冷冻联合125I粒子植入治疗对Ⅳ期胰腺癌患者组织CEACAM6表达的影响

曾健滢 周序珑 姚飞 刘卫群 陈继冰 李家亮 牛立志 左建生 徐克成

冷冻联合125I粒子植入治疗对Ⅳ期胰腺癌患者组织CEACAM6表达的影响

曾健滢 周序珑 姚飞 刘卫群 陈继冰 李家亮 牛立志 左建生 徐克成

冷冻消融作为近年兴起的肿瘤消融治疗的手段之一，目前已应用于治疗不能手术切除的胰腺肿瘤[1-4]。近年有报道指出，经皮冷冻联合125I粒子植入治疗是一种可降低肿瘤负荷、消除残存肿瘤组织、有效延长患者生存期的微创联合治疗方法[5-6]。癌胚抗原相关细胞附着分子6(carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 6，CEACAM6)属于CEA家族中一种具有癌基因功能的黏附分子蛋白，在胰腺癌发生的早期即表达，被认为是一种新的胰腺癌标记物。Duxbury等[7]报道，92%的胰腺癌组织表达CEACAM6，且其表达水平与癌分化程度有密切关系。本研究观察冷冻联合125I粒子植入治疗胰腺癌后，癌组织CEACAM6表达的变化，评估该联合疗法的应用价值。

一、材料与方法

1．标本来源：收集广州复大肿瘤医院2010年7月至2011年11月应用冷冻联合125I粒子植入治疗的4例原发性胰头癌患者，其中男性3例，女性1例，平均年龄55岁。肿瘤长径4.7～6.0 cm。TNM分期皆为Ⅳ期。1例伴肝动脉淋巴结转移，2例伴肝转移，1例伴肝、肺转移。1例因胰腺癌侵犯胃窦部十二指肠降部曾行胆肠吻合术，1例因十二指肠梗阻曾行胆总管支架植入术及胃肠吻合术，1例因皮肤及巩膜黄染，肝内胆总管、胰管扩张曾行3个胃肠吻合术，1例伴胰动、静脉侵犯。冷冻前当天及冷冻后7 d，在B超引导下用18G活检钳从病灶处不同方向取组织2条，置中性甲醛固定。

2．冷冻消融治疗及125I粒子植入：患者取仰卧位，用B超加CT扫描定位后将2～4支1.7 mm冷冻探针于穿刺点插入胰腺头部肿块靶区内。在B超确认探针到位并未伤及胃肠道后，视肿瘤大小冷冻3～10 min。冷冻温度为-110～-170℃。冷冻术后，取PET/CT显示有活性处为靶区，在B超引导下用PTC针从穿刺点分别插入胰头部肿块的靶区内布粒子，125I粒子间隔0.5～1 cm，记录总活度及半衰期。

3．肿瘤组织病理学检查及CEACAM6蛋白检测：胰腺组织常规行病理学检查。采用ChemMate EnVision HRP试剂盒检测样本的CEACAM6蛋白，严格按说明书操作。用已知阳性片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。对全片染色强度较低的病例随机选取5个视野，对全片染色强度较高病例则随机选取1个视野，每个40倍视野至少有200个可用于评价的肿瘤细胞。参考McCarty等[8]标准进行评分。

二、结果

1．组织病理学改变：冷冻联合125I粒子植入治疗前肿瘤细胞大小不等，圆形或卵圆形，核大深染，染色质粗，呈乳头状排列，有不规则腺腔结构；治疗后肿瘤中心区凝固性坏死，坏死边缘区纤维组织内见少量肿瘤细胞(图1)。

a:治疗前(HE ×400)；b:治疗后肿瘤坏死中心(HE ×400)；C:治疗后肿瘤坏死边缘(HE ×200)

图1冷冻联合125I粒子植入治疗前后胰腺癌组织病理变化

2．肿瘤组织CEACAM6表达：CEACAM6阳性表达主要定位于肿瘤细胞的胞膜和胞质内，呈棕黄色颗粒状。冷冻联合125I粒子植入治疗前胰腺癌细胞呈强阳性反应；治疗后肿瘤坏死中心区残余细胞碎片示非特异性染色，坏死边缘区肿瘤细胞呈弱阳性反应。治疗前后胰腺癌细胞CEACAM6表达评分分别为(1.12±0.08)和(0.75±0.22)分，差异有统计学意义(P= 0.013，图2)。

a:治疗前(IHC ×400)；b:治疗后肿瘤坏死中心(IHC ×400)；c:治疗后肿瘤坏死边缘(IHC ×200)

图2冷冻联合125I粒子植入治疗前后胰腺癌组织CEACAM6表达

讨论冷冻消融时，冷冻探针在靶组织区形成的冰球只有大于靶病变边缘至少1 cm时才能保证靶组织完全处于有效冷冻区域内[9]。对于中晚期胰腺癌而言，肿瘤较大且边缘多不规则，特别是位于胰腺头部或钩突部肿瘤，常无完整的“安全边缘”[10-12]，冷冻形成的冰球难以覆盖足够宽的安全边缘的肿瘤。因此，在冷冻后的肿瘤冷冻区边缘部位植入放射性粒子，通过其发出的持续低能伽马射线，可起到对残余的肿瘤细胞及肿瘤干细胞持续杀灭作用。

CEACAM6是免疫球蛋白超家族甘油磷酸肌醇(GPI)相关成员，其N端有由108个氨基酸组成的免疫球蛋白可变区(IgV)样结构域和6个免疫球蛋白恒定区(IgC)2型样结构域，通过糖基磷脂酰肌醇连接在细胞膜上。它与多种恶性实体肿瘤的发生、发展及预后有着密切的相关性[13-16]。Kalinina等[17]报道，大鼠胰腺癌种植瘤CEACAM6的过表达与胰腺癌细胞黏附、侵袭、恶性转移、肿瘤细胞化疗敏感性及抗凋亡等生物学行为密切相关；下调种植瘤CEACAM6的表达可以减少微血管形成、抑制肿瘤生长和转移，提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。

本研究结果显示，治疗前癌组织CEACAM6强阳性表达，治疗后冷冻中心区的胰腺肿瘤细胞完全坏死，但由于肿瘤过大，边缘不规则，边缘区残存少量癌细胞。这些癌细胞的CEACAM6表达呈弱阳性，表明冷冻联合125I粒子植入疗法可下调残存癌细胞CEACAM6的表达，提示该疗法还可以抑制残余肿瘤细胞的增殖与生长，降低肿瘤复发和转移的可能性。

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10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2012.06.016

海珠区科技计划项目(2010-Y-27)

510305 广州，中国科学院广州生物院附属复大医院，广州复大肿瘤医院中心实验室

牛立志，Email:fudaclab@gmail.com

2012-03-16)

(本文编辑：吕芳萍)