HPLC法测定风寒感冒颗粒中5-0-甲基维斯阿米醇苷的含量

2012-11-01 03:57魏桂蓉
中国现代药物应用 2012年1期
关键词:维斯阿米风寒

魏桂蓉

风寒感冒颗粒由麻黄、葛根、紫苏叶、防风等十一味药组成[1],具有解表发汗,疏散风寒等功效。用于风寒感冒,发热,头痛,恶寒,无汗,咳嗽,鼻塞,流清涕等。5-0-甲基维斯阿米醇苷是防风中有效成分之一,具有祛风解表、胜湿止痛,止痉等作用[2]。本品现标准中尚无含量测定项目,为有效控制风寒感冒颗粒内在质量,笔者选用5-0-甲基维斯阿米醇苷作为含量测定指标并加以控制,建立风寒感冒颗粒中5-0-甲基维斯阿米醇苷HPLC含量测定方法,结果表明该方法准确,可靠,重复性好,可用于本品的质量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器 岛津LC-20AT系列高效液相色谱仪(日本岛津),METTLER XS-105电子天平。

1.2 试药 5-0-甲基维斯阿米醇苷对照品(中国药品生物制品检定所,含量测定用,批号111523-201007);风寒感冒颗粒(通化长青药业股份有限公司提供,规格:每袋8克,批号107001、102110、090931);甲醇为色谱纯,自制纯化水,其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:phenomenex Luna-C18柱(200 mm×4.60 mm,5 μm);流动相:甲醇-水(35 ∶65);流速:1.00 ml/min;检测波长:254 nm; 柱温:28℃;进样量:10.00 μl。

2.2 对照品溶液制备 取5-0-甲基维斯阿米醇苷对照品7.01 mg,置50 ml棕色量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得储备液(140.2 μg/ml)。精密量取储备液5 ml,置50 ml棕色量瓶中加甲醇稀释至刻度,即得(每1 ml含5-0-甲基维斯阿米醇苷 14.02 μg)。

2.3 供试品溶液制备 精密称取本品3.0 g,加甲醇25.00 ml,称重,超声1 h,用甲醇补足减失重量,滤过,即得。

2.4 阴性对照溶液制备 按处方配比(缺防风药材)照工艺制备成模拟颗粒,按“2.3”项下的方法制成阴性对照溶液。

2.5 干扰试验 照上述色谱条件,将对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10.00μl,分别注入液相色谱仪,色谱图见图1。供试品色谱图中,在与对照品色谱图相应的保留时间处,有相同的色谱峰,而阴性对照溶液无干扰峰。

图1 风寒感冒颗粒中5-0甲基维斯阿米醇苷HPLC图

2.6 线性关系考察 将上述5-0-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液(14.02 μg/ml),分别精密进样 2、6、10、14、18、22 μl,按上述色谱条件测定,以平均峰面积为纵坐标,以进样量为横坐标,得方程:Y=2.21×106X-1.09×104,r=0.9997,线性范围为0.02804 ~0.3084 μg。

2.7 精密度试验 取对照品溶液(14.02μg/ml)连续进样6次,每次10.00 μl,记录峰面积,RSD为0.82%,表明精密度良好。

2.8 稳定性试验 取供试品溶液(批号107001),分别于0、4、8、12、16、24 h 进样 10.00μl,测得样品中 5-0-甲基维斯阿米醇苷峰面积的RSD为1.03%,表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.9 重复性试验 精密取同一批号样品(批号为107001)6份,按“2.3”项下的方法制备供试品溶液,依法测定,结果5-0-甲基维斯阿米醇苷含量的RSD为0.95%,表明本法重复性较好。

2.10 加样回收率试验 量取已知5-0-甲基维斯阿米醇苷含量为0.1259 mg/g的样品9份(批号为107001),每份1.5 g,3份一组,每组分别按对照品溶液浓度的80%、100%、120%的量加入对照品,按“2.3”项下的方法制备供试品溶液,计算回收率,结果见表1。

表1 风寒感冒颗粒中5-0-甲基维斯阿米醇苷的回收率试验结果(n=9)

2.11 样品含量测定 取3批样品,按“2.3”项下的方法制备供试品溶液,进样10.00 μl,照外标法(峰面积)计算5-0-甲基维斯阿米醇苷的含量,结果:批号107001,含量0.1259 mg/g、批号 102110,含量 0.1282 mg/g、批号 090931,含量0.1107 mg/g。

3 讨论

3.1 本品为含糖的颗粒剂,曾采用了①正丁醇提取,滤过,滤液蒸干,用甲醇溶解定容;②甲醇提取,蒸干,用水溶解后,再用正丁醇萃取[3]结果表明两种方法提取率偏低,回收率偏低,最后用甲醇超声1 h可以提取完全,回收率好。

3.2 本文用甲醇提取,杂质比较多,曾采用流动相甲醇-0.1%冰醋酸,梯度洗脱[4],基线不平稳,影响积分准确性,且用时太长;又考察了甲醇-水(44∶56)[3]、甲醇-水(40∶60)[2],分离效果均不理想。最后用甲醇-水(35∶65)为流动相,分离效果好,且峰型好,理论板数高。

3.3 从线性,回收率,重复性,溶液稳定性等实验结果可以看出,用HPLC法测定风寒感冒颗粒中5-0-甲基维斯阿米醇苷的含量,准确性高,重现性好,且操作简便快速。

[1] 卫生部药品标准中药成方制剂地一册,45.

[2] 中国药典委员会.中国药典.2010年版.一部,2010:140.

[3] 李玲.高效液相色谱法测定感冒清热颗粒中5-0-甲基维斯阿米醇苷的含量.中国中医药信息杂志,2009,16(4):43-44.

[4] 江丽,钟国庆,龚春燕,等.HPLC法测定复方防风胶囊中两成分的含量.中国药师,2010,(8):1128-1130.

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