老年下呼吸道感染患者铜绿假单胞菌临床检测与耐药性分析

牛安琳 (安阳市第三人民医院检验科，河南 安阳 455000)

老年人由于身体器官衰退，免疫功能下降，是医院感染的高危人群〔1〕。铜绿假单胞菌是医院内感染最常见的致病菌之一，是一种条件致病菌，可导致人体局部化脓性炎症和全身性感染，严重时危及患者生命〔2〕。该菌对大多数抗生素耐药，在临床上治愈较困难，特别是老年患者，多数伴有一种或几种基础疾病，下呼吸道感染铜绿假单胞菌后，往往难以治愈。本文主要了解本院老年下呼吸道感染患者铜绿假单胞菌感染状况及该菌的耐药性。

1 资料与方法

1.1 一般资料 我院2009年6月至2010年12月送检的老年下呼吸道感染住院患者痰标本112份，分离培养出112株铜绿假单胞菌株。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 容器采用一次性无菌平皿或无菌试管，所有患者取晨痰，采集方法为患者晨起后，先用生理盐水漱口，然后咳痰至准备好的容器内。气管切开患者用吸痰器取呼吸道分泌物于无菌试管中，即时送检。

1.2.2 检测设备及试剂 DL-96分析仪，试剂为珠海生物鉴定分析系统(法国梅里埃公司);水解酪蛋白(M-H)琼脂(杭州天和微生物试剂有限公司)，药敏纸片(北京天坛生物技术开发公司)。

1.2.3 检测方法 对采集的标本先行涂片，确定为合格后进行接种，对不合格标本进行重新取样直至合格。痰培养阳性且为优势菌者进行分纯，细菌采用PL-16分析仪鉴定，药敏试验采用纸片扩散(K-B)法，对临床常用抗菌药物进行体外敏感试验;质控菌株为铜绿假单胞菌(ATCC 27853);β-内酰胺酶检测采用协同法。

1.2.4 采用标准 (1)菌株分离培养标准:依据《全国临床检验操作规程》进行常规分离培养和鉴定。(2)耐药性结果标准:根据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS，2008年)标准。

2 结果

2.1 铜绿假单胞菌药敏检测结果 对112株铜绿假单胞菌进行体外耐药性检测，结果显示铜绿假单胞菌对多种抗生素耐药，特别是对氨苄西林/舒巴坦、庆大霉素、哌拉西林、妥布霉素、环丙沙星耐药率均超过40%;对亚胺培南、氨曲南敏感性较好，耐药率分别为12.5%，16.96%。见表1。

表1 112株铜绿假单胞菌体外耐药性检测结果

2.2 β-内酰胺酶阳性菌药敏检测结果 本组112株铜绿假单胞菌采用协同法对细菌进行β-内酰胺酶测定，共检出β-内酰胺酶阳性菌株31株，占27.68%。31株β-内酰胺酶阳性菌株药敏检测结果显示，β-内酰胺酶阳性菌株对哌拉西林、氨苄西林/舒巴坦、庆大霉素、环丙沙星、妥布霉素100%耐药，对哌拉西林/他唑巴坦、头孢吡肟、阿米卡星耐药性高达70%以上，对亚胺培南、氨曲南敏感性较好，耐药性分别为19.35%与16.13%。见表2。

表2 31株铜绿假单胞菌β-内酰胺酶阳性菌体外耐药性检测结果

3 讨论

老年患者由于呼吸器官退行性改变，肺组织弹性、支气管纤毛系统、呼吸道黏液功能差，咳嗽反射及呼吸道功能下降〔3〕，特别是长期住院患者，疾病导致免疫功能降低，而且大多数患者常伴发一种或多种基础疾病，加之治疗期间各种治疗手段如呼吸机、各种侵入性操作等，使老年患者更容易发生下呼吸道感染。铜绿假单胞菌是老年下呼吸道感染最常见的条件致病菌，研究表明，铜绿假单胞菌对多种抗菌药物表现出天然耐药。随着抗菌药物的广泛使用，该细菌的耐药性也随之提高，在天然耐药基础上经抗生素诱导产生获得性耐药，本组112例患者痰培养出的菌株药敏性试验结果显示，铜绿假单胞菌对大多数抗生素耐药，特别是对氨苄西林/舒巴坦、庆大霉素、哌拉西林、妥布霉素、环丙沙星耐药率均超过40%。

