HPV-DNA检测和液基细胞学检查与宫颈病变的相关性分析

谭跃 陈鹏志

人乳头瘤病毒(HPV)已经被确认为引起宫颈癌的根本原因。近年来，宫颈癌发病率上升并呈年轻化趋势，每年全球新增病例约50万，其中我国就超过10万[1]。因为筛查方法技术相对落后，普查率偏低，从而相对的宫颈癌发病率和死亡率偏高，并且有年轻化的趋向[2]。本文为此将宫颈液基细胞学检查(TCT)与HPV检测技术联合进行宫颈病变筛查，并进行对比分析，探讨宫颈病变早期筛查手段，以利于患者早诊断、早治疗及早康复。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2011年5月～2012年3月在本院行宫颈病变筛查的573例患者，年龄(36.5±6.8)岁。孕次(4.3±1.2)次，产次(1.7±0.3)次。所有患者均无宫颈物理治疗史，半年内无阴道炎病史和宫颈用药史。

1.2 检测方法

1.2.1 TCT (1)标本采集:受检者采用“戟”型刮板或毛刷插入宫颈管内，围绕子宫颈旋转2周,刮出颈口和颈管内的上皮细胞，将收集的细胞洗入盛有ThinPrep保存液的液基瓶中,制成直径2cm的薄层细胞涂片,95%酒精固定,巴氏染色。(2)细胞学诊断方法采用TBS分类法:即正常范围、意义不明的不典型鳞状细胞(ASCUS)、低度鳞状上皮内瘤变(LSIL、即鳞状上皮轻度非典型增生CINⅠ)、高度鳞状上皮内瘤变(HSIL分为鳞状上皮中度非典型增生CINⅡ、鳞状上皮重度非典型增生CINⅢ)、鳞状细胞癌(SCC)。

1.2.2 HPV-DNA检测 HPV-DNA检测采用中山大学达安人乳头瘤病毒基因分型测试剂盒。由医生用专用取样拭子（灭菌，一次性）采集样本，进行DNA抽取40min，PCR基因扩增122min，PCR扩增产物98℃变性8min，然后在水浴箱进行杂交60min，显色10min，结果分析。检测19种HPV亚型，包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、CP8304、6、11、43型，各型HPV探针显示一蓝点就表明该分型阳性。

1.2.3 宫颈活检 用电子阴道镜进行检查,对可疑病灶进行镜下定位活检，若镜下未发现病灶或图像不满意，则在宫颈管口鳞柱交界处3、6、9、12点处多点取材或颈管搔刮，所有病理标本由专门病理医师阅片，作出病理诊断,分为正常或宫颈慢性炎症、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ级和SCC。

1.3 统计学方法 以组织病理学检查结果为确诊标准，计算并比较CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、SCC和HPV-DNA检测筛查与病理学结果的敏感度、特异度和准确度。对结果进行统计，数据以均数±标准差(±s)表示，组间比较采用t检验，2组间进行对比分析，P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 HPV-DNA检测结果 573例患者中，HPV-DNA检测阳性标本为94例，479例为阴性。

2.2 宫颈细胞学检查结果 573例患者中，正常或炎症38例，ASCUS 280例，LSIL 178例，HSIL 72例，SCC 5例。

2.3 病理学检查结果 573例患者中，均行宫颈活检，以病理学诊断为最终诊断：正常或炎症73例，CINI 418例，CINII 50例，CINⅢ 27例，SCC 5例。

2.4 HPV-DNA检测阳性标本在TCT检查结果中分布情况见表1。

表1 HPV-DNA检测阳性标本在TCT检查结果中分布情况

表1结果显示HPV-DNA检测阳性率：其中CINⅠ6.1%(17/280)、CINⅡ15.7%(28/178例)、CINⅢ57.1%(44/72例)、SCC100%(5/5例)。经统计分析，HPV感染率CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ组间比较有显著性差异(P<0.01)。

2.5 HPV-DNA检测阳性标本在病理活检结果中分布情况见表2。

表2 HPV-DNA检测阳性标本在病理活检结果中分布情况

表2结果显示HPV-DNA检测阳性率：其中CINⅠ10.0%(42/418例)、CINⅡ46.0%(23/50例)；CINⅢ88.89%(24/27例)、SCC100%(5/5例)。经统计分析，HPV感染率SCC组与CINⅠ、CINⅡ组比较有显著性差异(P<0.01)。

3 讨论

本文通过HPV-DNA检测、液基细胞学与宫颈组织活检病理结果进行对比分析，结果显示，宫颈组织从低、中、高度病变3组间比较有显著性差异，HPV感染与宫颈癌前病变有密切关系，并随着病理学级别的增高而上升，且病毒感染率与病变程度成正相关。HPV-DNA联合TCT检测结果中LSIL、HSIL检出率均高于同期单纯TCT性检出率。

宫颈癌筛查的重点是宫颈高度病变，宫颈组织发生癌变要经过一个由量变到质变的漫长过程，而癌前病变就处于向癌细胞转化的量变过程中[3]。如能早期诊断及时治疗，早期宫颈癌的治愈率可以接近100%，使宫颈癌死亡率明显降低[4]。对于无临床症状且病理诊断低度病变的普查人群，可不予任何治疗，但需定期复诊。对于多数有临床症状且低度病变妇科门诊患者，应结合临床症状给予相应的治疗。因此，采用高灵敏度的分子诊断学技术联合细胞学检测对宫颈病变的进行筛查，可以减少漏诊[5]。

HPV感染是导致CIN及宫颈癌的直接因素，HPV病毒基因型有200种以上，有些基因型明显与肿瘤发展密切相关[6]。采用分子生物学技术进行对HPV-DNA检测，技术成熟，重复性好，可以避免细胞学诊断受阅片医师主观影响。各人细胞学认识水平不同，使细胞学的可重复性较差。细胞学检查或分子生物学检测都各具优点和局限性，将其联合应用，将能够最大限度地提高宫颈病变诊断的准确性，降低漏诊率。HPV-DNA检测是预防宫颈癌的重要手段，联合TCT检查，作为宫颈癌和癌前病变的初筛手段，将更有利于预测受检者的发病风险度，并可决定其筛查间隔。本文通过HPV-DNA检测、液基细胞学分别与宫颈组织活检病理结果进行对比分析，显示TCT联合HPV-DNA检测对于及时发现和确定宫颈癌高危人群、研究宫颈癌的发病机制，以及预防和早期发现宫颈癌及癌前病变都有重要意义。

[1]张晓金,归绥琪.宫颈癌发病机制的研究进展[J].中国妇幼健康研究,2008(1):56-59.

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[3]蒋蓉.对宫颈癌患者的健康教育指导[J].当代医学，2011,19(25):114.

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[5]苏光，钱莉芸，刘阳，等.多重入乳头瘤病毒感染检测在官颈病变诊断中的价值[J].中国实用妇科与产科杂志，2007，23(9)：706-707.

[6]Hamada K,Shirakawa T.Adenovirus2mediated transfer of human papilloma virus 16 E6/E7 antisense RNA and induction of apoptosis in cervical cancer[J].J Cell Biochem,2007,100(5):1191.