三九贴穴位贴敷对哮喘大鼠血清IL-10含量影响的实验研究

郭冬梅，孙德昱

(新疆维吾尔自治区中医医院，乌鲁木齐 830000)

支气管哮喘是严重影响人们健康的常见病、多发病，严重影响人们的生活质量，造成巨大的社会负担和花费，已成为全球性的严重公共卫生问题，并受到世界各国的极大关注［1］。中药穴位敷贴疗法在支气管哮喘患者治疗上临床疗效确切，且简便、价廉及易操作。因此，本实验旨在通过穴位贴敷疗法探讨对支气管哮喘大鼠血清IL-10含量的影响和机理。

1 材料

1.1 动物

健康Wistar大鼠60只，雌雄各半，3月龄左右，体重250g±50g，实验期间均以标准饲料喂养，自由饮水。大鼠由新疆维吾尔自治区疾病控制中心提供，雌雄大鼠分笼饲养，每笼5只，室温控制在20℃～25℃，湿度控制在60%～75%，通风良好。实验在新疆维吾尔自治区中医院药理实验室动物实验中心(清洁级实验室)进行。

1.2 药物

三九药膏由海螵蛸100g、白芷96g、白芥子96g、轻粉1.5g组成，中药由新疆维吾尔自治区中医院药剂科提供;各药按比例研为细末，用姜汁和凡士林调制成膏状备用(其中每个敷贴含干药粉3g);醋酸地塞米松片(天津药业集团新郑股份有限公司，国药准字H41021038);0.9%氯化钠注射液(新疆华氏丹药业股份有限公司，批号10111612)。

1.3 主要试剂

卵白蛋白(ovalbumin，OVA级)10g分装，A-5253，保存－4℃(由新疆宝信销售公司提供);氢氧化铝粉剂(天津市致远化学试剂有限公司);大鼠IL-10试剂盒(购自北京科美东雅生物技术有限公司)。

1.4 主要仪器

鱼跃牌医用超声雾化吸入器(江苏鱼跃医疗设备股份有限公司)，KDC-1042高速冷冻离心机(新疆乌鲁木齐市汇福源医疗器械公司)，安途2010酶标仪(新疆乌鲁木齐市医飞公司)，Thermo洗板机(新疆乌鲁木齐市医飞公司)。

2 方法

2.1 分组与给药

将大鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组(灌服地塞米松)、穴位贴敷低、中、高剂量组6组，每组10只。在大鼠的定喘、双肺俞、双膈俞穴位处帖敷，取穴定位参照《实验针灸学》［2］。

(1)对照组(A 组):生理盐水 10ml·kg－1·d－1灌胃，用生理盐水浸纱布敷贴于相应穴位处，每日1次，共 10d;(2)模型组(B 组):生理盐水 10ml·kg－1·d－1灌胃，用生理盐水浸纱布敷贴于相应穴位处，用胶布固定，每日1次，共10d;(3)灌服地塞米松对照组(C 组):地塞米松 0.5mg·kg－1·d－1灌胃，生理盐水浸纱布敷贴于相应穴位处，用胶布固定，每日1次，共10d;(4)穴位贴敷三九贴膏高剂量治疗组(D组):将三九药贴制成 3cm×3cm大小，厚度为0.3cm，贴于背部相应穴位处，用胶布固定，每日1次，每次1.5h，共10d;(5)三九贴膏中剂量治疗组(E组):穴位贴敷隔日1次，每次1.5h共10d;(6)三九贴膏低剂量治疗组(F组)穴位贴敷隔2d 1次，每次1.5h共10d。

2.2 检测指标

采用酶联免疫吸附法(ELISA)定量检测组大鼠IL-10的含量。

3 统计方法

采用SPSS13.0软件包进行统计学处理，各组实验数据用均数±标准差(±s)表示，并对变量进行方差齐性检验，满足正态性、方差齐性时两两样本的比较采用student-T检验;多组均数比较用方差齐性检验，方差不齐时用秩和检验。检验水准α=0.05，P≤0.05为有统计学意义。

