化瘀无糖颗粒制备工艺的筛选

刘向红，陈金娜

(1山东大学齐鲁医院，济南250012;2山东中医药大学)

化瘀颗粒为山东大学齐鲁医院自制制剂，由人参、蒲公英、漏芦、水蛭等十三味中药组成，用于肿瘤术后及放化疗后，具有化瘀解毒、镇痛及增强机体免疫力等作用。为了扩大适应证，使其可用于糖尿病患者和糖耐量异常人群，2011年8月～2012年5月，我们在原制剂基础上进行一系列工艺改进，研制出了化瘀无糖颗粒。现将其制备工艺研究报告如下。

1 主要仪器及药品

高效液相色谱仪(6CE，美国Waters公司)、Waters 2996检测器、Empower600色谱工作站、分析天平(CP2250，奥豪斯国际贸易有限公司)、876-Ⅰ型真空干燥箱(南通科学仪器厂)，旋转蒸发器(RE-52A，上海亚荣生化仪器厂)，贝利微粉机(BFMYT6B，济南贝利粉技术工程有限公司)。咖啡酸对照品(批号110885-200102，购自中国食品药品检定研究院)，糊精(东阿阿胶集团，批号20110115)，阿斯巴甜(郑州泰维生物技术有限公司)。均为药用。化瘀颗粒所含的十三味中药材均由济南药业集团购得，经山东中医药大学附属医院张学顺主任药师鉴定，均符合药典规定。

2 方法与结果

2.1 化瘀无糖颗粒提取工艺的筛选 人参、水蛭制成超微粉，余蒲公英等11味中药按传统方法加水煎煮［1］。

2.1.1 试验设计 按处方比例称取上述药材9份，每份试验药材重264 g。采用L9(34)正交试验法［2］(见表1)，对提取效果影响较显著的因素［加水量(A)、煎煮次数(B)、煎煮时间(C)］进行观察，以咖啡酸含量和干膏得量(权重系数均为0.5，进行加权求和计算综合评分，满分10分)作为指标进行综合评价。

表1 L9(34)水提取工艺因素水平

2.1.2 咖啡酸含量测定 ①色谱条件:Luna C18色谱柱，以甲醇∶0.1%磷酸水溶液(30∶70)为流动相等度洗脱，流速:1 mL/min。检测波长为323 nm，柱温25℃。理论板数按咖啡酸峰计算应不低于3 000。②对照品溶液的制备:精密称取于105℃干燥至恒重的咖啡酸5.06 mg置25 mL量瓶中，加甲醇适量，超声溶解，放冷并稀释，得浓度为202.4 μg/mL的咖啡酸对照品储备液。③供试品溶液的制备:精密称取相当于蒲公英原药材0.75 g的药材干膏粉，移至50 mL锥形瓶中，精密加5%甲酸的甲醇溶液10 mL，密塞，摇匀，称重，超声处理(功率250 W，频率40 kHz)30 min，取出，放冷，称重，用5%甲酸的甲醇溶液补足失重，摇匀，离心(3 300 r/min，8 min)，取上清液，0.22 μm 微孔滤膜滤过，备用。④测定:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪测定。⑤线性关系考察:分别精密量取上述对照品溶液 0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、6.0 mL，加甲醇，得浓度为 10.12、20.24、40.48、60.72、80.96、121.44、202.40 μg/mL 的对照品溶液。精密吸取10 μL注入液相色谱仪中测定峰面积，以咖啡酸对照品的峰面积(Y)对进样量(X)进行线性回归，得到回归方程:Y=62 305X－37 581，r=0.999 9。咖啡酸在 10.12 ～202.40 μg 范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系。

2.2 统计学方法 采用SPSS16.0统计软件，计量数据用¯x±s表示，数据比较采用方差分析。α=0.05。

2.3 化瘀无糖颗粒提取的正交试验结果 见表2、3。通过对正交试验结果直观分析，各因素影响次序为B(煎煮次数)＞C(煎煮时间)＞A(加水量)。方差分析表明，B因素对综合评分有显著性影响，结合K值分析，确定最佳提取工艺为 A2B3C3，即加入10倍量的水，煎煮3次、2 h/次。

表2 化瘀无糖颗粒提取工艺正交试验结果

表3 综合评分方差分析表

2.4 化瘀无糖颗粒提取工艺验证试验结果 称取处方量药材3份，按上述制备工艺进行验证，结果与正交实验结果相符(见表4)，说明本提取工艺稳定可行。

表4 化瘀无糖颗粒提取工艺验证试验结果

2.5 颗粒成型工艺的筛选

2.5.1 浸膏粉的制备 称取处方量药材，按优化所得工艺煎煮提取，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.30～1.35的清膏，60℃真空干燥得干浸膏，粉碎，过100目筛，加入人参、水蛭超微粉，混匀，备用。

