复方消渴降糖胶囊降糖作用初探

陆翠林 陆海鹏

1.广西中医学院附属瑞康医院，广西南宁 530011；2.广西民族医院，广西南宁 530001

复方消渴降糖胶囊为我院多年用于临床治疗2 型糖尿病的有效复方制剂，其处方由番石榴叶、天花粉、生地、山药、山茱萸、甘草等6 味药组成，具有清热生津，除烦止渴的作用，用于热病津伤口渴、多饮、多尿、多食、消瘦、体倦无力、尿糖及血糖升高之消渴症。本文旨在研究复方消渴降糖胶囊的急性毒性及对四氧嘧啶性糖尿病小鼠的影响，现报道如下：

1 仪器与试药

1.1 仪器

棱光-722 型可见分光光度计，上海第三分析仪器厂；ML204 型电子天平，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司。

1.2 试药

1.2.1 试剂 四氧嘧啶 （美国Sigma公司产品，批号：12k1460）；葡萄糖测定试剂盒（上海荣盛生物技术有限公司，批号：20100812）；苯乙双胍片（北京双鹤药业股份有限公司，批号：20100505）。

1.2.2 药物 番石榴叶采集地点分别为广西南宁、桂林、百色、河池、柳州、钦州、防城等地，经鉴定为桃金娘科植物番石榴Psidium guajavae L.的干燥叶[1]；天花粉、生地、山药、山茱萸、甘草等药材均购南宁一心药业有限公司。复方消渴降糖胶囊稠膏制备：番石榴叶、生地、山药、山茱萸、甘草等洗净，加水12 倍量水浸泡2 h，煎煮1.5h，第2次加10 倍量水，煎煮1 h，滤液过滤，合并，放冷，加入3 倍量95%乙醇，搅拌均匀，放置过夜，过滤，滤液回收乙醇后，浓缩成可供小鼠灌胃（ig）给药的最大浓度的稠膏，加入天花粉（破壁）混合，既得，相对于3.56 g生药/mL，使用时按要求用蒸馏水稀释，药品批号：20100620。

1.3 实验动物

清洁级昆明种小鼠，体重18～22 g，由广西医科大学实验动物中心提供，动物许可证号：2010A032。

2 方法与结果

2.1 方法

2.1.1 复方消渴降糖胶囊最大耐受量实验 清洁级昆明种小鼠，18～22 g，雌雄各半，随机分正常对照组、复方消渴降糖胶囊组，每组动物20只。小鼠禁食不禁水12 h后按小鼠体重灌胃给药2次，体积为0.4 mL/10 g（3.56 g生药/mL），给药时间间隔8 h，间隔期禁食不禁水，空白对照组则同时给予等体积的生理盐水。给药后动物正常饮食，连续观察小鼠7 d内的饮食、体重变化、毛发、分泌物及大小便等指标。7 d后处死小鼠尸检，观察各鼠主要脏器（肝、心、脾、肺、肾），观察是否有任何异常改变。

2.1.2 复方消渴降糖胶囊对正常小鼠血糖的影响[2-3]清洁级昆明种小鼠48只，18～22 g，雌雄各半，随机分为4 组，即正常对照组（A组）、复方消渴降糖胶囊高、中、低剂量（30.0、15.0、7.5g/kg，以原生药材计，下同）组（B、C、D 组），每组 12只。各组小鼠均按相应剂量灌胃给药，A组给予等量生理盐水，每天2次，连续10 d，于末次给药前禁食12 h，末次给药后2 h，小鼠静脉取血测空腹血糖值。