4 结果

与模型组比较，低剂量组血清 IL-10水平差异没有统计学意义(P＞0.05);对照组、中、高剂量组及地塞米松组血清IL-10水平差异均有统计学意义(P＜0.01)。与对照组比较，高剂量组及地塞米松组血清IL-10水平差异均无统计学意义(P＞0.05);模型组和低、中剂量组血清IL-10水平差异均有统计学意义(P＜0.01)。

表1 对血清IL-10水平的影响(±s，n=10)

表1 对血清IL-10水平的影响(±s，n=10)

注:1)与模型组比较:＊＊P＜0.01;2)与对照组比较:##P＜0.01

组别例数 IL-10(μg/mL)对 照 组 10 2.32 ±0.39＊＊模 型 组 10 1.58±0.18##低 剂 量 组 10 1.66±0.08##中 剂 量 组 10 1.88 ±0.11＊＊##高 剂 量 组 10 2.05±0.16＊＊地 塞 米 松 组 10 2.13±0.11＊＊

5 讨论

支气管哮喘是一种气道慢性变应性炎症性疾病，其气道的变应性炎症与多种免疫细胞及其所产生的细胞因子有关。Borish等［3］观察发现，哮喘患者BALF中IL-10的含量明显低于正常对照组，并且证实IL-10的含量减少与其转录水平下降有关，检测BALF或血液中的IL-10水平，可估计哮喘患者的病情及预后。IL-10是一种多效能的细胞因子，通过不同的途径参与支气管哮喘的发病并发挥网络效应，对于评价疾病的严重程度及预后具有重要意义。

穴位敷贴治疗咳喘病是中医学的传统疗法，源于《张氏医通》白芥子涂法，沿用至今，疗效显著。我院老年病科用中药外敷方治疗哮喘，可减少发作次数，减轻发作程度并防止复发。其方药由白芥子、白芷、海螵蛸、轻粉组成，具有辛温散寒、化痰通络的作用，加用姜汁调和以加强药物温经通络的作用及对穴位的刺激。肺俞属于足太阳膀胱经上的背俞穴之一，能疏风解表、宣肺理气，可调肺气、止咳喘、清虚热、补劳损，调理肺脏功能。《针灸资生经》曰:“因与人治哮喘，只缪肺俞，不缪他穴。”定喘穴为平喘要穴，具有化痰、宣肺、平喘的功效，是治疗哮喘的经验穴，也是缓解哮喘发作的有效穴位［4］。膈俞穴是足太阳膀胱经的背部腧穴，有宽胸、理气、降逆、平喘之功。

本实验中，模型组大鼠血清IL-10水平明显低于对照组(P＜0.01)，进一步证实支气管哮喘的发病与血清IL-10密切相关，也可能与哮喘急性发作期某些活性介质的抑制作用使IL-10的合成受阻有关。并进一步说明IL-10在支气管哮喘发病中起着负向调节作用，也可以推断IL-10的缺乏可能是导致哮喘发作的重要因素之一。中、高剂量组及地塞米松组血清IL-10水平与模型组比较差异均有统计学意义(P＜0.01)，提示中、高剂量组及地塞米松组均能升高血清IL-10水平;高剂量组及地塞米松组血清IL-10水平与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)，提示高剂量组及地塞米松组不降低正常血清IL-10水平。因此，穴位帖敷缓解哮喘大鼠症状可能与升高血清IL-10水平有关，这也为今后的临床工作提供了一定的思路。

［1］李明华，殷凯生，蔡映云.哮喘病学［M］.2版.北京:人民卫生出版社，2005，6:1.121.255-256.

［2］林文注，王佩.实验针灸学［M］.上海:上海科学技术出版社，1999.

［3］Borish A，Laan M，Anderson GP.Neutrophils，interleukin-17A andlung disease［J］.Eur Respir J，2005，25(1):159-172.

［4］Poston，chanzep， lacoste， JY，et al. Immunohistoehemieal charavtericalion of the cellular infiltration inasthmatic bronchi Amrev Respir Dis，1992，145:918-921.