瑞舒伐他汀钙对冠心病患者外周血内皮前体细胞水平的干预作用

郭文静，李晓燕，张红明，韩淑芳，康 玲

1辽宁医学院 济南军区总医院研究生培养基地，济南 250031；2济南军区总医院，济南250031；3泰山医学院附属医院，泰安 271000

机体在正常生理情况下，外周循环血中的内皮前体细胞含量较少、数目趋于稳定，在组织缺血、缺氧等刺激下骨髓中的内皮前体细胞被大量动员到外周血中，使外周血的内皮前体细胞数目增多，参与内皮、血管的再生。在高脂血症等心血管危险因素存在时，会出现内皮前体细胞数量减少和迁移能力下降，导致血管损伤增强及修复能力降低[1]，因此外周血内皮前体细胞的变化可能间接反应内皮细胞损伤与修复的情况[2]。他汀类药物除有调脂作用外，还有包括减少血管炎症、减少血小板聚集和血栓形成等非调脂的心血管保护作用。本研究旨在观察他汀类药物干预后CD34+/VEGFR-2+EPCs数量的变化，进一步探讨他汀类药物对延缓冠状动脉粥样硬化过程中的作用。

材料和方法

1 研究对象 选取2011年1月-2011年10月在济南军区总医院心内科住院且经冠脉造影确诊为冠心病患者112例，男性63例，女性49例。排除标准：先前3个月内发生过急性心肌梗死、不稳定型心绞痛、脑血管疾病；美国纽约心脏病学会(NYHA)分级Ⅲ或Ⅳ级的心力衰竭；严重肝肾功能损害、各种急慢性感染性疾病；对造影剂过敏患者；近期有外伤、溃疡、外科手术、炎症、肿瘤；近期服用过干细胞因子、粒系集落刺激因子、粒系巨噬系集落刺激因子、他汀类调脂药物；其他心脏病。

2 分组 对冠状动脉造影显示管腔直径狭窄≥50%的病变支进行定量分析，左前降支、回旋支或右冠状动脉1支狭窄者为单支病变；2支狭窄者为双支病变；3支均狭窄者为三支病变；如左主干病变并累及左前降支或回旋支均为双支病变，若同时伴右冠狭窄则为三支病变。所有入选对象分为单支病变组(37例)、双支病变组(36例)、三支病变组(39例)，入选对象除服用冠心病常规药物外，均服用瑞舒伐他汀钙片(商品名：可定，由阿斯利康制药有限公司提供，剂量：10mg 1/晚)。

3 试剂与仪器 Alexa Fluor 647 anti-human VEGFR-2(CD309)(购置Becton dickinson公司)，FITC antihuman CD34(购置Becton dickinson公司)，溶血素，Lysing Solution(购置Becton dickinson公司)，流式细胞分析仪(购置Becton dickinson公司)，低速台式离心机(购置上海医用分析仪器厂公司)。

4 生化指标检测 总胆固醇(CH)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-CH)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和甘油三酯(TG)、空腹血糖(GLU)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)等，入院第2天抽血检测。

5 外周血EPCs水平测定 患者禁食8-10h后，次日清晨于肘静脉抽取空腹血3ml，新鲜肝素钠抗凝，采标本血后即刻送检，行直接免疫荧光标记法，移液枪取100µl全血，加胞膜抗体(5µl Alexa Fluor 647 anti-human CD309(VEGFR-2)，10µl FITC anti-human CD34)，以同型抗体作对照，孵育30min，室温保存，避光；加2ml 1×Lysing Solution，混匀5-10min，室温保存，避光；1 500r/min离心5min；悬浮细胞，加1×PBS(含0.5% BSA，0.1%叠氮钠)洗涤，1 500r/min离心5min；悬浮细胞，补足0.5ml PBS，并以流式细胞仪计算CD34+/VEGFR-2+EPCs在全血中所占百分比。

6 统计学方法 应用SPSS16.0统计学软件进行统计处理，数值变量用-x±s表示，用药前后数据采用配对t检验，三组之间采用单因素方差分析。P<0.05为差异有统计学意义。

结 果

1 入选对象基线资料比较 各组一般资料间均无统计学差异(各组指标两两比较P>0.05)，见表1。2 干预前后血脂水平比较 干预1个月后，TC、LDL-CH与干预前相比显著下降(P<0.001)，TG与干预前相比亦呈下降趋势(P<0.05)，HDL-C变化无统计学意义(P>0.05)，见表2。

3 不同组外周血CD34+/VEGFR-2+EPCs间的关系在应用瑞舒伐他汀钙干预前，对单支、双支、三支病变组进行单因素方差分析，各组均值间均有统计学差异(P<0.01)；单支、双支、三支病变组CD34+/VEGFR-2+EPCs分别为0.121 6±0.019 1、0.085 5±0.011 3、0.043 1±0.012 8，即随着冠脉病变程度加重，外周血中EPCs数量逐渐下降。

4 瑞舒伐他汀钙片对CD34+/VEGFR-2+EPCs水平的影响 给予瑞舒伐他汀钙片干预1月后，三组与用药前相比，冠心病患者外周血中CD34+/VEGFR-2+EPCs数量明显升高(P<0.05)。见表3。

