原料药丹酚酸B粉末及其水溶液稳定性研究*

李珊珊，赵紫伟，何 蕊，侯安国

(云南中医学院，云南昆明 650500)

丹参为常用中药材，最早记载于《神农本草经》，具有活血化瘀，安神去烦，凉血消痛的功效。现代药理对其化学成分做了大量研究，其中水溶性成分之一丹酚酸B，据报道具有较强的抗氧化活性和清除自由基的作用，具有潜在的药用开发价值［1－2］;另报道表示丹酚酸B在水溶液中不稳定，易受温度、pH的影响。为了对其进一步了解，本文就以自制纯度为91.33%的丹酚酸B粉末为原料药，考察温度、光照、湿度对其稳定性的影响及在不同温度下丹酚酸B的降解速率常数，推导在常温条件下丹酚酸B的速率常数及有效期，为丹酚酸B水溶液制剂提供理论依据。

1 实验仪器和试药

1.1 仪器

戴安U－3000高效液相色谱仪 (美国戴安公司);SHH－SDT综合药品稳定性试验箱 (重庆市永生实验仪器厂);Auw2200分析天平 (岛津国际贸易有限公司);电热恒温鼓风干燥箱 (上海一恒科技有限公司)

1.2 试药

丹酚酸B对照品 (中国药品生物制品检定所，批号:11562－200302);丹酚酸B原料药 (自制，纯度 91.33%);色谱级甲醇、乙腈 (Fisher公司);水为去离子水;其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 含量测定方法

2.1.1 对照品溶液的制备

精密称取丹酚酸B对照品适量，加水溶解，配制成0.12mg/mL的对照品溶液，备用。

2.1.2 色谱条件

Eclipse XPB－C18(4.6×150mm)色谱柱;流动相:甲醇－乙腈－甲酸－水 (30∶10∶1∶59);流速:1.0ml· min－1;柱温:30℃;检测波长:286nm;理论塔板数以丹酚酸B色谱峰计大于3000。

2.1.3 线性关系考察

取上述丹酚酸B对照品溶液，分别进样1μL，4μL，7μL，10μL，14μL，18μL，以对照品峰面积为纵坐标，以丹酚酸B质量为横坐标，计算得回归方程为:y=20.378x+0.0082(r=1)，其在0.12～2.16μg线性范围内良好。

2.1.4 精密度考察

取上述丹酚酸B对照品溶液，连续进样6次，每次10μL。结果，RSD=0.80% ，表明仪器精密度良好。

2.1.5 稳定性考察

取上述丹酚酸B对照品溶液，于0，2，4，6，8，12h进样，每次10μL。结果，RSD=0.76% ，表明丹酚酸B对照品在12h内稳定性较好。

2.1.6 加样回收率考察

取6份已测定含量的供试品溶液2mL，分别精密加入上述丹酚酸B对照品溶液2 mL于5mL的容量瓶中，分别进样10μL，计算回收率。结果，实验平均回收率为99.78%，RSD=1.74%(n=6)。

2.2 强光照对原料药丹酚酸B粉末的影响［3］

取适量供试品于称量瓶中，摊成≤5mm厚的薄层，置于装有日光灯的药品稳定性试验箱光照箱中，于照度为4500lx±500lx的条件下放置10d，于第5天和第10天取样，平行测定3组，观察其外观及测定其含量变化，结果，原料药丹酚酸B粉末在10d内的强光照条件下，外观颜色、含量基本无明显的变化。

2.3 高温条件对原料药丹酚酸B粉末的影响

取适量供试品于称量瓶中，摊成≤5mm厚的薄层，置于药品稳定性试验箱60℃的恒温箱中10d，于第5天和第10天取样，平行测定3组，观察其外观及测定其含量变化，结果，原料药丹酚酸B粉末在10d内的高温条件下，外观颜色、含量也基本无明显的变化。

2.4 高湿条件对原料药丹酚酸B粉末的影响

2.4.1 吸湿平衡时间的测定［4］

取适量供试品于称量瓶中，摊成≤5mm厚的薄层，精密称重，置于底部盛有饱和NaCl的干燥器中 (相对湿度为75%)，每隔24h称重1次，平行测定3组，计算不同时间的吸湿率，结果丹酚酸B粉末在48h后吸湿基本达到平衡，其吸湿率达到16.52%.

