HPLC测定骨伤洗剂中乌头碱的含量

陈丽娟

（广东省中医院，广东 广州 510120）

HPLC测定骨伤洗剂中乌头碱的含量

陈丽娟*

（广东省中医院，广东 广州 510120）

目的：建立骨伤洗剂中乌头碱的HPLC含量测定方法。方法：Agilent C18（250 mm×4.6 mm，5.0μm）色谱柱和Agilent C18（20 mm×4.6 mm，5.0μm）预柱；流动相为0.2%冰醋酸（用三乙胺调至pH 6.25） －乙腈（70∶30），检测波长：235 nm；流速1.0 mL·min－1。结果乌头碱在0.094～2.350μg（r＝0.998 5）线性关系良好，加样回收率为98.25%，RSD＝2.09%。结论：方法简便，结果准确，可用于骨伤洗剂的质量控制。

骨伤洗剂；乌头碱；高效液相色谱法；含量测定

骨伤洗剂具有舒筋活络，驱风散瘀，消肿止痛的功效，对骨伤的康复治疗有较好疗效，是我院骨科的临床常用药。处方主要由生川乌、生草乌、桂枝等5味药组成。其中川乌、草乌具有祛风除湿，温经止痛作用。用于风寒湿痹，关节疼痛，心腹冷痛，寒疝作痛，麻醉止痛［1］。二者为方中的毒性药。而乌头碱是川乌草乌中主要有效成分，口服0.2 mg就令人中毒，3～4 mg就会将人毒死［2］。为有效控制该产品的内在质量，建立了高效液相色谱法测定样品中乌头碱的含量。

1 仪器与试药

Waters 2695高效液相色谱仪（2695 Separation Module，2998 Photodiode Array Detector）；Sartorius BP121S电子天平；骨伤洗剂（广东省中医院制剂室生产，140 g／包，批号：050901，060301，070901）；乌头碱对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110720-200410，纯度99%）；甲醇为色谱纯，高纯水，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为Agilent C18（250mm×4.6mm，5.0μm）色谱柱和Agilent C18（20 mm×4.6 mm，5.0μm）预柱；流动相为0.2%冰醋酸（用三乙胺调至pH 6.25）－乙腈（70∶30），流速：1.0 mL·min－1；检测波长：235nm；柱温为室温。

2.2 溶液的制备

2.2.1 乌头碱对照品溶液制备 取五氧化二磷减压干燥至恒重的乌头碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成含乌头碱0.047 0 mg·mL－1的溶液，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液制备 用四分法取本品约5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醚－氨水（7∶1）80 mL，密塞，浸泡过夜，滤过，药渣用乙醚－氨水（7∶1）洗涤2次，每次20 mL，滤过，滤液挥干，用甲醇定容于10 mL容量瓶，再取1 mL于5 mL容量瓶用甲醇定容，即得供试品溶液。

2.3 线性关系考察

将0.047 0 mg·mL－1乌头碱对照品溶液分别进样2，5，10，20，50μL测定，以乌头碱进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。结果表明乌头碱在0.094～2.350μg呈良好线性关系，回归方程：Y＝1.54×106X－4.53×104，r＝0.998 5，色谱图见图1。

2.4 稳定性试验

取同一供试品（批号060301）溶液分别在0，2，4，6，8，10 h进行测定，RSD＝1.84%，表明样品溶液在10 h内稳定。

2.5 精密度试验

取0.047 mg·mL－1对照品溶液连续6次进样，每次20μL，依法测定，结果乌头碱峰面积（n＝6）的RSD＝1.03%。

图1 骨伤洗剂样品和乌头碱对照品溶液HPLC图

2.6 重现性试验

取同一批供试品（批号060301）6份，分别按供试品溶液制备方法制成供试品溶液，依法测定，结果测得乌头碱平均含量为0.918 6mg·g－1，RSD＝1.16%。

2.7 回收率试验

取已知含量的供试品6份（批号050901）约2.5 g，分别加入乌头碱对照品（1.01mg·mL－1）2mL，按供试品溶液制备方法操作，依法测定。结果乌头碱的平均回收率为98.25%，RSD＝2.09%，见表1。

表1 乌头碱加样回收率试验

2.8 样品测定

取3批供试品，按供试品溶液制备方法制备，每次进样量为10μL测定，结果见表2，色谱图见图1。

表2 骨伤洗剂中乌头碱含量测定结果（n＝3）／mg·g－1

3 讨论

实验中用四分法取5 g样品制备供试品溶液是由于骨伤洗剂饮片的粉碎粒度较大，取样较少时样品欠均匀，这种方法取样保证样品含量的准确性。最后采取稀释供试品溶液再进样的方式。

我们曾尝试用薄层鉴定法作为骨伤洗剂中乌头碱的限量检查，虽然显色稳定性好，但精密度不高，不能准确测定出药品中乌头碱含量，用高效液相检测乌头碱的含量能准确反映出药品的毒性水平，较好地指导生产和各工艺指标的调整。

乌头碱生理活性强，既是有效成分，也是毒性成分，对其含量的测定，有利于临床用药安全。在流动相比例的选择上，曾采用甲醇 －水（65∶35）、（70∶30），但分离效果都不理想，最后以0.2%冰醋酸（用三乙胺调至pH 6.25） －乙腈（70∶30）为流动相，分离效果好。本法乌头碱的平均回收率较高，是一种简便、快速、准确的测定方法，为制定骨伤洗剂质量标准提供了可靠的依据。

［1］国家药典委员会.中国药典［S］.一部.北京：中国医药科技出版社，2010：220.

［2］许廷生，梁秀兰.川乌的炮制及中毒救治［J］.中国药物与临床，2002，2（6）：414.

Determ ination on the Content of Aconitine in Gushang-Xiji by HPLC

Chen Li-juan
（Guangdong Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine，Guangzhou510120，China）

Objective：To establish a methed for the determination the contents of aconitine in Gushang-Xiji.M ethods：An Agilent C18（250 mm×4.6 mm，5.0μm）Column was used with mobile phase being 0.2%Acetic adjuested with Triethylamine to pH 6.25-Acetonitrile（70∶30），detecting wavelength of 235 nm.Results：Linearitieswas good at 0.094～2.350μg（r＝0.9 985）.The average recover rate was 98.25%（RSD＝2.09%）.Conclusion：Themethod is accurate and reliable，can be used to determinate aconitine in Gushang-Xiji.

Gushang-Xiji；Aconitine；HPLC；Determination

*［通讯作者］陈丽娟，E-mail：olay22＠163.com

2012-04-18）