金刚藤分散片中薯蓣皂苷元HPLC法测定研究

刘卫东 王建成 付庆霞

金刚藤具有清热解毒、消肿散结之功效，药效学与临床实验显示，金刚藤在治疗妇科炎症及肿瘤方面有着明显的疗效，而且还具有降低血糖、镇痛的药理作用［1］。分散片与一般片剂相比，崩解时间短，分散状态佳，临床应用显效快速。《卫生部药品标准》中药成方制剂第9册中收载的“金刚藤糖浆”质量标准中无含量测定项。为了有效控制金刚藤分散片的质量，笔者参考金刚藤(菝葜)及薯蓣皂苷元含量测定研究的相关资料［2］，建立了薯蓣皂苷元的含量测定项，采用高效液相色谱法测定成品制剂中薯蓣皂苷元的含量，并进行了相应的方法学研究。试验结果表明，该方法灵敏度高，重现性好，阴性无干扰，能很好地控制药品的质量。

1 材料与方法

1.1 材料 高效液相色谱仪(SPD－10Avp检测器，LC－10ATvp溶剂输送泵，岛津公司)，ANASTAR色谱工作站;Discovery C 18柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm);薯蓣皂苷元对照品(中国药品生物制品检定所，批号:1539－200001);金刚藤分散片自制(批号:070118、070119、070120);乙腈为色谱纯，水为纯化水，其他试剂为分析纯。

1.2 方法

1.2.1 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈－水(90∶10)为流动相;流速为1 ml/min;柱温为35℃;检测波长为203 nm。理论板数按薯蓣皂苷元峰计算应不低于8000。图谱见图1、图2、图3。

图1 对照品溶液

1.2.2 对照品溶液的制备 精密称取薯蓣皂苷元对照品适量，加乙腈制成每1 ml含0.2 mg的溶液，即得。

图2 供试品溶液

图3 阴性对照溶液

1.2.3 供试品溶液的制备 参考《中国药典》2010年版一部中菠葵原药材的含量测定方法［3］，并根据上述试验结果，将供试品溶液的制备方法定为:取金刚藤分散片10片，精密称定，研细，取约2 g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醇适量，加热回流至提取液近无色，挥去溶剂，加水50 ml与盐酸10 ml，再加石油醚50 ml，水浴回流水解3 h，冷却，用石油醚(60℃ ～90℃)振摇提取5次，每次40 ml，合并提取液，蒸干，残渣加乙腈超声溶解并转移至25 ml量瓶中，加乙腈至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

1.2.4 线性关系考察 精密称取薯蓣皂苷元对照品20.0 mg，置50 ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取上述溶液各 1 ml、3 ml、5 ml、7 ml、9 ml置 10 ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀;分别精密吸取上述溶液各20 μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图。以薯蓣皂苷元的峰面积(A)为纵坐标(Y)，以薯蓣皂苷元溶液的浓度(μg/ml)为横坐标(X)，按最小二乘法进行线性回归;回归方程:Y=5513.7 X+21862，r=0.9996。

1.2.5 加样回收率试验 取已知含量的金刚藤分散片样品(批号:070119，含量:1.56 mg/片)10 片，研细，混匀，取约1 g，精密称定，平行5份，精密加入浓度为0.312 mg/ml的对照品溶液10 ml，按供试品溶液的制备方法制备，作为样品溶液，分别精密吸取上述样品溶液各20 μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，计算回收率。

1.2.6 精密度试验 精密吸薯蓣皂苷元对照品溶液(0.218 mg/ml)20 μl，注入液相色谱仪，重复测定 5 次，RSD为1.06%，表明仪器精密度良好。

1.2.7 重复性试验 取同一批号(批号:070119)金刚藤分散片样品，按供试品溶液的制备方法制备，平行6份，分别测定，RSD为1.09%，结果表明分析方法重复性良好。

1.2.8 稳定性试验 精密吸取金刚藤分散片供试品溶液20 μl，注入液相色谱仪，在 0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h 分别进样，RSD为1.03%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

1.2.9 样品测定 精密称取薯蓣皂苷元对照品适量，加乙腈制成每1 ml含0.2 mg的溶液，作为对照品溶液;取本品10片，精密称定，研细，取粉末约2 g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醇适量，加热回流至提取液近无色，挥去溶剂，加水50 ml与盐酸10 ml，再加石油醚50 ml，水浴回流水解3 h，冷却，用石油醚(60℃ ～90℃)振摇提取5次，每次40 ml，合并提取液，蒸干，残渣加乙腈超声溶解并转移至25 ml量瓶中，加乙腈至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μl，注入液相色谱仪。

根据上述试验结果及稳定性试验结果，考虑到原药材的来源，以及制剂生产、贮藏等因素，暂定本品每片含金刚藤以薯蓣皂苷元(C27H42O3)计，不得少于1.3 mg。

2 结果

2.1 线性关系考察试验结果表明，薯蓣皂苷元在40～360 μg/ml浓度范围内，浓度与其峰面积线性关系良好。

2.2 加样回收率试验 试验结果表明，金刚藤分散片含量测定的加样回收率良好。见表1。

2.3 重复性试验结果表明分析方法重复性良好。

2.4 样品含量测定结果 见表2。

表1 加样回收率试验结果

表2 样品含量测定结果

3 讨论

本研究首次建立了测定金刚藤分散片有效成分薯蓣皂苷元的HPLC的方法，色谱条件为:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈一水(90∶10)为流动相;流速为1 ml/min;柱温为35℃;检测波长为203 nm。理论板数按薯蓣皂苷元峰计算应不低于8000。对该方法进行了干扰试验、回收率试验、药液稳定性、重现性与精密度等研究，表明所建HPLC方法测定金刚藤分散片中的薯蓣皂苷元准确快速，为金刚藤分散片的进一步开发研究奠定了基础。

［1］邓家刚，陈壮．金刚藤活性成分与药效学及临床应用研究［J］．河南中医学院学报，2005，20(3):23 －24．

［2］蒋美红，高中洪，杨祥良．RP－HPLC测定金刚藤中薯蓣皂苷元的含量［J］．中国药学杂志，2005，40(4):299 －301．

［3］吕翼，吕金清，裴学军．药用金刚藤名实考证［J］．河北中医杂志，2002，24(5):47 －48．