2.5.2 样品的制备 将上述浸膏粉与糊精、阿斯巴甜混合均匀，干法［3，4］制粒(设备参数:送料变频器速率22.0、压片变频器转速20.5、制粒变频器速率21.0)、整粒、分装即得。

2.5.3 辅料用量的选择 选用糊精［5，6］作为赋型剂。取上述干浸膏粉分别加入5%、10%、15%糊精与不加糊精的干浸膏粉分别干法制粒，观察颗粒的成型性、吸湿性、溶化性［7，8］。

对这3项指标根据其对颗粒剂质量评价的作用综合评分(权重系数分别为 0.5、0.25、0.25)，总分为10分。详见表5。由表5可知10%糊精为最佳用量。

表5 不同比例糊精制化瘀无糖颗粒质量评价情况

2.5.4 颗粒流动性的测定 用休止角［8，9］来衡量，采用固定漏斗法［10］，即将3只漏斗串联并固定于水平放置的坐标纸上适宜高度处，使漏斗下口距坐标纸的距离为H，小心地将样品沿漏斗壁倒入最上面的漏斗中，直到最下面漏斗药粉的圆锥体尖端接触到漏斗口为止，此时由坐标纸测出圆锥体底部的直径R，计算出休止角(tgα=2H/R)。每个批次测定3次，求其均值。予5批样品测定，休止角均值分别为28.07°、28.39°、28.72°、28.72°、28.39°，相对标准偏差(RSD)为0.96%，表明颗粒流动性均较好。

2.6 矫味剂用量的筛选 处方中含水蛭原粉，具腥味，且提取物有一定的苦味，故选用阿斯巴甜［11，12］加以矫味，比较阿斯巴甜用量分别为粉末总量0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%时的口感，结果表明阿斯巴甜用量为0.3%时甜度适宜，口感佳。

3 讨论

化瘀颗粒为临床经验方，功效扶正益气，化瘀去毒。肿瘤术后及放化疗后，机体元气大伤，五脏俱虚，方中人参苦甘而温，大补元气、补脾益肺;蒲公英清热解毒、消肿散结，可清尚存瘤毒;佐以水蛭等逐瘀行气、软坚散结之品，可消瘤毒所致气血瘀滞，诸药合用共奏扶正祛邪之效。用于各种肿瘤防治及放疗化疗、肿瘤术后的辅助治疗，临床应用多年疗效确切。

原化瘀颗粒以蔗糖为辅料，易潮解变质，不宜久存;且蔗糖具有较高生物活性，能诱发胃炎、龋齿、糖尿病及肥胖，不宜用于年老及禁糖患者。本试验在原制剂基础上进行剂型改革，研制出化瘀无糖颗粒剂型，从而提高了药物稳定性，保证了临床疗效;改为无糖剂型后可减少辅料用量，便于携带和服用;扩大了适应证，解除了糖尿病患者和糖耐量异常的人群的用药限制［14］。

本试验旨在研制其无糖剂型，以扩大适应证，故未改变提取溶媒。因其君药人参以原粉入药，臣药中以蒲公英为主药，故选择咖啡酸作为含量测定指标结合干膏量的综合评分筛选提取工艺。根据本试验结果化瘀无糖颗粒最佳提取工艺条件为A2B3C3，即加10倍量水，煎煮3次，每次2 h。

干法制粒具有辅料用量少、成本低、工艺简单、周期短、污染小等优点，适用于中药颗粒剂及片剂的制备，试验中发现干浸膏粉直接制颗粒成型性尚可，但吸湿性较强易粘连轧轮，故需要加入辅料;在辅料选择方面，考虑到微晶纤维素水溶性较差、乳糖成本太高、淀粉用量大，故我们选用糊精作为赋型剂。

通过对本颗粒成型工艺的筛选发现，糊精用量为干浸膏量的10%时颗粒的成型性、吸湿性、溶化性均优于其他比例;阿斯巴甜用量为粉末总量的0.3%时甜度适宜。

总之，工艺验证试验表明加10倍量水煎煮3次，每次2 h;糊精用量为干浸膏量的10%，阿斯巴甜用量为粉末总量的0.3%，采用干法制粒工艺制得的化瘀无糖颗粒各质量指标均符合《中国药典》2010年版规定。因此，采用本试验筛选所得工艺可成功制备化瘀无糖颗粒，且该制备工艺稳定可行。

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