铜绿假单胞菌之所以耐药性强，主要原因是该菌具有内源性耐药机制与外源性耐药机制，内源性耐药机制主要表现在菌株可产生大量头孢菌素酶(Ampc)、使外膜孔蛋白(OprD)缺失、靶位突变、生物膜形成〔4〕，生物膜形成不仅对细菌形成保护作用，降低抗生素的杀菌效果，更重要的是还能诱导产生外源性耐药机制。外源性耐药机制主要表现为铜绿假单胞菌在生物膜的诱导下，发生细胞内酶的变化及β-内酰胺酶的产生，β-内酰胺酶水解后，导致β-酰胺类抗生素被灭活〔5〕，因此，铜绿假单胞菌β-内酰胺酶阳性菌具有超强的耐药性。本文对112株铜绿假单胞菌进行β-内酰胺酶测定，检出β-内酰胺酶呈阳性菌31株，占27.68%。药敏试验检测结果显示，β-内酰胺酶阳性菌的耐药性大大高于β-内酰胺酶阴性菌，对哌拉西林、氨苄西林/舒巴坦、庆大霉素、环丙沙星、妥布霉素100%耐药。

对铜绿假单胞菌敏感性排列前五位的依次是亚胺培南、氨曲南、头孢他啶、阿米卡星、头孢吡肟;β-内酰胺酶阳性菌株除对氨曲南、亚胺培南、头孢他啶较敏感外，对其他抗生素耐药率较高。亚胺培南是碳青霉烯类抗生素，是目前临床上普遍采用的治疗下呼吸道感染的广谱抗生素，其药理作用是经过独特的外膜孔道迅速进入细胞内部杀灭细菌〔6，7〕，特点是广谱、高效，对β-内酰胺酶具有高度稳定性，是重症感染患者的首选。氨曲南与大多数β-内酰胺类抗生素不同，它不诱导细菌产生β-内酰胺酶，其药理作用是通过与敏感需氧革兰阴性菌细胞膜上青霉素结合蛋白高度亲和而抑制细胞壁的合成〔8〕，同时对细菌产生的大多数β-内酰胺酶高度稳定。

综上所述，铜绿假单胞菌作为一种条件致病菌，分布极为广泛，一方面寄生在宿主的身体里，一旦人体免疫力下降就会发生感染，而且对住院患者的侵入性操作，各种医疗器械的介入治疗及通过医护人员手等均有机会侵入机体;另一方面抗生素的长期使用造成菌群失调亦是引起感染的重要原因。而且抗生素的大量使用导致铜绿假单胞菌耐药性逐年上升，铜绿假单胞菌耐药性上升是造成老年患者下呼吸道感染迁延不愈及病情加重的重要原因。因此，应根据体外药敏结果制定个体化的合理用药方案，在治疗过程中严格执行各种无菌操作规程，强化病室的消毒隔离管理，最大限度地预防医院感染的发生。

1 邢志广，廖 卫，杨焦峰.新乡地区2001年～2006年铜绿假单胞菌对17种临床常用抗生素的耐药性变迁〔J〕.中国抗生素杂志，2008;33(4):244-6.

2 李 霞.气管切开病人铜绿假单胞菌感染及耐药分析〔J〕.齐鲁医学杂志，2007;22(3):237-8，240.

3 朱 琴，彭少华，李从荣.等.产金属β-内酰胺酶铜绿假单胞菌的协同试验方法研究〔J〕.中华医院感染学杂志，2003;13(10):969-71.

4 方向群，刘又宁.藻酸盐在铜绿假单胞菌肺部感染中的致病作用及细胞因子的关系〔J〕.中华医院感染学杂志，2004;14(2):126-9.

5 姚冬梅，陈若虹，郑 荣，等.老年慢性病患者下呼吸道院内感染病原菌分布及耐药性监测〔J〕.中南大学学报·医学版，2004;29(2):224-6.

6 Aktas Z，Poirel L，Salcioglu M，et al.PER-1 and 0XA-10-like beta lactamases in ceftazidime-resistant Pseudomonas aeruginosa isolates from intensive care unit patients in lstanbul，Turkey〔J〕.Chin Microbiol Infect，2005;11(3):193-8.

7 章泽豹，郭亚春，蒋景华.下呼吸道感染患者铜绿假单胞菌耐药性分析〔J〕.中华医院感染学杂志，2008;18(2):270-1.

8 吴明芝.老年患者下呼吸道感染铜绿假单胞菌96例临床分析与耐药性调查〔J〕.检验医学与临床，2009;6(10):755-6.