腹腔注射生脉注射液(将生脉注射液以生理盐水稀释两倍后按1ml/100g注射)；生理盐水组，同上注射生理盐水(1 ml/100 g)。从白酒灌胃的第3天末开始用药至第5天，每天用药2次，于第5天末次灌胃并注射药2 h后(即禁食不禁水9 h后)，乙醚麻醉，腹主动脉采抗凝血2 ml后处死。于肝右叶切取0.2 cm×0.2 cm×0.5 cm肝组织1块，部分固定于4%的多聚甲醛中(固定时间大于48 h)，用于制作石蜡切片。精确称量200 mg肝组织，用生理盐水4 ml制成5%的肝匀浆液，置37 ℃恒温水浴40 min，取出流水冷却，以3500r/min离心10min，取各组上清液供检测肝匀浆液SOD、MDA。再取部分新鲜肝组织剪碎至1 mm3大小，然后置于100目铜网轻搓，边搓边以生理盐水冲洗。以2 500 r/min离心5 min，弃去上清及细胞碎片，收集细胞悬液；用PBS洗涤细胞二次，并调成浓度为1×106cells/ml细胞悬液，按凯基细胞凋亡形态学检测试剂盒说明书操作进行染色，光镜下观察并计数凋亡细胞数，计算出细胞凋亡率。采血30 min后3 000 r/min离心，分离各组血清，供检测血清ALT、AST。

3 结果

3.1 腹主动脉采血后，检测各组血清ALT、AST水平，结果显示：酒精性肝损伤组ALT、AST水平明显高于正常对照组(P<0.05)，其中高、低生脉治疗组及正常对照组血清ALT、AST水平低于生理盐水组(P<0.05)，而高生脉治疗组血清ALT、AST水平略低于低生脉治疗组，同理低生脉治疗组低于生理盐水组。以上各组血清ALT、AST水平存在显著差异，说明生脉注射液对大鼠酒精性肝损伤的转氨酶有降低作用，具有统计学意义(见表1)。

组 别ALTAST正常对照组18.78±6.41#21.34±9.17#生理盐水组92.36±15.83*80.59±16.22*低生脉治疗组70.58±18.46*#68.73±19.24*#高生脉治疗组63.44±12.78*#65.35±21.26*#

注：*P<0.05与正常对照组比较，#P<0.05与生理盐水组比较。

3.2 检测各组肝组织匀浆液SOD、MDA水平，以及肝细胞凋亡率。其高、低生脉治疗组SOD高于生理盐水组，而低于正常对照组，MDA结果则刚好相反；高、低生脉治疗组肝细胞凋亡率也明显低于生理盐水组。以上各组SOD、MDA水平存在差异性(P<0.05)，具有统计学意义。说明生脉注射液对大鼠酒精性肝损伤有一定的保护作用(见表2)。

组 别SOD(Umgprot)MDA(nmol/mgprot)肝细胞凋亡率正常对照组349.06±20.39#3.57±0.26#2%生理盐水组196.03±33.28*5.93±0.34*23%*低生脉治疗组256.20±25.74*#4.82±0.41*#16%*#高生脉治疗组263.10±32.56*#4.69±0.28*#18%*#

注：*P<0.05与正常对照组比较，#P<0.05与生理盐水组比较

3.3 各组大鼠肝组织病理学检查比较。正常对照组大鼠肝小叶结构清晰， 细胞索排列整齐， 肝细胞无明显病变；生理盐水组肝组织结构紊乱，小叶界限不清，肝窦变窄，肝细胞出现散在和片状气球样变，可见点状坏死和炎症细胞浸润，肝细胞肿胀，胞浆内出现弥漫脂滴，胞核模糊不清。生理盐水组与高、低生脉治疗组无明显差异(见图1)。

注：A：正常对照组；B：生理盐水组；C：低生脉治疗组；D：高生脉治疗组 图1 各组肝脏组织病理切片图(×400)

4 讨论

据2003年对我国4大地区流行病学调查表明，普通人群的饮酒率为59.5%，其中男性为84.6%，女性为4%，其人均年饮酒量为3.6 L纯酒精[9]。据调查2000年至2004年我国酒精性肝损伤构成比分别为2.4%、2.7%、2.8%、3.4%、4.3%，酒精性肝损伤已逐渐发展为仅次于病毒性肝炎的第二大肝病。经常过度饮酒者中有80%以上有脂肪肝，10%～35%可发展为酒精性肝炎，10%～20%可发展为肝硬化[1]。经大量研究证实，饮酒后肝脏中乙醇脱氢酶将乙醇转化为乙醛；当乙醛脱氢酶相对不足时，不能将乙醛转化为无毒的乙酸，使肝脏内脂质过氧化反应增强，其产物对肝细胞膜和线粒体膜造成损伤，导致酒精性肝损伤的发生[10]。本实验选用大鼠为实验对象来复制酒精性肝损伤模型，采用56度红星二锅头灌胃，5 d后检测血清谷丙转氨酶活性(ALT)，显示血清ALT高于正常水平，说明模型复制成功[11]。