2.4.2 样品临界相对湿度的测定［4］

取恒重过的原料药丹酚酸B分别置于盛有不同浓度的浓H2SO4中，于48h后取出，精密称定，计算常温下样品的水分含量。以吸湿率为纵坐标，相对湿度为横坐标作临界相对湿度曲线图，结果见图1:

图1 丹酚酸B临界相对吸湿曲线图

由图1可知，相对湿度在60%以下丹酚酸B粉末的吸湿率较小，而在60%以上吸湿率逐渐增大。因此，可确定丹酚酸B粉末临界相对湿度为60%.

2.5 原料药丹酚酸B水溶液降解动力学的测定［5］

取适量原料药丹酚酸B粉末于500mL的容量瓶中，配制成0.9969mg/mL的丹酚酸B水溶液，平均分为5组，每组3份，于适宜容器中，分别置于50℃，60℃，70℃，80℃，90℃的恒温水浴锅中，每隔一段时间取样，测定其含量，作各温度下的IgC－t图，并分别求得Arrhenius方程、常温下(25℃)的速率常数及有效期，结果见图2及表1。

图2 各温度条件下丹酚酸B降解动力学方程拟合曲线

表1 丹酚酸B水溶液在不同温度下的回归方程及动力学常数

实验结果表明随着温度升高，丹酚酸B浓度下降越快，在50℃时含量降解最慢，90℃时降解最快。丹酚酸B水溶液降解趋势成直线分布，符合降解一级动力学特征，原料药丹酚酸B水溶液在室温时速率常数为K25℃=1.132×104h－1，降解10%的时间为t0.9=38.80d。

3 小结与讨论

原料药丹酚酸B粉末10d内在强光照、高温条件下比较稳定，外观、含量几乎无变化，但粉末易吸潮，且吸湿较快，因此，丹酚酸B粉末应置于相对湿度为60%以下的环境中储存。

实验证明，丹酚酸B水溶液降解符合一级动力学方程，在不同温度下降解速率不同，随着温度的升高，降解速率逐步升高。经推导丹酚酸B的Arrenius方程为Igk=－3.4529/T+7.6408(r=0.9816)，在常温下的降解常数为1.132×104h－1，有效期38.80d，说明水溶液在常温下不稳定，水液配置的标准品应现配现用，水溶液制剂有效期短。另者，文献报道［6－7］，调节适宜的pH值、添加合理的抗氧剂可以增加水溶液的稳定性。丹酚酸B具潜在的新药研发价值，可以结合文献报道的条件进行进一步研究，为水溶液制剂的开发提供理论依据。

［1］黄诒森，张均田.丹参中三种水溶性成分的体外抗氧化作用 ［J］.药学学报，1992，27(2):9.

［2］刘平，刘乃明，徐列明，等.丹酚酸乙对四氯化碳体外损伤原代培养大鼠肝细胞的直接保护作用 ［J］.中国中药杂志，1997，22(5):303－306.

［3］中华人民共和国药典 ［M］.北京:中国科技医药出版社，2010:附录199－200.

［4］谢秀琼.中药新剂型开发与应用 ［M］.北京:人民卫生出版社，2000.

［5］张兆旺.中药药剂学 ［M］.北京:中国中医药出版社，2008.

［6］林青，黄琳，肖晓丽，等.丹参水提液中丹酚酸B湿热降解动力学研究 ［J］.中国现代中药，2008，10(8):29－31.

［7］朱静，陈慧清，白鹏.丹酚酸B水溶液分解反应的动力学研究 ［J］.中成药，2009，31(4):541－543.