荧光定量聚合酶链反应检测尿中乙肝病毒DNA的意义

王彦华，金淑华

（赤峰市传染病防治医院 检验科，内蒙古 赤峰 024000）

荧光定量聚合酶链反应检测尿中乙肝病毒DNA的意义

王彦华，金淑华

（赤峰市传染病防治医院 检验科，内蒙古 赤峰 024000）

目的：研究乙肝携带者尿液HBVDNA含量及传染性.方法：用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测50例患者血清乙肝病毒DNA含量大于104拷贝/ml患者尿液中乙肝病毒DNA含量比较.结果：尿中HBV-DNA含量与血清中HBV-DNA含量存在正相关关系（r=0.797,p<0.01）.结论：血清中HBV-DNA含量拷贝数越大，尿液中HBV-DNA含量拷贝数也越大，HBV-DNA拷贝数高的患者注意尿液的传染性.

HBV-DNA；尿液；荧光定量聚合酶链反应

乙型病毒性肝炎是我国最常见的传染性疾病，已经成为严重的国际社会卫生问题，HBV-DNA位于HBV核心部位，是HBV感染最直接、最特异、最灵敏的指标，它的存在表示病毒复制活跃，传染性强.临床医生常用血清中HBV-DNA拷贝数高低反应病毒的复制情况和传染性.但进行检测尿中HBVDNA含量及传染性研究却很少.

1 对象与方法

1.1 对象

50例尿液标本来自2011年3月至2011年4月在我院住院的患者，其血清乙肝病毒DNA含量大于104拷贝/ml，取中段晨尿3-5mL，标本不加防腐剂，及时送检.

1.2 仪器与试剂

荧光定量PCR仪（Line-Gene荧光PCR检测仪）,试剂购自深圳凯杰生物工程有限公司.

1.3 方法

取待侧尿液100uL加入100uLDNA提取液1，震荡混匀，13000rpm离心10分钟，吸取上清液，再加入25uLDNA提取液2，震荡混匀至沉淀完全溶解，100℃干浴10分钟，13000rpm离心10分钟，上清液待用.阴性、阳性、临界对照同标本处理.标准品浓度采用 5×104、5×105、5×106、5×107拷贝/mL.取上述标准品及上清液2uL加入到PCR反应管中，按以下条件进行扩增，37℃5min,94℃1min后，95℃5sec,60℃30sec,40个循环，反应体系为40uL，荧光信号收集设在60℃.

2 结果

将血清与尿液HBV-DNA;进行对数处理，计算平均值和标准差（见表1）

表1 血清与尿液HBV-DNA计算平均值和标准差

3 讨论

尿液属人体排泄物，对外环境污染较为广泛.近年，国内外学者相继报道在血清乙肝表面抗原阳性患者的尿液中检查到乙肝表面抗原阳性[1-2]，提示通过乙型肝炎表面抗原阳性尿液可污染环境，要证实尿液传染性并评价其流行病学意义，尚需直接从尿液中查到乙肝病毒复制所依赖的HBV-DNA.

HBV-DNA作为乙型肝炎病毒感染的分子生物学标志，可以直接反映体内病毒的复制状况，是HBV存在的最可靠的证据.近年来发展FQ-PCR,是目前可用于临床定量检测HBV-DNA最理想的方法[3].从我们的结果可以看出，尿中HBV-DNA含量与血清中HBV-DNA含量存在正相关关系且血清标本中乙肝病毒含量越高其尿液中乙肝病毒含量也越高，尤其血清中HBV-DNA含量拷贝数超过105时.

尿液的形成是血液经肾小球滤过，肾小管集合管重吸收及其分泌和排泄而产生，血液中某些成分如小分子物质可以通过肾小管进入尿液，而乙肝病毒正是小分子物质，可随尿液排泄[4].所以，通过对尿液中HBV-DNA的定量检测，可以了解到乙肝病毒不仅存在血液中，还可以存在尿液中.早期研究认为，乙型肝炎主要经输血、注射、针刺和母婴途径传播.但近年来通过流行病学调查及实验研究表明，有大量的人群并无输血、注射、针刺和母婴途径感染的历史，仍然可以感染上乙型肝炎.今天我们对乙型肝炎病毒传播途径的认识，应该发生改变.特别是尿液HBV-DNA阳性的患者，无疑具有环境污染的感染性和广阔范围的传染性.所以应该对尿液传播引起足够重视.

以上研究表明:HBV-DNA阳性的尿液具有传染性，是构成对社会人群潜在的危险因素，在病毒性乙型肝炎接触传播中具有十分重要的流行病学意义.尿液的传播可能是目前乙型肝炎继血液、母婴传播之外又一重要的传播途径.

〔1〕蔡来舟.98份尿中HBsAg检测情况的报告.中华流行病学杂志，1986，（7）4:208.

〔2〕彭有源.尿中HBsAg检出及流行病学意义的初步研究.中国公共卫生，1987，6（2）:90.

〔3〕郑辉.荧光定量聚合酶链反应测定乙型肝炎患者血清HBV-DNA血清标志物及其意义[J].广东医学，2000,21（2）：1512-1521.

〔4〕高雅敏.乙肝病毒携带者78例尿5项指标检测结果分析[J].职业与健康，2005,21（4）：525.

R512.6+2

A

1673-260X（2012）01-0061-01