气相色谱法测定瑞格列奈原料药的有机溶剂残留量*

梁丽娟，黄 薇

(天津医药集团津康制药有限公司，天津 300270)

瑞格列奈属于甲基苯甲胺苯甲酸(CBMA)家族的一种新型口服降糖药物，能促进胰岛素分泌，具有吸收快、起效快、作用时间短的特点，可在Ⅱ型糖尿病患者中模拟生理性胰岛素分泌，有效控制餐后高血糖。《中国药典》2010年版［1］收载了该原料药，规定进行二氯甲烷与正己烷的残留量检查。根据本产品生产工艺中使用了《中国药典》2010年版规定的二类溶剂正己烷和甲苯，以及三类溶剂丙酮、乙醇和乙酸乙酯，《中国药典》规定方法不能囊括工艺中使用的全部五种溶剂，故笔者参考文献［2-4］采用气相-顶空进样法建立了瑞格列奈原料药的残留溶剂检测方法，方法简便准确。

1 仪器与试药

1.1 仪器 安捷伦6890N气相色谱仪(FID检测器)，安捷伦7694E自动顶空进样仪。

1.2 试药 正己烷、丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲苯及二甲基甲酰胺均为色谱纯试剂，高纯氮气由天津东方气体厂提供。瑞格列奈(由天津医药集团津康制药有限公司提供，批号为 20110401、20110501、20110502)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 检测器：200℃;气化室：150℃;色谱柱：Agilent DB-FFAP毛细管色谱柱(50 m×0.32 mm);柱温：起始温度40℃，维持3 min，以20℃/min的速率升至120℃，维持6.5 min;顶空平衡温度：80℃;顶空平衡时间：30 min;进样时间：1 min。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液 分别称取正己烷145 mg、乙酸乙酯 2 500 mg、乙醇 2 500 mg、甲苯 445 mg、丙酮 2 500 mg，精密称定，置盛有约10 ml二甲基甲酰胺的100 ml量瓶中，以二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液;精密量取对照品贮备液1 ml，置盛有约10 ml二甲基甲酰胺的50 ml量瓶中，以二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀;精密量取5 ml，置10 ml顶空瓶中，密塞，即得对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液 称取供试品约1 g，精密称定，置10 ml量瓶中，以二甲基甲酰胺超声溶解并稀释至刻度，摇匀;精密量取5 ml，置10 ml顶空瓶中，密塞，振摇使溶解，即得供试品溶液。

2.2.3 空白溶剂溶液 精密量取二甲基甲酰胺2 ml，置10 ml顶空瓶中，密塞，即得空白溶剂溶液。

2.3 专属性试验 精密量取空白溶剂溶液和对照品溶液，依法测定，出峰顺序依次为：正己烷(2.74 min)、丙酮(4.01 min)、乙酸乙酯(4.80 min)、乙醇(5.44 min)、甲苯(6.94 min)和二甲基甲酰胺(12.23 min)，见图1。如图1所示，二甲基甲酰胺对正己烷峰、丙酮峰、乙酸乙酯峰、乙醇峰及甲苯峰检出无干扰，且正己烷、丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲苯及二甲基甲酰胺六个峰之间彼此分离度均大于2.0。

2.4 线性关系及范围 分别精密量取对照品贮备液0.25、0.5、1.0、1.5 和 2.0 ml置 50 ml量瓶中，以二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀。分别精密量取5 ml，置10 ml顶空瓶中，密塞，依法分别测定3次，求取测定值，以溶液浓度为横坐标、峰面积为纵坐标分别求回归曲线及相关系数。本方法中己烷、丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲苯分别在 7.3 ～ 58.4、125.7 ～ 1 005.5、125.3 ～1 002.7、125.9 ～1 007.2 和 22.4 ～179.5 μg/ml范围内有良好线性关系。结果见表1。

图1 空白溶液(A)对照品溶液(B)气相色谱图

表1 各待测溶剂回归曲线及相关系数(n=3)

2.5 精密度试验 取对照品溶液重复进样5次，依法测得正己烷、丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲苯峰面积的RSD分别为 0.4%、1.2%、1.2%、1.5%和 1.5%。

2.6 回收率试验 精密称取瑞格列奈(批号20110401)样品500 mg共6份，置10 ml顶空瓶中，分别精密加入对照品溶液5 ml，密塞，振摇使溶解，依法测定。结果正己烷、丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲苯回收率分别为97.5%、95.6%、96.6%、97.8% 和 94.8%;RSD分别为1.4%、1.6%、1.7%、1.2% 和 1.2%，基质(瑞格列奈)不影响各待测溶剂峰的检出，结果见表2。

2.7 最小检测限试验 取对照品溶液逐级稀释，精密量取稀释液2 ml，置顶空瓶中，密塞，依法进样，按信噪比为3∶1，测得本方法色谱条件下正己烷、丙酮、乙酸乙酯、乙醇和甲苯的最小检出量分别为0.4、0.5、0.8、0.7 和 0.9 ng。

2.8 样品测定结果 取瑞格列奈原料药3批样品，依法分别测定3次，结果见表3。本结果均符合《中国药典》2010年版要求的正己烷、丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲苯各自不得大于 0.029%、0.5%、0.5%、0.5% 和0.089%的限度要求。

表2 各成分加样回收率试验结果(n=6)

表3 瑞格列奈原料药样品残留溶剂测定结果(n=3)

3 讨论

3.1 瑞格列奈在水中不溶，待测有机溶剂为正己烷、丙酮、乙酸乙酯、乙醇和甲苯，既有低沸点溶剂，也有高沸点溶剂，故采用色谱纯二甲基甲酰胺作为溶样溶剂，既能保证样品完全溶解，亦能保证色谱纯的溶剂不影响微量待测溶剂的检出。

3.2 本方法建立难点在于使正己烷、丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲苯及二甲基甲酰胺等6个溶剂峰完全分离。曾使用《中国药典》规定的Agilent HP-5柱(30 m×0.53 mm)，甲苯与二甲基甲酰胺峰互相重叠，不能分离;使用Agilent DB-624柱(30 m ×0.32 mm)，各个溶剂峰分离完全，但是氮气流量为0.8 ml/min，载气流量过小，导致甲苯峰展宽，检测灵敏度低;使用Agilent DBFFAP柱(50 m×0.32 mm)，6个溶剂峰分离完全，氮气流量为3.0 ml/min，峰形尖锐。最终选择Agilent DBFFAP毛细管色谱柱(50 m×0.32 mm)。

3.3 本方法采用程序升温法，设置合适的氮气流量，各个待测溶剂峰出峰时间恰当，分离度良好，且峰形尖锐，各峰理论板数依次为：正己烷26 000、丙酮32 000、乙酸乙酯26 000、乙醇27 800、甲苯21 300，均符合《中国药典》2010年版的规定。

试验表明，本气相色谱法专属性强，灵敏度高，能在程序升温条件下同时测定5种残留溶剂的含量，方法快捷准确，可用于瑞格列奈原料药中残留溶剂的限度检查。

1 中国药典.二部.2010：1060

2 王卫.药品中有机溶剂残留量及其测定.天津药学，2001，13(3)：26

3 田晨煦，徐小平，廖丽云，等.毛细管气相色谱法测定比阿培南中5种有机溶剂残留量.中国抗生素杂志，2006，31(3)：187

4 梁振益，王永强，徐静，等.顶空毛细管气相色谱法测定头孢他美钠中有机溶剂残留量.海南大学学报·自然科学版，2007，30(1)：43