不同采收期刺槐花中刺槐苷和鼠李糖刺槐苷的测定

郑永芹， 初正云， 王添敏， 翟延君

(辽宁中医药大学，辽宁大连116600)

刺槐花为豆科植物刺槐属刺槐Robinia pseudoacacia L.的干燥花，又名洋槐、江南槐、胡藤，原产于美国东部的阿柏拉契亚山脉和奥萨克山脉一带，我国引种栽培的有刺槐和毛刺槐两种［1-2］。因具有生长快、适应性强、耐盐碱等优点，目前得到大面积的种植［3］，覆盖28个省 (市、自治区)，黄河和淮河流域为刺槐栽培中心区域［4］。刺槐花具有较高的药用价值，具有消痈化瘀，清热解毒，疗咽治痔，健胃通肠等功效［5］。美国当地居民将刺槐作为催吐剂，还有报道称它可以使人和动物兴奋［6］，国内民间多用来止血、杀菌消炎等。本实验建立了高效液相色谱法同时测定刺槐花中的刺槐苷和鼠李糖刺槐苷的方法，并且对不同产地的花蕾、初开花及开放花中两种成分进行定量考察，期望为刺槐花采收期的确立和质量控制提供科学依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent1100型高效液相色谱仪，配置四元泵、在线脱气机、柱温箱、紫外检测器、柱温箱、ChemStaion化学工作站;SHZ-D(Ⅲ)循环水式真空泵 (巩义市予华仪器有限责任公司)，KQ5200DB型数控超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司)，CP225D型十万分之一电子天平 (德国sartorius公司)

1.2 试药 12个不同产地刺槐花的花蕾、初开花及开放花，均采自于辽宁大连市的不同地区，经辽宁中医药大学初正云教授鉴定为豆科植物刺槐Robinia pseudoacacia L.的干燥花，并将12个不同产地的刺槐花依次编号为 S1、S2、S3…S12。刺槐苷和鼠李糖刺槐苷对照品均由本实验室分离得到，经高效液相色谱法检测纯度均大于98%。甲醇为色谱纯，水为娃哈哈纯净水，其余试剂均是分析纯(天津科密欧化学试剂有限公司)。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件与系统适应性试验 Agilent TC-C18色谱柱 (250 mm×4.6 mm，5 μm);流动相为甲醇 (A)-0.3%磷酸溶液 (B)梯度洗脱，0～5 min(20% ～32%A)，5～25 min(32% ～45%A)，25～30 min(45% ～68%A)，30～40 min(68% ～80%A)。体积流量为1 mL/min，柱温为35℃，检测波长为349 nm，进样量20 μL，以峰面积为定量依据。在此色谱条件下，分别取对照品溶液和供试品溶液进样，计算理论板数，以鼠李糖刺槐苷色谱峰计算不低于2500，分离度大于1.5，对照品和供试品色谱图见图1。

图1 混合对照品(A)与供试品(B)色谱图Fig.1 HPLC chromatograms of reference substances(A)and sample(B)

2.2 对照品溶液的制备 取刺槐苷12.84 mg，鼠李糖刺槐苷0.6 mg，精密称定，分别置50 mL量瓶中，加70%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液 (刺槐苷的质量浓度为0.2568 mg/mL，鼠李糖刺槐苷的质量浓度为0.012 mg/mL)。

2.3 供试品溶液的制备 取刺槐花粉末约0.5 g，精密称定，置锥形瓶中，加50 mL石油醚，超声10 min脱脂，滤去石油醚，挥干粉末，加70%甲醇50 mL，称定质量，超声提取1 h，放冷至室温，用70%的甲醇补足质量，摇匀滤过，取续滤液，再微孔滤膜滤过，即得。

2.4 标准曲线的制备 分别精密吸取刺槐苷和鼠李糖刺槐苷对照品溶液1、2、3、4、5、6、7 mL，定容至10 mL，摇匀。吸取以上溶液，注入液相色谱仪，进样量20 μL，测定。以峰面积 (mAU)为纵坐标，进样量 (μg)为横坐标，绘制标准曲线。结果刺槐苷回归方程为Y=1410.1X－37.457，r=0.9994，表明刺槐苷在质量浓度为0.02568～0.17976 mg/mL范围内线性关系良好;鼠李糖刺槐苷回归方程为 Y =2795.4X－18.843，r=0.9999，表明鼠李糖刺槐苷在质量浓度为0.0012～0.0084 mg/mL范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验 取同一供试品溶液，重复进样5次，测定刺槐苷和鼠李糖刺槐苷的峰面积，结果RSD分别为1.15%、1.04%，表明精密度良好。