2.1.3 复方消渴降糖胶囊对四氧嘧啶性糖尿病小鼠血糖的影响[4]清洁级昆明种小鼠约120只，18～22 g，雌雄各半，取12只作为正常对照组（A组），静脉注射20 mL/kg生理盐水，其余造四氧嘧啶性糖尿病模型小鼠，静脉注射四氧嘧啶0.1 g/kg，72 h后静脉取血测血糖值，去除血糖值<11.0 mmol/L小鼠后，随机分为5 组，即四氧嘧啶性糖尿病小鼠模型组（B组）、苯乙双胍阳性对照组（C组）、复方消渴降糖胶囊组（高、中、低剂量）（D、E、F组），每组12只。A组灌胃给予等体积生理盐水，B组灌胃给予苯乙双胍片0.2 g/kg，C、D、E分别灌胃给予复方消渴降糖胶囊30.0、15.0、7.5g/kg，每天 2 次，连续 10 d，末次给药后禁食2 h，静脉取血测血糖值。

2.1.4 复方消渴降糖胶囊对四氧嘧啶性糖尿病小鼠葡萄糖糖耐量的影响[5]实验分为5 组，即正常对照组（A组）、四氧嘧啶性糖尿病小鼠模型组（B组）、复方消渴降糖胶囊组（高、中、低剂量）（C、D、E 组），每组 12 只，造模及给药同“2.1.3”项下，末次给药后禁食2 h，小鼠静脉抽取血样后以该血糖值作为0 h血糖浓度，同时各组小鼠立即灌胃葡萄糖2.5g/kg，于0.5、2.0 h抽取血样并测量血糖值，观察复方消渴降糖胶囊对四氧嘧啶糖尿病小鼠葡萄糖糖耐量的影响。

2.1.5 统计学方法 采用SPSS 13.0统计软件处理， 计量资料数据以均数±标准差（±s）表示，采用方差分析，两两比较采用LSD-t检验。以P<0.05 为差异有统计学意义。

2.2 结果

2.2.1 复方消渴降糖胶囊最大耐受量实验结果 各组小鼠未见死亡，在第2次给药后，B组小鼠进食减少及活动表现减少，第2 天能恢复正常活动及进食。所有小鼠体重自然增长，两组动物体重比较无显著性差异。小鼠毛色、常分泌物及大小便正常。7 d后处死小鼠，检视心、肝、脾、肺、肾、胃肠等重要脏器，结果未见异常改变。按生药量计复方消渴降糖胶囊对小鼠灌胃给药的最大耐受量为142.4 g生药/g。

2.2.2 复方消渴降糖胶囊对正常小鼠血糖的影响 与正常对照组比较，复方消渴降糖胶囊高剂量组能显著降低正常小鼠血糖（P<0.05），复方消渴降糖胶囊中剂量及低剂量组虽然也能降低正常小鼠血糖水平，但经比较差异无统计学意义（P>0.05）。 见表1。

2.2.3 复方消渴降糖胶囊对四氧嘧啶性糖尿病小鼠血糖的影响 与正常对照组比较，四氧嘧啶性糖尿病小鼠模型组血糖水平显著升高（P<0.05），与四氧嘧啶性糖尿病小鼠模型组比较，苯乙双胍阳性对照组、复方消渴降糖胶囊高、中、低剂量组能显著降低四氧嘧啶性糖尿病小鼠血糖 （P<0.05），与苯乙双胍阳性对照组比较，复方消渴降糖胶囊高、中、低剂量组著降低四氧嘧啶性糖尿病小鼠血糖效果相当 （P>0.05），而复方消渴降糖胶囊高、中、低剂量组组间比较无统计学意义（P>0.05）。 见表2。

表1 复方消渴降糖胶囊对正常小鼠血糖的影响（±s，n=12）

表1 复方消渴降糖胶囊对正常小鼠血糖的影响（±s，n=12）

注：与A组比较，*P<0.05

组别 动物数（只）剂量（g/kg）血糖值（mmol/L）正常对照组（A组）复方消渴降糖胶囊组高剂量组（B组）复方消渴降糖胶囊组中剂量组（C组）复方消渴降糖胶囊组低剂量组（D组）12 12 12 12-30.0 15.0 7.56.02±1.154.64±0.96*5.44±1.16 5.82±1.28

