RP-HPLC同时测定维吾尔药材无花果叶中芦丁和补骨脂素含量△

尼加提·沙吾提，鱼洋，苏来曼·哈力克*

(1.新疆维吾尔自治区食品药品检验所，新疆 乌鲁木齐 830002；2.新疆医科大学第一附属医院 药学部，新疆 乌鲁木齐 830011)

RP-HPLC同时测定维吾尔药材无花果叶中芦丁和补骨脂素含量△

尼加提·沙吾提1，鱼洋2，苏来曼·哈力克1*

(1.新疆维吾尔自治区食品药品检验所，新疆 乌鲁木齐 830002；2.新疆医科大学第一附属医院 药学部，新疆 乌鲁木齐 830011)

目的建立维吾尔药材无花果叶薄层色谱鉴别及HPLC含量测定方法。方法采用薄层色谱法鉴别无花果叶；使用Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm),流动相：甲醇-0.4%磷酸(40∶60)；流速：1.0 mL·min-1；检测波长：245 nm;柱温：25 ℃；同时测定无花果叶中芦丁和补骨脂素含量。结果薄层色谱法鉴别色谱斑点清晰，专属性强；芦丁和补骨脂素含量测定线性范围分别为0.102 4～1.024 μg，r=0.999 8,n=5；0.041～0.717 5 μg，r=0.999 9,n=5。芦丁平均回收率为103.7%(RSD=0.89%，n=6)，补骨脂素平均回收率为90.9%(RSD=1.67%，n=6)。结论该方法简便、准确，专属性强，可用于无花果叶药材的质量控制。

维吾尔药材；无花果叶；芦丁；补骨脂素；HPLC

无花果叶为桑科榕属植物无花果FicuscaricaL.的干燥叶片[1]。无花果树是古老的树种，《圣经》和《古兰经》里就有记载。国外主要分布于地中海沿岸，上至土耳其下至阿富汗。我国唐代由波斯(伊朗)传入，新疆南疆地区广泛栽培，全国其他省份有少量栽培，资源丰富[2-3]。无花果全身是宝，维吾尔语称“Anjur”，音译为“安居尔”，阿拉伯语和波斯语也称“Anjur”。无花果树是维吾尔人庭院绿化的重要树种，鲜果是新疆常食的一种珍贵水果，而无花果干和无花果叶则为传统维吾尔药材。无花果叶在维吾尔医临床主要用于治疗白癜风、痔疮、小儿腹泻等症[4]。近年来对于无花果及其叶的化学成分的研究正在逐步深入，无花果作为药食兼优的植物，尤其是它的抗白癜风、抗肿瘤、抗氧化、降血脂、降血糖等作用令人关注[5-8]。无花果叶中含有补骨脂素、香柠檬内酯、佛手柑内酯、β-谷甾醇、β-香树脂醇、蛇麻脂醇、棕榈酸、颉草酸、愈创木酚、二十八烷、芦丁等多种化学成分，另含挥发油，锶、锰、铁、铜、锌、铬、镍、硒、钴、镁、钙等微量元素[5,9-11]。目前《卫生部药品标准·维吾尔药分册》中收载的“消白白热斯酊剂”处方中的君药就是无花果叶。目前未见无花果叶质量分析的报道。因此，本文对不同产地无花果叶进行薄层色谱鉴别；以无花果叶中芦丁与补骨脂素为指标性成分，采用高效液相色谱法同时对其进行测定，为建立无花果叶药材质量标准提供科学依据，从而进一步推动新疆维吾尔药无花果叶相关药品的研究、开发和利用。

1 材料与仪器

1.1 供试品

10批不同产地的无花果叶：(1)阿图什松塔乡(2004年7月采集)；(2)和田市医药专科学校(2006年10月采集)；(3)喀什白什克拉木乡(2006年8月采集)；(4)喀什庭院(2006年8月采集)；(5)阿图什(2006年9月采集)；(6)新和县(2006年10月采集)；(7)吐鲁番(2006年10月采集)；(8)乌鲁木齐盆栽(2006年9月采集)；(9)湖北武汉(2007年4月采集)；(10)江西都昌(2007年4月采集)。上述样品经苏来曼·哈力克主任药师鉴定为桑科植物无花果FicuscaricaL.的干燥叶。