2.6 重复性试验 分别精密称取同一样品5份，按2.3项下方法分别制成供试品溶液，进样分析，测定刺槐苷和鼠李糖刺槐苷的峰面积，计算，平均质量分数分别为2.253% 、0.08937%，RSD分别为1.29%、1.32%，结果表明本方法重复性好。

2.7 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、12 h测定刺槐苷和鼠李糖刺槐苷的峰面积，结果RSD分别为0.64%、1.16%，表明样品在12 h内稳定。

2.8 加样回收试验 精密称取0.25 g已测含有量的样品9份，每3份分别加入刺槐苷对照品3、3.7、4.5 mg和鼠李糖刺槐苷对照品 0.6、0.8、1.0 mg，按2.3项下方法制备供试品溶液，分别吸取供试品溶液20 μL进样，测定。计算得刺槐苷的平均回收率为98.21%，RSD为0，972%;鼠李糖刺槐苷的平均回收率为97.84%，RSD为1.17%。

2.9 样品测定 分别精密称取10个产地的刺槐花的花蕾、初开花及12个产地的开放花粉末，按2.3项下方法，制成供试品溶液，测定刺槐苷和鼠李糖刺槐苷，结果见表1。

2.10 两种成分的含有量比较 采用SPSS Statistics 17.0统计软件进行统计分析，组间比较采用多重比较，对刺槐苷和鼠李糖刺槐苷进行比较，结果见表2。

3 讨论

3.1 刺槐属植物中的黄酮苷类化合物具有光谱活性和低毒性，如山柰酚、山柰酚-7-鼠李糖苷、刺槐苷、山柰酚-3，7-二鼠李糖苷、刺槐素都具有明显的抗炎作用，后三者的活性均超过芦丁［7］。朝鲜也曾经有报道用刺槐花中的鼠李糖刺槐苷制成了注射液，治疗急、慢性肾炎、肾毒症、尿毒症、肾性高压、膀胱炎和泌尿系统疾病［8］。本课题组采用经典的MTT法实验，初步结果表明，刺槐苷和鼠李糖刺槐苷也有一定的抗癌活性。因此，本研究将刺槐花中的刺槐苷和鼠李糖刺槐苷，作为确定刺槐花采收期的指标性成分。

表1 刺槐苷和鼠李糖刺槐苷的测定结果Tab.1 Determination of robinin and rhamnoroininin samples

表2 刺槐苷和鼠李糖苷含有量比较 (±s)Tab.2 Comparison of robinin and rhamnorobinin in samples(±s)

表2 刺槐苷和鼠李糖苷含有量比较 (±s)Tab.2 Comparison of robinin and rhamnorobinin in samples(±s)

注:与花蕾比较，*P＜0.05，＊＊P＜0.001;与初开花比较，##P ＜0.001。

不同采收期的刺槐花 刺槐苷/% 鼠李糖刺槐苷/%0.09378±0.025202.298±0.3164 0.0675±0.03142初开花 (n=10) 1.924±0.3734* 0.08051±0.04108开放花 (n=12) 1.259 ±0.3213＊＊##花 蕾(n=10)

3.2 本研究采用SPSS Statistics 17.0统计软件进行统计分析，结果显示不同采收期对刺槐苷的含有量有显著影响，花蕾与初开花相比较，花蕾显著高于初开花 (P＜0.05);花蕾与开放花相比较，花蕾显著高于开放花 (P＜0.001);初开花与开放花相比较，初开花显著高于开放花 (P＜0.001)。结果还显示鼠李糖刺槐苷的P值均大于0.05，故采收期对鼠李糖刺槐苷的影响很小，故可以忽略期对其的影响。综上所述，刺槐花的采收期宜在花蕾和初开时期。

3.3 刺槐花气味芳香、口感甜，此外刺槐花中还含有极为丰富的三大营养素、多种维生素、矿物质，并含有一些高效生物活性物质［9］。人们经常食用刺槐花，民间流传着一些食疗方，如刺槐花芝麻饼、笼蒸刺槐花、槐花酥虾、油煎刺槐花、刺槐花鸡蛋汤等。此外，还有报道将刺槐花制成刺槐花饮料［10］、多维低糖槐花果酱［11］、脱水速溶花菜汤、花保健蜜酒、刺槐花营养粥等［12］。本研究的结果可以使人们更好地利用刺槐花的药用价值和食用价值，从而达到中医所提倡的“食疗法”。

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