酒精可直接通过胃肠道黏膜吸收，进入血液循环，其中约90%在肝脏的乙醇脱氢酶等作用下转化成为乙醛，乙醛具有很强的毒性，不仅能和蛋白质结合引起酶的失活，影响DNA的修复，还能显著影响肝脏对氧的利用，减少SOD的含量，促进自由基介导的组织损害及脂质过氧化作用[11]。ALT、AST主要存在于肝细胞中，ALT主要存在于肝细胞浆中，AST主要存在于肝细胞浆之线粒体中。病理情况下自由基过多会造成肝细胞损伤，受损的肝细胞释放ALT、AST，因此血清中的ALT、AST活性增加，所以检测血清ALT、AST能从侧面反应肝细胞是否正在受到损伤。

实验过程中发现：高、低生脉治疗组血清ALT、AST水平均低于生理盐水组，略高于正常对照组，而高、低生脉治疗组肝匀浆液SOD高于生理盐水组，低于正常对照组，MDA结果则刚好相反，肝细胞凋亡率也低于生理盐水治疗组，说明生脉注射液对大鼠酒精性肝损伤有一定的保护作用。可能主要是生脉注射液中五味子的作用，五味子的有效成分为五味子素，具有增强肝脏解毒功能，促进肝脏蛋白质和糖原生物合成等功效；可能是由于影响了机体的氧化还原体系，减轻了自由基等对肝细胞的损伤；也可能其他成分起到一定的疗效，具体的作用机制不详。但是高、低生脉治疗组的肝损伤与生理盐水组相比较，改善并不明显，由此也不能下结论说生脉注射液对肝脏结构无改善作用，其可能是由于本实验时间所限，无法观察到此现象。

本实验采用生脉注射液对酒精性肝损伤大鼠进行治疗，生脉注射液在临床上主要用来治疗休克等疾病，部分临床医生也用其治疗急性酒精中毒[12]。本实验中结果发现生脉注射液对酒精性肝损伤有一定的治疗作用，为酒精性肝损伤治疗提供新的可能治疗措施。

[1] 全国酒精性肝病调查协作组.全国酒精性肝病的多中心调查分析[J].中华消化杂志，2004，27(4):231-234.

[2]夏晶，王钢力，季申，等.HPLC测定生脉注射液中4种成分的含量[J].中成药，2006，28(1)：27-31.

[3]刘桂华，王文萱.黄芪、生脉注射液治疗冠心病心绞痛临床观察[J].中国现代医生，2009，47(16)：82-83.

[4]王开云.生脉注射液治疗失血性休克 38 例[J].吉林中医药，2008，28(8)：576.

[5]杜丽萍，刘宏明，王学磊，等.生脉、黄芩联合治疗急性重症病毒性心肌炎[J].中国医药指南，2008，6(3)：105-106.

[6]丁小飞，陈光，刘玉兰.注射用生脉对心源性休克的影响[J].中国医药杂志，2007，32(21)：2299.

[7]陈燕.鲜人参生晒参和红参的比较研究[J].海峡药学，2006，4(18)：137.

[8]白晶，于治国.HPLC法测定生脉注射液和注射用生脉中五味子醇甲[J].中草药，2009，40(5)：742-743.

[9]庄辉.酒精性肝病的流行病学[J].中华肝脏病杂志，2003，11(11)：689.

[10]陈彗敏，高南南.中药抗氧化作用治疗酒精性肝损伤的研究进展[J].中国中医药杂志，2009，24(27)：192.

[11]朱平生，庞亚丽，王宇亮，等.大鼠急性酒精性肝损伤模型的脂质过氧化损伤观察[J].中华中医药杂志，2006，21(6)：376-377.

[12]刘振东，魏育生.生脉注射液治疗急性酒精中毒60 例临床分析[J]. 四川医学，2000，21(5)：462.

Therapeuticeffectsofshengmaiinjectiononalcohol-inducedliverinjuryinrats

Hefenghui1，Wangchao1，Tianruping1，Ligui1，Wangyaohui2

(1. National class 1，Grade 2007，Zunyi Medical College，Zunyi，Guizhou，563000，China；2.Pathophysiology department , Zunyi Medical College，Zunyi，Guizhou，563000，China)

ObjectiveTo determine the therapeutic effects of shengmai injection on the alcohol-induced liver injury in rats.MethodsRats were administered intragastrically with liquor to duplicate the alcohol-induced liver injury model and then were given intraperitoneal injection of lower and higher doses of shengmai injection. The serum alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase.(AST) in abdominal aorta were detected. The superoxide dismutase (SOD) and malondialdehyde (MDA) levels in hepatic tissue and cell apoptosis were measured.ResultsCompared with the control group, AST level was increased after intragastrical administration with liquor for 3 days. Compared with the model group, the lower and higher doses of shengmai injection increased SOD contents, decreased ALT and AST levels and cell apoptosis and MDA level. However, no morphological Changes were seen. Furthermore, there was no significant difference between lower and higher doses of shengmai injection groups.ConclusionShengmai injection has therapeutic effects on alcohol-induced liver injury in rats.

Shengmai injection; alcohol; liver injury; rat

R605.97

A

1000-2715(2012)01-0021-03

遵义医学院大学生创新性实验计划支持项目(NO：[2010]1702)。

王曜晖，男，副教授，研究方向：肥胖症的发生机制及防治。E-mail:wangyaohui@yeah.net。

[收稿2011-09-12;修回2011-11-21]

(编辑：谭秀荣)