牛冷冻精液人工授精技术操作规程(输精部分)

颜世波，王廷斌，戴志江

(1.黑龙江省汤原县职业技术学院，154700;2.佳木斯市家畜繁育指导站，154007)

1 范围

适用于人工授精员对牛进行细管冷冻精液的人工授精技术操作。

2 人工授精

用特定的输精器材，将冷冻精液正确解冻后人工输入发情母牛生殖道内，使之受孕。

3 细管冷冻精液

采集种公牛精液，经特殊冷冻处理制成细管冷冻精液制剂。

4 运输

用液态氮生物容器运输。而解冻后的精液要保温运输，在尽量短的时间内输精，不超过2～6 h。

5 液氮灌的正确使用

满罐液氮静止应保持20～30 d有液氮。冻精在液态氮中保存。液氮少于1/3时及时加液氮。查看或取出冻精要在罐口下5～8 cm处，取出停留3～5 s以内送还罐内或解冻。空罐加液氮需预冷，轻拿轻放，罐体出霜、出汗要及时检查与更换。

6 有关发情的概念

6.1 发情

母牛出现阴门肿胀、有黏液、鸣叫，表现出爬跨和接受爬跨的性行为，并能正常排卵，自然交配或人工授精具有受孕可能。母牛的这一表现称作发情。

6.2 适配年龄

母牛性成熟后，身体发育到成年体重70%左右，初配奶牛体重在350 kg以上。

6.3 发情周期

性成熟的母牛每18～24 d(平均21 d)，周而复始地出现发情症状和表现，为一个发情周期。母牛是常年发情家畜。发情周期分为发情前期、中期、后期和休情期。

6.4 发情持续时间

是指母牛发情外表征状出现开始，到征状消失为止所持续的时间。一般母牛发情持续时间为12～36 h，平均24 h。黄牛的时间偏长。

6.5 发情鉴定

就是鉴定母牛是否发情及发情的阶段，以便正确掌握人工授精的时间。

6.6 发情鉴定方法

外部观察法:通过观察发情行为、性兴奋和外阴变化症状来判定发情与阶段。

直肠检查法:手伸进牛直肠，触摸子宫角判断其长短、粗细、质地。触摸卵巢，检查卵泡大小、质地、发育程度来确定牛发情及阶段。

6.7 真发情与假发情

凡是发情能正常排卵，输精或配种可受孕的是真发情。凡是有发情症状但不能正常排卵的发情为假发情。

7 有关卵子、精子的概念与指标

7.1 排卵时间

母牛一般在发情结束后10～15 h排卵，在发情开始后24～36 h排卵，在静立发情后12～24 h排卵。多数在凌晨至早晨排卵。

7.2 卵子保持受精能力的时间

8 h以内受精能力强，以后减弱。

7.3 有效精子数

0.25 mL或0.5 mL细管冷冻精液每剂有效精子数不少于800～1 000万。保持受精能力的时间18～24 h，以输精后6～18 h效果为好。

8 人工授精操作

8.1 输精前的器材药品准备

输精枪、塑料外套、长臂手套、显微镜、载玻片、解冻容器、温水和温度计、消毒防腐药、注射器、生理盐水、生殖激素及子宫炎治疗药物。

8.2 冷冻精液的解冻

取出冻精在空气中停留3～5 s，放入38～42℃的水中解冻8～12 s，全部融化后取出擦干，保温，等待镜检或输精。

8.3 镜检活力

调整好显微镜，加热载玻片至38～40℃，冻精空气端刺小孔取精液1滴在载玻片上，迅速镜检，要求活力大于0.3可用于输精。

8.4 输精时间

在牛发情后期输精，静立发情后12～24 h输精，牛拒爬后0～8 h输精。

8.5 母牛的保定与外阴卫生消毒

在保定架或配种栏中保定，输精员在牛体正后方，以免牛伤人。用0.05%的高锰酸钾溶液或清水清洗外阴，纸巾擦干后输精。

8.6 输精过程

采用直肠把握法输精。输精员戴上长臂塑料手套，伸入直肠，排出粪便，隔着直肠壁握住子宫颈管。手臂下压使阴门开张。输精枪斜上45°从阴门缓缓插入10 cm，避开尿道口再平插至子宫颈口，通过2～3个皱壁将输精管缓慢套入子宫颈，达到子宫体，将输精枪稍微后拉即可输精。输精持续5 s以上，然后缓慢退出输精枪。

