牛蒡子提取物镇痛抗炎作用的实验研究①

黄少花,黄礼德,刘胜利,郭立强,文全泰,肖林彬,张照平,赵善民,晋玲,黄彦峰

(1.右江民族医学院2007级临床医学本科,广西 百色 533000 E-mail:huanglidegx@163.com;

2.右江民族医学院2008级临床医学本科,广西 百色 533000;3.右江民族医学院2008级医学检验本科,广西 百色 533000;4.右江民族医学院2009级临床医学本科,广西 百色 533000;5.右江民族医学院2010级临床医学本科,广西 百色 533000;6.右江民族医学院生理学教研室,广西 百色 533000)

牛蒡子(Fructus Arctii),又名大力子、鼠粘子、恶实等,为菊 科二年生草本植物牛蒡的干燥成熟果实。秋季果实成熟时采收果序,晒干,打下果实,除去杂质,再晒干。具有疏散风热、宣肺利咽、透疹解毒、通便之功效。主治风热感冒,温病初起,咳嗽,咽喉肿痛,麻疹不透,风疹瘙痒,痈肿疮毒,便秘等[1]。然而目前还没有发现有关牛蒡子提取物的抗炎镇痛作用的文献报道,为此本实验采用牛蒡子的水提取物和乙醇提取物灌胃给药的方法,运用小鼠扭体法、小鼠热板法、小鼠耳廓肿胀法和10%蛋清致小鼠足趾肿胀法对其镇痛抗炎进行了相关的药理研究。

1 材料

1.1 仪器 智能热板仪(YLS-6A),山东省医学科学院设备站生产;足趾容积测量仪(YLS-7B),山东省医学科学院设备站生产;电子天平(ARll40/C),奥豪斯(上海)公司生产。

1.2 动物选择 昆明种小鼠192只(由右江民族医学院动物实验中心提供),6～8周龄,雌雄兼有,体重20～25g。

1.3 药材与试剂 牛蒡子(购自广西百色市,由右江民族医学院民族医学教研室覃道光副教授鉴定菊科牛蒡子属植物);阿司匹林,25mg/片,湖南新汇制药有限公司,生产批号10080;二甲苯(分析纯,广州新建精细化工厂,批号:20060322);冰醋酸(分析纯,汕头市西陇化工厂有限公司,批号:0808042)。制备提取物方法:牛蒡子经干燥、打粉,密封保存备用。取牛蒡子粉500g加入5000ml的蒸馏水,置于室温下 2h,煮沸 1h,过滤为滤液1,再加蒸馏水4000ml,煮沸 1h,过滤为滤液 2,滤液 1、2浓缩至100ml(1ml含生药5g),作为牛蒡子水提取液,置于冰箱备用。牛蒡子粉500g加95%乙醇2000ml,置于室温下2h后,煮沸1h,过滤为滤液1,再95%乙醇 2000ml,煮沸 1h,过滤为滤液2,滤液1、2浓缩至100ml(1ml含生药5g),为牛蒡子醇提取液,置于冰箱备用。

2 方法

2.1 醋酸扭体法 选择体重20～25g健康昆明小鼠60只,雌雄各半,随机分成4组,分别为空白对照组(生理盐水组)、牛蒡子水提取液组(简称水提取物组,5g牛蒡子生药/ml)、牛蒡子醇提取液组(简称醇提取物组,5g牛蒡子生药/ml)以及阳性对照组(阿司匹林组,阿司匹林0.5mg/ml)。按10ml/kg的剂量给小鼠灌胃,每天1次,连续5d,末次给药后0.5h后腹腔注射6%醋酸溶液(现配现用)0.2ml/只,观察注射醋酸后各组出现扭体反应的时间及小鼠15min内扭体次数[2]。扭体反应抑制率计算:抑制百分率(%)=[(对照组平均扭体数-给药组平均扭体数)/对照组平均扭体数]×100%。

2.2 热板法[3]将智能热板仪加热到(55±0.5)℃。取雌性小鼠数只,依次放在热板仪上,按“开始”键记录时间,自放入热板仪至出现舔后足所需的时间(s)作为该鼠的痛阈值,凡逃避或在5～30s内不舔足者弃置不用。取筛选合格的雌性小鼠60只,分组与给药同 2.1。连续5天,最后一次给药后 0.5、1、1.5、2h分别测定各组小鼠的痛阈,同样隔 5min测 2次,取均值。

2.3 小鼠耳廓肿胀法[4]选择体重20～25g健康昆明小鼠60只,雌雄各半,分组与给药同2.1。连续灌胃5天,末次给药0.5h后,于小鼠右耳两面各涂二甲苯 0.01ml致肿,左耳不涂为正常耳。1h后脱颈椎处死,沿耳廓基线剪下双耳,用9mm打孔器沿左、右耳廓相同部位打一圆片,于电子天平上称重,计算肿胀度及抑制率,比较各组差异。

肿胀度(%)=[(右耳重量-左耳重量)/左耳重量]×100%

肿胀抑制率(%)=[(实验组肿胀度-空白组肿胀度)/空白组肿胀度]×100%

2.4 10%蛋清致足跖肿胀法[5]选择体重20～25g健康昆明小鼠60只,雌雄各半,分组与给药同2.1。连续灌胃5天,末次灌胃给药1h后用10%新鲜蛋清0.1ml注入小鼠的右后足跖中央皮下,分别于致炎前及致炎后 0.5、1、2、4h用足趾容积测量仪测量足跖体积的变化,并计算各组肿胀率。