芦丁对照品(批号：0880-9504，含量测定用)、补骨脂素对照品(批号：110739-200310，含量测定用)购于中国食品药品检定研究院。甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂为分析纯。

1.2 仪器

Waters高效液相色谱仪(USA)；2487 DualλAbsorbance Detector,1525 Binary HPLC Pump,717 Autosampler; Nextpure Ultra Pure Water System(Korea); KUDOS SK7210LHC超声仪(59 kHz,350 W)。

2 方法与结果

2.1 无花果叶的薄层色谱鉴别

2.1.1 供试品溶液的制备 分别称取8个不同产地的无花果叶0.5 g置5 mL具塞试管中，加入甲醇1 mL超声10 min，取上清液作为供试品溶液。

2.1.2 对照品溶液的制备 分别取芦丁和补骨脂素对照品加甲醇制成每1 mL各含4 mg芦丁和2 mg补骨脂素的溶液作为对照品溶液。

2.1.3 薄层色谱试验 分别吸取上述溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸丁酯-甲酸-水(10∶2.5∶2.5)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下(365 nm)检视。供试品色谱中，在与芦丁和补骨脂素对照品色谱相对应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。见图1。

图1 无花果叶薄层色谱图

2.2 HPLC测定无花果叶中芦丁和补骨脂素的含量

2.2.1 色谱柱和流动相的选择 选用KromasiL C18柱，流动相：甲醇-0.4%磷酸(40∶60)；流速：1.0 mL·min-1；柱温：25 ℃；检测波长：245 nm。在选定的色谱条件下，芦丁、补骨脂素和供试品中其他组分色谱峰可达到基线分离，芦丁、补骨脂素与其相邻色谱峰的分离度符合要求。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取105 ℃干燥至恒重的芦丁对照品2.56 mg，置25 mL容量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(0.102 4 mg·mL-1)。精密称取置五氧化二磷干燥的补骨脂素对照品2.05 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(0.041 0 mg·mL-1)。分别进样10 μL,即得。

2.2.3 供试品溶液的制备 取无花果叶适量，研细，精密称取0.5 g，置50 mL量瓶中，加50%甲醇约40 mL,超声处理30 min，放置至室温，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液，进样10 μL,以外标法计算含量。

2.2.4 系统适用性试验 按上述色谱条件，精密称取无花果叶0.500 7g，照供试品制备方法制备供试品溶液，注入液相色谱仪10 μL，记录色谱图，芦丁和补骨脂素的保留时间分别为11.6 min 和21.9 min，芦丁和补骨脂素与其相邻色谱峰的分离度符合要求，理论版数按芦丁峰计算不得低于6 000。供试品与对照品色谱图见图2。

图2 对照品与无花果叶样品HPLC图

2.2.5 标准曲线的制备

2.2.5.1 补骨脂素标准曲线 精密称取补骨脂素对照品2.05 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得0.020 5 mg·mL-1的溶液，即20.5 μg·mL-1的溶液。分别取1,2,5,15,25,35 μL进样，以进样量(μg)为横坐标，峰面积(Au)为纵坐标，做标准曲线，得回归方程Y=8 772 431.4X-8 356.1，r=0.999 9。结果表明补骨脂素进样量在0.041～0.717 5 μg线性关系良好。

2.2.5.2 芦丁标准曲线 精密称取芦丁对照品2.56 mg，置25 mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，即得0.102 4 mg·mL-1的溶液，即102.4 μg·mL-1的溶液。分别取1,2,5,7,10 μL进样，以进样量(μg)为横坐标，峰面积(Au)为纵坐标，做标准曲线，得回归方程Y=1 580 896.5X-46 208.6，r=0.999 8；结果表明芦丁在0.102 4～1.024 μg有较好的线性关系。

2.2.6 精密度试验 取无花果叶样品(产地阿图什)1份，精密称取0.505 1g，按上述方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下，连续进6针，每针10 μL，记录峰面积，计算，结果芦丁和补骨脂素的RSD分别为2.10%和0.29%，结果仪器精密度良好。

2.2.7 重复性试验 取无花果叶样品(产地阿图什)0.5 g，精密称取6份，按上述方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下，每份进针10 μL，记录峰面积，计算，结果芦丁和补骨脂素的RSD分别为2.30%和1.27%，说明方法重复性良好。

