不同剂量瘦素对兔急性肺栓塞后TNF-α、IL-8影响的观察

姚艳敏，王希柱，宋巧凤，覃 泱，李会菊，徐彤彤，张立杰，朱艳辉

（1.唐山市人民医院心内科；2.唐山市人民医院CT室，河北 唐山 063001；3.桂林医学院附属医院内科学教研室；4.桂林医学院附属医院特需病区，广西 桂林 541001）

急性肺栓塞（APE）是由于内源性或外源性栓子阻塞肺动脉主干或分支引起循环障碍的临床和病理生理综合征，是一种常见的肺血管疾病[1]。文献报道促炎性因子如血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-8（IL-8），广泛地参与了肺栓塞后肺组织损伤等病理过程[2]。要想保护损伤的肺组织，机理在于有效地调控促炎症因子。瘦素的作用机制目前国内外研究逐渐深入，发现它在组织损伤发生、发展过程中与一些炎症因子密切相关[3]。本研究通过给予不同剂量的外源性瘦素，来干预栓塞后血清炎性因子的变化，试图找到一种降低肺组织损伤的方法。

1 材料与方法

1.1 试验动物及分组

健康新西兰兔30只，雄性, 兔龄4～6个月, 体质量210～250 kg，由北京医科大学动物实验室提供。随机分为5组，对照组、生理盐水（NS）对照组、低剂量瘦素组，中等剂量瘦素组，高剂量瘦素组，每组6只。

1.2 模型的制备及各组的处理

1.2.1 血栓制备：首先碘酒酒精消毒, 自兔耳缘静脉取血2 mL，加入EP管中，离心1500 r/min后取上清液，加入凝血酶20 U，之后再将其放入70℃温箱里水浴10 min，使血栓更牢固, 将其制成直径1～2 mm，长4～5 mm的血栓备用。

1.2.2 动物模型的制备：首先将实验兔子麻醉，经腹腔缓慢推注10 %水合氯醛溶液，剂量为3 mL/kg。麻醉成功后，颈部剪毛，先用碘酒、酒精局部消毒, 再行一长约3 cm的纵向切口。并分离右侧颈静脉, 经右颈静脉插入一无活瓣静脉鞘，深度约直至右心房, 供血栓注入, 右股动脉固定留置套管针，用于采血。将制备好的血栓经右颈静脉分2 次注入，每隔3 min重复注入，每次注入血栓后快速推注NS 3～5 mL以防血栓滞留于导管或颈静脉内。所有动物模型均按上述方法复制，麻醉意外或中途死亡兔均剔除本实验。模型组对照组同期以相同的方式输入等量NS。正常对照组麻醉，插管后经右颈静脉以相同方式给予等量NS。

1.3 实验方法

5组分别于栓塞前0 h抽取静脉血2 mL，对照组设为A组，行颈静脉穿刺后，注射NS 2 mL，另外造模成功后，随机分为B、C、D、E 4组，B组作为模型对照，经颈内静脉注入行颈静脉穿刺后，注射NS 2 mL；C组为低剂量组，给予外源性重组瘦素，剂量为20 µg/kg；D组为中等剂量组，给予外源性瘦素，剂量为50 µg/kg；E组为高等剂量组，给予外源性瘦素，剂量为100 µg/kg，之后于4 h各组分别取静脉血2 mL，用4℃低温离心机以3 000 r/min离心（离心10 min），收集上清液。各种因子检测采用ELISA测定法检测，具体按说明书操作。

1.4 炎性细胞因子的检测

肿瘤坏死因子-a（TNF-α）,白细胞介素-8（IL-8），检测均按照ELISA试剂盒说明书检测。

1.5 统计学分析

采用SPSS 10.0统计软件行单因素方差分析，有显著差异后, 两两比较采用Q检验，组间数据比较采用t检验。实验数据用“±s”表示。

2 结果

2.1 各组炎症因子的变化

各实验组血清炎性细胞因子TNF-α，IL-8的变化，模型对照组在栓塞后4 h明显升高；低剂量瘦素干预组TNF-α、IL-8 亦有下降；中剂量瘦素干预组，TNF-α，IL-8明显下降；高剂量瘦素组，TNF-α，IL-8与模型对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结果见表1。

表1 各组实验血清炎性细胞因子TNF-α、IL-8的结果（±s，n=6）

表1 各组实验血清炎性细胞因子TNF-α、IL-8的结果（±s，n=6）

组别 IL-8 TNF-α 0 h 4 h 0 h 4 h NS对照组 0.28±0.80 2.79 ±0.11* 1.29 ±0.41 3.52 ±0.42模型对照组 0.29±0.10 12.32±0.13* 1.28 ±0.42 21.29±0.36*低剂量瘦素组 0.29±0.11 9.32±0.11* 1.29 ±0.49 17.21±0.34*中剂量瘦素组 0.27±0.12 4.32±0.12* 1.28 ±0.43 7.29±0.26*高剂量瘦素组 0.28±0.11 13.32±0.13* 1.27 ±0.49 23.21±0.21*

2.2 病理检查结果

模型组（NS组）病理检查显示：肺叶膨胀不全和肺不张，同时可见血栓及散在出血灶。显微镜下可见血栓, 血栓表面不光滑、着色深浅不一，管壁变薄，肺泡壁和间质增厚，血管内可见大量白细胞侵润和炎性渗出；瘦素干预组，肺内炎性细胞侵润明显减轻。

3 讨论

瘦素由体内白色脂肪分泌，它广泛存在人体的组织中，有着多种生理作用[4]。随着对瘦素认识的深入，发现它在组织损伤发生、发展过程中与一些炎症因子密切相关[5]。由本实验可见，NS模型组，TNF-α、IL-8，4 h明显升高，与正常对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）；经中等剂量瘦素预处理后，炎性因子4 h监测指标明显下降，与NS模型组比较明显下降，差异有显著统计学意义（P＜0.05）。从病理可见，经中等剂量的瘦素干预后的肺组织炎性反应明显减轻，我们认为可能外源性瘦素通过降低中性粒细胞的聚集与浸润，减轻脂质过氧化和自由基损伤，从而达到对肺组织的保护作用，具体机制有待于进一步研究。

[1]程显声.进一步提高肺动脉栓塞诊断与处理水平[J].中华结核和呼吸杂志,2000,23(9):517-518.

[2]谷国强,崔 炜.急性肺栓塞患者危险分层的生物学指标[J].国际心血管病杂志,2006,33(2):110-113.

[3]BellmeyerA,Martino JM,ChandelNS,et al.Leptin resistance protects mice from hyperoxia induced acute lung injury[J].Am J Res Crit CareMed,2007,175(6):587-594.

[4]徐彤彤,陈蒙华.心肌缺血再灌注损伤的瘦素机制研究进展[J].中国急救医学,2010,30(6):548-551.

[5]张蓓蓓,张红菊,迟鸿冰.单纯性舒张功能障碍高血压患者发生肺动脉高压的相关因素分析[J].中国医药,2012,7(10):1201-1203.