表1 三组患者基线资料Tab 1 Baseline data about patients in 3 groups(-x±s)

表2 瑞舒伐他汀钙片干预前后三组的血脂变化Tab 2 Lipid level in 3 groups before and after rosuvastin treatment(-x±s, mmol/L)

表3 瑞舒伐他汀钙片对CD34+/VEGFR-2+EPCs水平的影响Tab 3 Effect of rosuvastin on CD34+ and VEGFR-2+marked EPC(-x±s, %)

讨 论

血管内皮细胞损伤，发生慢性炎症反应，会导致并加速动脉粥样硬化进展，故内皮前体细胞在内皮细胞损伤后的修复过程中发挥着关键作用[3-4]，各种心血管危险因素(如高脂血症)均可导致内皮前体细胞数量下降[5]。正常情况下，内皮的损伤与内皮祖细胞的修复之间存在着动态平衡，以维持血管内膜功能结构的完整。

冠心病患者心肌缺血区释放各种炎症介质、细胞因子，动员骨髓内皮前体细胞迁移至外周血，归巢到病损内皮，当冠脉病损支数逐渐增多时，心肌缺血面积便会增大，三支病变者内皮损伤修复所需的内皮祖细胞数目远远超过两支、单支病变者，外周血中内皮前体细胞数量减少，内皮自我修复能力下降，更加重冠脉粥样斑块的形成及进展。我们的研究结果发现：随着冠脉病变程度加重，外周血中内皮祖细胞数目逐渐降低，其水平与冠状动脉病变支数呈显著负相关，多支病变患者相对较单支病变者其内皮祖细胞有下降趋势，具体表现为：三支病变组小于两支病变组、单支病变组，两支病变组小于单支病变组。外周血中内皮前体细胞含量较多的单支病变组会比双支病变组及三支病变组其心源性死亡的发生率低[6]。

动脉粥样硬化患者均伴有内皮前体细胞数量减少和迁移能力下降，可归因于心血管危险因素的聚集导致内皮细胞修复能力下降[7]。目前已有多个证据表明高脂血症患者外周血循环内皮前体细胞数量减少和功能受损，且其数目与胆固醇、低密度脂蛋白水平呈负相关[8]。对于冠心病患者来说，强化降脂能够起到稳定粥样斑块、延缓动脉硬化的进展[9]，这显得尤为重要；他汀类药物除具有调脂作用外，还可以改善血管内皮、保护心血管，包括减少血管炎症发生、减少血小板聚集和血栓形成、抑制体内过度的免疫激活、减少免疫反应对机体的破坏、改善内皮功能等；本实验经给予瑞舒伐他汀钙片10mg 1/晚干预后，三组的上述指标显著上升，这说明他汀类药物还可以促进骨髓内皮祖细胞的动员，增加外周血中循环内皮细胞数量，冠心病患者应用瑞舒伐他汀钙药物后外周循环血中的CD34与VEGFR-2共同标记的血管内皮祖细胞数目增加，冠心病患者内皮前体细胞数量均较1个月前有所升高，从而有效修复损伤的内皮，延缓动脉粥样硬化继续发展，改善冠心病患者的预后。

1 Bai X，Wang X，Xu Q. Endothelial damage and stem cell repair in atherosclerosis［J］. Vascul Pharmacol，2010，52（5-6）：224-229.

2 Miranville A，Heeschen C，Sengenès C，et al. Improvement of postnatal neovascularization by human adipose tissue-derived stem cells［J］. Circulation，2004，110（3）：349-355.

3 Briguori C，Testa U，Riccioni R，et al.Correlations between progression of coronary arter disease and circulating endothelial progenitor cells［J］.FASEBJ，2010，24（6）：1981-1988.

4 Briguori C，Testa U，Riccioni R，et al. Correlations between progression of coronary artery disease and circulating endothelial progenitor cells［J］. FASEB J，2010，24（6）：1981-1918.

5 Esper RJ，Vilariño JO，Machado RA，et al. Endothelial dysfunction in normal and abnormal glucose metabolism［J］. Adv Cardiol，2008，45：17-43.

6 Zhou Z，Shi S，Song M，et al. Development of transgenic endothelial progenitor cell-seeded stents［J］. J Biomed Mater Res A，2009，91（2）：623-628.

7 Pompilio G，Capogrossi MC，Pesce M，et al. Endothelial progenitor cells and cardiovascular homeostasis：clinical implications［J］. Int J Cardiol，2009，131（2）：156-167.

8 Pirro M，Bagaglia F，Paoletti L，et al. Hypercholesterolemiaassociated endothelial progenitor cell dysfunction［J］. Ther Adv Cardiovasc Dis，2008，2（5）：329-339.

9 Nicholls SJ，Borgman M，Nissen SE，et al. Impact of statins on progression of atherosclerosis：rationale and design of SATURN（Study of Coronary Atheroma by InTravascular Ultrasound：effect of Rosuvastatin versus AtorvastatiN）［J］. Curr Med Res Opin，2011，27（6）：1119-1129.