糖尿病合并肺结核患者胸腔积液中肿瘤坏死因子-α和超敏C反应蛋白的检测价值

姜继军

江苏省泰州市人民医院感染科，江苏 泰州 225300

糖尿病和结核病均属临床的常见病和多发病，近年随着人们生活水平的提高，糖尿病的发生率增加，由于糖尿病的存在及糖尿病病程的加重，使结核恶化或使已治愈的结核复发[1-2]。结核患者常发生胸腔积液，胸腔积液是常见的临床体征，是指液体不正常地积聚在胸膜腔内，常压迫周围肺组织，影响患者的呼吸功能。糖尿病合并结核性胸腔积液时常互相影响，使血糖控制及胸腔积液的吸收难度均增加。近年来有研究显示肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和超敏C反应蛋白（hs-CRP）在糖尿病患者血清中明显增高，对促进糖尿病的进展有一定意义[3]。而对糖尿病伴有结核患者胸腔积液中TNF-α和hs-CRP的表达特点，目前尚未见报道。本实验关注糖尿病合并肺结核患者胸腔积液中TNF-α和hs-CRP的表达，初步探讨二者的关系及临床意义，旨在为临床工作提供理论支持。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本组糖尿病合并肺结核并发胸腔积液的患者均为我院2009年6月～2011年1月收治的患者，临床随访资料完整。排除标准：①有其他严重的内脏器官疾病的患者；②伴有风湿免疫系统疾病的患者；③伴有恶性肿瘤的患者。观察组共88例，其中，男49例，女39例，患者年龄35～86岁，平均54.5岁。选取结核性胸腔积液50例作为对照组，其中，男26例，女24例，患者年龄35～85岁，平均53.5岁。两组一般临床特征比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 检测方法

两组均抽取胸腔积液，离心后分离上清液，置于-20℃的冰箱中冻存，标本均于1周内集中检测。TNF-α的检测应用酶联免疫吸附实验，严格按照说明书操作，全部由同一检验医师进行。具体方法：加入50 μL的标准品或样品于所设定的孔中；在每孔中加入100μL一抗，轻轻摇动微孔板混匀1min；室温避光孵育30 min；洗板3次，每次加入250 μL洗液，最后一次尽量甩干并在吸水纸上吸干；每孔加入150 μL二抗（避免阳光直射和工作台温度过低，孵育时适当覆盖微孔板）；室温避光孵育 30 min；洗板 3次，每次加入 250 μL洗液，最后一次尽量甩干并在吸水纸上吸干；加入100 μL的TMB底物（底物本身无色，出现颜色变化不能使用）；室温避光孵育孵育10～15 min，加入100 μL的终止液终止反应，在450 nm下读OD值(读数前使用无绒布擦拭微孔底部水分和指模)，均由同一技师操作，严格质控。hs-CRP的检测应用免疫比浊法进行检测，操作均由同一技师完成，努力减少误差，严格质控。

1.3 统计学方法

所有实验数据应用SAS 6.12进行统计分析，计量资料以均数±标准差（）表示，两组间比较采用t检验，同时对数据进行线性相关分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 TNF-α和hs-CRP在观察组与对照组中的表达

观察组中TNF-α和hs-CRP的表达量明显高于对照组。见表1。

表1 观察组与对照组中TNF-α和hs-CRP的表达比较（，mg/L）

表1 观察组与对照组中TNF-α和hs-CRP的表达比较（，mg/L）

组别 例数 TNF-α hs-CRP观察组对照组88 50 t值 P值231.93±36.53 125.41±23.19 11.20 0.008 2 12.03±3.28 5.42±1.29 8.75 0.012 5

2.2 观察组中是否伴有糖尿病肾病患者胸腔积液中TNF-α和hs-CRP的表达差别

观察组中伴有糖尿病肾病患者胸腔积液中TNF-α和hs-CRP的表达量明显高于不伴有糖尿病肾病的患者（均P<0.05）。 见表 2。

表2 观察组中是否伴有糖尿病肾病患者胸腔积液中TNF-α和 hs-CRP 的表达比较（，mg/L）

表2 观察组中是否伴有糖尿病肾病患者胸腔积液中TNF-α和 hs-CRP 的表达比较（，mg/L）

项目 例数 TNF-α hs-CRP不伴有糖尿病肾病伴有糖尿病肾病50 38 t值 P值181.43±37.46 309.87±28.54 13.42 0.005 6 10.46±3.58 15.42±3.49 5.67 0.023 1

2.3 TNF-α和hs-CRP在观察组中表达的相关性

对观察组中TNF-α和hs-CRP的表达进行线性分析，结果显示 TNF-α和 hs-CRP的表达呈正相关（r=0.43，P<0.05）。

3 讨论

随着细胞生物学与分子生物学的进展，胸腔积液的免疫学检查受到关注，在鉴别其性质中有重要意义。hs-CRP是人体肝脏中合成的一种典型急性期反应蛋白，在人体内分布广泛，正常情况下存在于血清或血浆中。损伤性疾病和炎性疾病时，患者血清中hs-CRP浓度可显著升高。有研究显示糖尿病发生时，机体微环境中可出现hs-CRP的表达升高，而且其与糖尿病的病情程度相关，其机制可能与损伤过程中激活炎性反应有关[4-5]。TNF-α是一种主要由单核巨噬细胞产生的细胞因子，具有复杂的生物学活性[6]，包括抗肿瘤、抗病毒、免疫调节和诱发炎症反应等。TNF-α作为一种促炎因子，既可介导细胞的凋亡过程，又可促进细胞的再生过程。TNF-α常与其他细胞因子共同参与机体的生长发育和维持内环境稳定，同时又介导感染、创伤及免疫应答反应[7]。

笔者的实验结果显示TNF-α和hs-CRP在观察组中的表达量明显高于对照组，提示TNF-α和hs-CRP在糖尿病合并肺结核患者的发生发展中具有重要作用。患者发病后可刺激单核巨噬细胞系统和血管内皮细胞不断产生TNF-α等因子，通过直接启动炎症反应或通过刺激其他炎症介质的释放，触发级联反应，导致患者机体内环境中TNF-α的水平明显升高。TNF-α作为免疫病理损伤中的重要介质与病情的严重程度密切相关，在一定程度上可反映机体炎症的程度，对疾病的病情监测可能具有一定意义。TNF-α可刺激单核-巨噬细胞分泌IL-1，进一步诱导内皮细胞释放IL-1和IL-6和趋化因子，促进疾病的进展。hs-CRP参与糖尿病的发展，也能参与结核性胸腔积液的发展。在糖尿病和结核的发展过程中，机体内白细胞介素家族和肿瘤坏死因子家族过表达，诱导相关细胞合成较多的hs-CRP等急性时相蛋白，大量hs-CRP激活后，直接或间接使血管内皮细胞受损，引起糖尿病的血管病变发生。本组相关分析显示观察组中TNF-α和hs-CRP的表达呈正相关性，提示TNF-α和hs-CRP可能具有正向协同作用，即二者可能是炎症发展中级联反应中的重要介质。

总之，TNF-α和hs-CRP在糖尿病合并肺结核患者胸腔积液的表达明显升高，在疾病进展中可能具有重要价值。

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