2.2.8 稳定性考察 取新制备的同一份供试品溶液，分别在室温放置0，1，2，4，12，24 h时进样，记录色谱图，测得芦丁和补骨脂素峰面积的RSD分别为1.4%和1.1%(n=6),结果表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.2.9加样回收率试验 取已知含量的无花果叶样品(和田)6份，每份0.25 g，精密称定，分别置50 mL量瓶中，分别精密加入浓度为0.400 8 mg·mL-1补骨脂素对照品溶液0.8,0.8,1.0,1.0,1.5,1.5 mL,再分别加入浓度为0.630 8 mg·mL-1的芦丁对照品溶液1.5,1.5,2.0,2.0,2.5,2.5 mL，按上述供试品制备方法操作，在上述色谱条件下进行分析，并根据加入量计算回收率。测定结果见表1、2。

表1 芦丁回收率试验结果

表2 补骨脂素回收率试验结果

2.2.10 样品的测定 分别取不同产地的无花果叶样品，按上述方法制备供试品溶液，紧密吸取供试品溶液10 μL，在上述色谱条件下进样，以外标法计算芦丁和补骨脂素含量，结果见表3。

表3可以看出无花果叶中芦丁和补骨脂素含量分别为0.055 6%～0.716%、0.090 6%～0.624%。其中湖北和江西产的芦丁含量低，吐鲁番产的芦丁和补骨脂素含量都低，喀什庭院栽培的补骨脂素含量低，当年产的新货和放置两年的陈货含量有差异。

表3 不同产地无花果叶含量测定结果(n=2) /%

3 讨论

3.1 检测波长的选择

文献报道补骨脂素HPLC法测定多用245 nm或340 nm为检测波长，芦丁则为340 nm或360 nm[12-13]。通过预试验证明选用245 nm为芦丁和补骨脂素同一检测波长，此波长下两者的峰面积值最大，芦丁与补骨脂素得到基线分离。

3.2 提取溶剂的确定

分别用50%、70%、100%的甲醇提取同一产地的无花果叶，结果用50%的甲醇提取溶液，芦丁与补骨脂素的峰面积最大且经济。

3.3 提取时间的确定

用50%甲醇作为溶剂提取同一产地的无花果叶，分别超声10，20，30 min，结果提取30 min的芦丁和补骨脂素的峰面积最大。

3.4 实验方法评价

实验建立的维吾尔药材无花果叶薄层色谱鉴别及HPLC含量测定方法，简便、准确，专属性强，可用于无花果叶药材的质量控制。

[1] 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志[M].北京：科学出版社，1979：66.

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[12] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：36，129.

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RP-HPLCDeterminationofRutinandPsoraleninLeavesofFicuscaricaL.

Nijat SAWUT1, YU Yang2, Suleyman HALIK1

(1.XinjiangUygurAutonomousRegionInstitueforFoodandDrugControl，Urumqi830002,China; 2.ThePhamacySectionofTheFirstTeachingHospitalofXinjiangMedicalUniversity,Urumqi830011,China)

Objective: To establish a HPLC method for determination of rutin and psoralen in Leaves ofFicuscaricaL..MethodsFig Leaves were identified by TLC; The separation was performed on Kromasil C18column (250 mm×4.6 mm，5 μm), with methaonl-0.4% phosphoric acid (40∶60) as mobile phase， a flow rate of 1.0 mL·min-1. The UV detection wavelength was 245 nm. The column temperature was 25 ℃.ResultsThe calibration curves of rutin were linear in the ranges of 0.102 4～1.024 μg(r=0.999 8,n=5). The calibration curves of psoralen were linear in the ranges of 0.041～0.717 5 μg(r=0.999 9,n=5). The average recoveries of rutin and psoralen were 103.7% and 90.9%, respectively.ConclusionThe method is simple, accurate and sensitive. It can be used for quality control of fig leaves.

Fig Leaves;FicuscaricaL.; Rutin; Psoralen; HPLC

新疆维吾尔自治区科学研究和技术开发(含攻关)项目(200633127)

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苏来曼·哈力克，Tel:(0991)2305956，E-mail:suleyman@sina.cn

2012-09-10)