HPLC法测定风寒感冒颗粒中5-0-甲基维斯阿米醇苷的含量

魏桂蓉

风寒感冒颗粒由麻黄、葛根、紫苏叶、防风等十一味药组成［1］，具有解表发汗，疏散风寒等功效。用于风寒感冒，发热，头痛，恶寒，无汗，咳嗽，鼻塞，流清涕等。5-0-甲基维斯阿米醇苷是防风中有效成分之一，具有祛风解表、胜湿止痛，止痉等作用［2］。本品现标准中尚无含量测定项目，为有效控制风寒感冒颗粒内在质量，笔者选用5-0-甲基维斯阿米醇苷作为含量测定指标并加以控制，建立风寒感冒颗粒中5-0-甲基维斯阿米醇苷HPLC含量测定方法，结果表明该方法准确，可靠，重复性好，可用于本品的质量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器 岛津LC-20AT系列高效液相色谱仪(日本岛津)，METTLER XS-105电子天平。

1.2 试药 5-0-甲基维斯阿米醇苷对照品(中国药品生物制品检定所，含量测定用，批号111523-201007);风寒感冒颗粒(通化长青药业股份有限公司提供，规格:每袋8克，批号107001、102110、090931);甲醇为色谱纯，自制纯化水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:phenomenex Luna-C18柱(200 mm×4.60 mm，5 μm);流动相:甲醇-水(35 ∶65);流速:1.00 ml/min;检测波长:254 nm; 柱温:28℃;进样量:10.00 μl。

2.2 对照品溶液制备 取5-0-甲基维斯阿米醇苷对照品7.01 mg，置50 ml棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得储备液(140.2 μg/ml)。精密量取储备液5 ml，置50 ml棕色量瓶中加甲醇稀释至刻度，即得(每1 ml含5-0-甲基维斯阿米醇苷 14.02 μg)。

2.3 供试品溶液制备 精密称取本品3.0 g，加甲醇25.00 ml，称重，超声1 h，用甲醇补足减失重量，滤过，即得。

2.4 阴性对照溶液制备 按处方配比(缺防风药材)照工艺制备成模拟颗粒，按“2.3”项下的方法制成阴性对照溶液。

2.5 干扰试验 照上述色谱条件，将对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10.00μl，分别注入液相色谱仪，色谱图见图1。供试品色谱图中，在与对照品色谱图相应的保留时间处，有相同的色谱峰，而阴性对照溶液无干扰峰。

图1 风寒感冒颗粒中5-0甲基维斯阿米醇苷HPLC图

2.6 线性关系考察 将上述5-0-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液(14.02 μg/ml)，分别精密进样 2、6、10、14、18、22 μl，按上述色谱条件测定，以平均峰面积为纵坐标，以进样量为横坐标，得方程:Y=2.21×106X-1.09×104，r=0.9997，线性范围为0.02804 ～0.3084 μg。

2.7 精密度试验 取对照品溶液(14.02μg/ml)连续进样6次，每次10.00 μl，记录峰面积，RSD为0.82%，表明精密度良好。

2.8 稳定性试验 取供试品溶液(批号107001)，分别于0、4、8、12、16、24 h 进样 10.00μl，测得样品中 5-0-甲基维斯阿米醇苷峰面积的RSD为1.03%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.9 重复性试验 精密取同一批号样品(批号为107001)6份，按“2.3”项下的方法制备供试品溶液，依法测定，结果5-0-甲基维斯阿米醇苷含量的RSD为0.95%，表明本法重复性较好。

2.10 加样回收率试验 量取已知5-0-甲基维斯阿米醇苷含量为0.1259 mg/g的样品9份(批号为107001)，每份1.5 g，3份一组，每组分别按对照品溶液浓度的80%、100%、120%的量加入对照品，按“2.3”项下的方法制备供试品溶液，计算回收率，结果见表1。

表1 风寒感冒颗粒中5-0-甲基维斯阿米醇苷的回收率试验结果(n=9)

2.11 样品含量测定 取3批样品，按“2.3”项下的方法制备供试品溶液，进样10.00 μl，照外标法(峰面积)计算5-0-甲基维斯阿米醇苷的含量，结果:批号107001，含量0.1259 mg/g、批号 102110，含量 0.1282 mg/g、批号 090931，含量0.1107 mg/g。

3 讨论

3.1 本品为含糖的颗粒剂，曾采用了①正丁醇提取，滤过，滤液蒸干，用甲醇溶解定容;②甲醇提取，蒸干，用水溶解后，再用正丁醇萃取［3］结果表明两种方法提取率偏低，回收率偏低，最后用甲醇超声1 h可以提取完全，回收率好。

3.2 本文用甲醇提取，杂质比较多，曾采用流动相甲醇-0.1%冰醋酸，梯度洗脱［4］，基线不平稳，影响积分准确性，且用时太长;又考察了甲醇-水(44∶56)［3］、甲醇-水(40∶60)［2］，分离效果均不理想。最后用甲醇-水(35∶65)为流动相，分离效果好，且峰型好，理论板数高。

3.3 从线性，回收率，重复性，溶液稳定性等实验结果可以看出，用HPLC法测定风寒感冒颗粒中5-0-甲基维斯阿米醇苷的含量，准确性高，重现性好，且操作简便快速。

［1］ 卫生部药品标准中药成方制剂地一册，45.

［2］ 中国药典委员会.中国药典.2010年版.一部，2010:140.

［3］ 李玲.高效液相色谱法测定感冒清热颗粒中5-0-甲基维斯阿米醇苷的含量.中国中医药信息杂志，2009，16(4):43-44.

［4］ 江丽，钟国庆，龚春燕，等.HPLC法测定复方防风胶囊中两成分的含量.中国药师，2010，(8):1128-1130.