表2 复方消渴降糖胶囊对四氧嘧啶性糖尿病小鼠血糖的影响（±s，n=12）

表2 复方消渴降糖胶囊对四氧嘧啶性糖尿病小鼠血糖的影响（±s，n=12）

注：与A组比较，*P<0.05；与B组比较，△P<0.05

组别 动物数（只）剂量（g/kg）血糖值（mmol/L）正常对照组（A组）四氧嘧啶性糖尿病小鼠模型组（B组）苯乙双胍阳性对照组（C组）复方消渴降糖胶囊组高剂量组（D组）复方消渴降糖胶囊组中剂量组（E组）复方消渴降糖胶囊组低剂量组（F组）12 12 12 12 12 12--0.2 30.0 15.0 7.56.27±1.08 22.51±3.13*15.46±2.52*△13.95±3.98*△15.39±2.27*△16.08±3.80*△

2.2.4 复方消渴降糖胶囊对四氧嘧啶性糖尿病小鼠葡萄糖糖耐量的影响 与正常对照组比较，四氧嘧啶性糖尿病小鼠模型组在 0、0.5、2.0 h时间点的血糖显著升高（P<0.05）；与四氧嘧啶性糖尿病小鼠模型组比较，复方消渴降糖胶囊高、中、低剂量组能显著控制模型小鼠血糖的升高（P<0.05），复方消渴降糖胶囊高、中、低剂量组组间比较无明显差异（P>0.05）。见表3。

表3 复方消渴降糖胶囊对四氧嘧啶性糖尿病小鼠葡萄糖糖耐量的影响（±s，n=12）

表3 复方消渴降糖胶囊对四氧嘧啶性糖尿病小鼠葡萄糖糖耐量的影响（±s，n=12）

注：与A组比较，*P<0.05；与B组比较，△P<0.05

组别 动物数（只）剂量（g/kg）血糖值（mmol/L）0 h 0.5h 2.0 h正常对照组（A）四氧嘧啶性糖尿病小鼠模型组（B组）复方消渴降糖胶囊组高剂量组（C组）复方消渴降糖胶囊组中剂量组（D组）复方消渴降糖胶囊组低剂量组（E组）12 12--6.27±1.08 22.51±3.13*10.76±1.87 37.55±3.72*7.82±1.1527.74±2.73*1230.013.95±3.98*△25.19±5.23*△19.01±3.61*△1215.015.39±2.27*△25.60±3.50*△20.50±2.37*△127.516.38±3.80*△25.65±4.31*△21.75±4.00*△

3 讨论

复方消渴降糖胶囊为在研中药6 类新药，其处方由番石榴叶、天花粉、生地、山药、山茱萸、甘草等6 味药组成。番石榴叶系桃金娘科番石榴属植物番石榴的干燥叶及带叶嫩枝，广东、广西、四川和云南等地区均有野生及人工栽培[6]，其含有黄酮类化合物、三萜类、鞣质类、挥发油、有机酸等多种活性化学成分[7]，具有明显的降血糖功降血脂及降血压作用[8]，能生津止渴，甘平养胃，敛涩固阴，在中外民间均有广泛使用，为处方中君药。天花粉Trichosanthis Radix味甘、微苦、性微寒，具有清热泻火、生津止渴、消肿排脓之功效；用于热病烦渴、肺热燥咳、内热消渴、疮疡肿毒[9]，为臣药；生地、山药、山茱萸、甘草共奏养阴生津、滋阴清热之功效，为佐使药。全方具有清热生津，除烦止渴的作用，临床用于热病津伤口渴、多饮、多尿、多食、消瘦、体倦无力、尿糖及血糖升高之消渴症，临床使用中具有良好的疗效。本实验通过进一步研究其急性毒性及降糖作用，对于该药物的开发提供数据支持。