8.7 输精后的观察

发现枪头有少量血液(红点)属于正常现象，说明即将排卵。发现枪头脱落、棉塞推出属于事故，但牛一般在下次发情可排出。如不发情，要跟踪检查确认是否妊娠还是残留，针对症状日后解决。出枪有少量胶冻状微透明黏液为正常，如发现黏液浑浊、有脓或有气泡则属于炎症，针对症状治疗。发现精液逆流要及时补配。

9 难孕牛的诊治与输精

轻症子宫炎可在输精前、后治疗并输精。卡他性、隐性、卡他脓性子宫炎的牛本次可以适时输精。在输精3 h前或输精后1～12 h子宫内灌药。应采用对精子影响小的抗生素治疗。

重度子宫炎的牛在本期治疗而不输精，宫注子宫专用消炎药，下期发情观察再决定治疗或输精。

10 应用生殖激素提高受胎率

促排3号(LHRH-A3)一般在发情中期使用即在输精前6 h肌注25 μg，用的过早或剂量过大效果差，容易造成卵泡黄体化不能排卵。促黄体素(LH)和绒促性素(hCG)在输精时分别肌注100单位和1 000单位。催产素(OX)在输精后肌注40～80单位，加速精子上行。

11 保胎

应用生殖激素促进副黄体形成，维持卵巢功能达到保胎作用。在输精后3～4 d肌注促排3号、促黄体素和绒促性素25～50 μg、100单位和1000单位，使卵巢小卵泡黄体化，形成副黄体。黄体酮(P4)在输精后5～7 d连续注射80～100单位，拮抗卵巢上小卵泡产生雌激素的作用，降低子宫活动性，达到保胎功效。在妊娠4～5月时，少量妊娠牛出现假发情现象，可肌注黄体酮保胎。分5次5 d递减注射，剂量分别是前3 d 100单位，后2天为50单位、25单位。

12 妊娠诊断

12.1 外部观察法

妊娠牛行动稳健，采饲量增加，被毛光亮，阴门出皱，阴蒂增大，阴道黏液呈黏稠状，并粘有粪便夹 (俗称“挂牌”)。腹围逐渐增大，妊娠后期(7～9个月)右侧腹壁推诊可触及到胎儿，青年母牛在妊娠4～5个月乳房开始发育。妊娠牛眼线明显，眼角膜上的血管增粗，暗红或紫红，有1～3条;未妊娠牛的血管细而鲜红，分支不明显。

12.2 直肠检查法

触摸子宫角、卵巢黄体。根据黄体有无、子宫质地、大小、弹性、位置等断定是否妊娠及胎儿月龄。

12.3 酒精法

用纯酒精滴定被检查的奶样，如果出现絮状物即为妊娠。但酒精阳性乳的奶样和乳房中头几把乳不能检查，因为乳房炎乳或乳池剩乳可能被污染。

12.4 B超诊断法

可以检查35 d以后阶段的胎儿。

13 母牛输精配种记录

记录养殖场户名、地址、联系人、电话，母牛品种与耳号、年龄或产次、输精时间，与配公牛冻精品种与牛号，人工授精员姓名、电话。复配记录同上。分析造成复配的原因，本次的技术处理方法。

14 牛细管冷冻精液标记方法与识别

以黑龙江省家畜繁育指导站冻精为例，

说明:HLJ:黑龙江省家畜繁育指导站代号(拼音字头)HS:荷斯坦奶牛的品种代号(拼音字头)。080629:生产日期06028:该场该公牛身份证后5位数，即2006年出生，28号公牛。

15 种公牛品种与代号

品种代号由两位汉语拼音字头组成。荷斯坦牛HS、娟珊牛JS、西门塔尔XM、夏洛来XL、利木赞LM、安格斯AG、德国黄牛DH、海福特HF、皮埃蒙特PA、兼用短角JD、肉用短角RD、南德文(温)ND、蒙贝利亚MB。