牛妊娠早期精准ELISA检测

Kathy Velek Shona Michaud Kate Boucher Anna Rice Lori Plourde Nevena Djuranovic Christoph Egli Peter Welles Valerie Leathers

1.IDEXX Laboratories Inc.,Westbrook-Maine 04092；2.IDEXX Switzerland AG,Liebefeld-Bern 3097

精准及时的牛妊娠检测，是当今牧场繁殖管理方案的一项重要组成部分。兽医和牧场主通过检测尽早发现空怀牛，能够及时配种并缩短胎间距，从而帮助牧场实现产奶量和利润的最大化（图1）。

另外，通过频繁妊娠检测也能够优化胎间距，空怀天数每增加1d，养殖成本可增加32.9元/d或5美元/d。爱德士公司研发了ELISA妊娠检测方法，最早能够在配种后28d精准检测，为兽医和牧场主提供了另外一种空怀牛早期鉴定的工具。

1 材料与方法

爱德士牛妊娠检测试剂盒，以牛血清或血浆中存在的早期妊娠相关糖蛋白（PAGs）作为判断妊娠的标志。试剂盒中抗-PAG抗体包被在固相板上，结合样品中可能含有的PAGs。生物素偶联PAG二抗与链霉亲和素辣根过氧化物酶（SA-HRP）一起作为检测试剂。TMB底物作为含有PAG样本的显色剂，并用终止液停止酶促反应。在450nm波长下读数，显色超过试验阈值的孔被认定为阳性，表明牛妊娠；若没有显色或显色不明显，表明牛空怀（图2）。

从奶牛场或肉牛场采集血清或血浆，来评估爱德士公司妊娠检测试剂的敏感性和特异性。实验中总共使用783份血清样本和1001份血浆样本，这些样本来自美国各地，包括缅因州、佛蒙特州、纽约州、威斯康星州、宾尼法吉亚州、华盛顿州、印第安纳州以及瑞士和中国。根据产品说明书操作，用爱德士ELISA检测样品。牛的妊娠状况通过超声波和直肠检查来确认。

2 结果与分析

检测采自整个妊娠期的样品，结果表明妊娠期PAG水平始终保持在阈值之上（图3）。

图1 牛只泌乳曲线

图2 检测方案

图3 通过爱德士ELISA检测牛早期PAG水平

通过大批量现场样本检测，得到总体的敏感性和特异性。结果表明，授精后28d已确认妊娠牛的621份血浆样品和552血清样品敏感性均为99.5%。231份血清样品和380份血浆样品的特异性分别为93.1%和94.7%。用于评估特异性的样本为经超声波或直肠检查确认的已配空怀牛以及产后60d以上和未配种的牛只（图4）。

产犊后，爱德士ELISA方法检测发现PAG水平下降（图5）。产后60d检测血清（n=65）和血浆（n=90），PAGs含量值降到基准线以下，特异性为100%。

3 讨 论

图4 超声波和直肠检查结果

图5 血清样本PAG水平

对爱德士妊娠试剂盒的评估表明，妊娠检测产品对于现有的繁殖管理方案是非常有用的补充。这为受精后28d乃至整个妊娠过程中诊断妊娠牛和空怀牛提供了可靠的方法。兽医和牧场主通过不断地确认妊娠状况来发现空怀牛，缩短胎间距。因为产后PAG水平迅速降到基准线以下，所以ELISA能够在产犊后60d使用，作为新一轮妊娠检测的可靠方法。兽医在常规畜群检测中，可使用爱德士ELISA对配后时间短、直肠无法准确检测的个体牛只进行妊娠状况评估。

另外，当养殖户不具备常规兽医诊断服务或者直肠检测经验不足时，兽医可以推荐使用爱德士ELISA检测。与其他诊断检测一样，爱德士牛妊娠检测试剂盒作为牧场整体健康和繁殖管理方案的一部分，应该在兽医指导下使用。

[1]FRENCH P D，NEBEL，R L.The simulated economic cost of extended calving intervals in dairy herds and comparison of reproductive management programs[J].Journal of Dairy Science，2003，86（S1）:54.