糖尿病发病机制复杂，为多种因素综合的结果[10]，是以慢性血糖水平增高为特征的代谢性疾病群，临床治疗药物种类大多数为西药，其不良反应较大，在改善胰岛素抵抗方面不理想，而从天然药物中寻找降血糖有效成分的研究日益受到重视[11]。复方消渴降糖胶囊急性毒性实验结果显示，对小鼠灌胃给药的最大耐受量为142.4 g生药/kg，当于成人日用量的100 倍以上，安全无毒性[12]。四氧嘧啶是特异性的β细胞毒剂，其在体内通过产生超氧自由基并破坏胰岛的β细胞，导致细胞内DNA受到损伤，同时激活多聚ADP核糖体合成酶的活性，进而导致mRNA功能受损，致使β细胞合成前胰岛素显著减少，并引起实验性糖尿病[13-14]。通过实验表明，复方消渴降糖胶囊（高剂量组）能显著降低正常小鼠血糖，能显著性控制四氧嘧啶性糖尿病小鼠的血糖的升高，并且对于四氧嘧啶性糖尿病小鼠的糖耐量的控制具有良好的效果，研究结果提示复方消渴降糖胶囊具有相似于磺脲类和双胍类降糖药的作用[5]，值得进一步研究。目前多数研究表明，复方中药在降低血糖作用机制方面可能与刺激胰岛β细胞释放胰岛素、增加胰岛素与靶组织及受体的亲和力、促进外周组织对葡萄糖利用或影响到一些和糖代谢途径关系密切的酶的作用等有关[11]，本研究虽然观察到复方消渴降糖胶囊具有良好的控制血糖的效果，但其作用机制尚不能解释清楚。由于复方中药在治疗糖尿病疗效方面体现在多靶点，多路径的调控，所以研究复方消渴降糖胶囊对促进胰岛素的分泌，调节体内糖、蛋白质、脂肪的代谢及自由基的影响以及其抗炎及免疫调节作用[15]是下一步研究的方向。

[1] 广西壮族自治区卫生厅.广西中药材标准[M].南宁：广西科学与技术出版社，1992：45.

[2] 王北婴，李仪奎.中药新药研制开发技术与方法[M].上海：上海科学技术出版社，2001：601-602.

[3] 张文，陈建伟，李祥，等.猴头菌粉提取物对2 型糖尿病小鼠降血糖作用研究[J].中国实验方剂学，2012，18（7）：176-180.

[4] 徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学[M].3版.北京：人民卫生出版社，2003：1517.

[5] 宁学洪，宁学玲，吴日明.黄桑饮降糖作用实验研[J].中国药房，2008，19（33）：2571-2573.

[6] 吴慧星，李晓帆，李荣，等.番石榴叶中抗氧化活性成分的研究[J].中草药，2010，41（10）：1593-1597.

[7] 邵萌，范春林，王英，等．番石榴叶的化学成分及药理活性研究进展[J].天然产物研究与开发，2009，21：525-528.

[8] 王波，黄承钰，王烨源，等.番石榴叶水提取物对糖尿病小鼠胰岛形态结构和功能的影响[J].卫生研究，2009，38（5）：613-616.

[9] 李振红，陆阳，刘晶星.天花粉化学成分与药理活性[J].国外医药：植物药分册，2003，18（1）：1-4.

[10] Selvin E，Ning Y，Steffes MW，et al.Glycated hemoglobin and the risk of kidney disease and retinopathy in adults with and without diabetes[J].Diabetes，2011，60（1）：298-305.

[11] 张兴燊，黄摇昕，潘能玉.古钩藤水提液对正常小鼠血糖影响的实验研究[J].时珍国医国药，2010，21（10）：2669.

[12] 陆海鹏，李彬.广西莪术水提取物对小鼠的急性毒性反应研究[J].中国民族民间医药，2010，19（12）：193.

[13] 李爱英，袁江永.苦葫芦中有效成分的提取分离及降血糖作用研究[J].中国药房，2007，18（18）：1 364.

[14] 宋晓勇，刘强，王子华.蒲公英多糖降糖药理作用研究[J].中国药房，2009，27（20）：2095-2097.

[15] 陆海鹏，李彬.复方黑芝麻胶囊调节免疫功能作用的实验研究[J].云南中医中药杂志，2010，31（4）：50-52.