肿胀率=[(致炎后足跖体积-致炎前足跖体积)/致炎前足跖体积]×100%

3 结果

3.1 对小鼠醋酸扭体的影响 水提取物组、醇提取液组和阿司匹林组均有明显的抑制醋酸致小鼠扭体的作用,与生理盐水组比较差异均有高度显著性(P＜0.01),结果表明牛蒡子提取物对醋酸腹腔注射所致的小鼠疼痛有抑制作用。实验结果见表1。

表1 牛蒡子提取物对小鼠醋酸扭体的影响 (,n=10)

表1 牛蒡子提取物对小鼠醋酸扭体的影响 (,n=10)

注:与生理盐水组比较,a:P＜0.01

组别 剂量(g/kg)15min扭体次数(次) 抑制率(%)生理盐水组 10 30.27±15.51水提取物组 50 14.20±9.91a 53.09醇提取物组 50 8.92±10.25a 70.55阿司匹林组 0.005 5.20±5.37a 82.82

3.2 对小鼠热板法实验的影响 水提取物组和阿司匹林组在0.5、1、1.5、2h均能明显提高热板法小鼠的痛阈值,醇提取物组在0.5、1、1.5h均能提高热板法小鼠的痛阈值,与生理盐水组比较差异均有显著性(P＜0.01或P＜0.05),水提取物组提高小鼠的痛阈值作用强于醇提取物组。结果表明牛蒡子提取物对热致痛有镇痛作用,实验结果见表2。

表2 牛蒡子提取物对小鼠热板法的镇痛作用 (,n=10)

表2 牛蒡子提取物对小鼠热板法的镇痛作用 (,n=10)

注:与生理盐水组比较,a:P＜0.05,b:P＜0.01

组别 剂量(g/kg)给药后不同时间段小鼠的痛阈(s)0.5h 1h 1.5h 2h生理盐水组 10 11.78±1.6911.78±1.6913.50±4.04 13.03±3.29水提取物组 50 19.75±3.53b22.65±5.63b22.41±6.52b25.54±8.60b醇提取物组 50 15.53±4.04a17.81±8.65a18.66±5.00a19.21±9.07阿司匹林组0.00515.53±3.18a18.31±8.48a19.21±4.98a20.11±5.33a

3.3 对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响 醇提取物组和阿司匹林组均能抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀,与生理盐水组比较差异有高度显著性(P＜0.01),结果表明牛蒡子醇提取物具有抗炎活性。而牛蒡子水提取物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀没有明显的抑制作用。实验结果见表3。

表3 牛蒡子提取物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响 (,n=10)

表3 牛蒡子提取物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响 (,n=10)

注:与生理盐水组比较,a:P＜0.01

组别 剂量(g/kg)肿胀度(%)肿胀抑制率(%)生理盐水组 10 98.80±29.99水提取物组 50 93.59±8.28 5.27醇提取物组 50 64.90±35.44a 34.31阿司匹林组 0.005 59.33±17.32a 39.95

3.4 对10%蛋清致小鼠足跖肿胀的影响 水提取物组和醇提取物组在 0.5、1、2、4h均能显著抑制 10%蛋清致小鼠足跖肿胀,阿司匹林组在0.5、1h均能抑制10%蛋清致小鼠足跖肿胀,与生理盐水组相比较差异均有显著性(P＜0.01或 P＜0.05)。结果表明牛蒡子提取物具有抗炎活性,结果见表4。

表4 牛蒡子提取物对10%蛋清致小鼠足跖肿胀的影响 (,n=10)

表4 牛蒡子提取物对10%蛋清致小鼠足跖肿胀的影响 (,n=10)

注:与生理盐水组比较,a:P＜0.05,b:P＜0.01

组别 剂量(g/kg)肿胀度0.5h 1h 2h 4h生理盐水组 10 59.00±14.8460.45±12.1625.68±13.8017.55±10.09水提取物组 5040.69±15.50a23.20±11.67b12.09±8.13b8.61±4.51b醇提取物组 5031.66±14.92b12.82±6.44b9.23±4.83b3.56±2.10b阿司匹林组 0.00540.38±17.77a31.08±10.31b27.55±6.60b15.74±5.59

4 讨论

在镇痛实验模型中,扭体实验是化学刺激物注射到小鼠腹腔引起深部的大面积而较持久的疼痛刺激,是筛选镇痛药最常用的模型之一,牛蒡子提取物能抑制醋酸刺激腹腔黏膜引起的疼痛反应,延长扭体潜伏期,减少各鼠扭体反应次数,说明牛蒡子具有良好的镇痛作用。根据热板法测定结果,牛蒡子水提取物有明显的镇痛作用,提高小鼠热刺激体表的痛阈,且作用强及时间久。因此,牛蒡子水提取物的镇痛效果比较好。

在以血管通透性为主要改变的急性炎症模型实验中,牛蒡子醇提取物能明显抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的程度,说明其有一定的抗炎作用;牛蒡子水提取物和醇提取物均能明显降低10%蛋清致小鼠足跖肿胀的程度,表明有显著的抗炎作用。牛蒡子醇提取物的抗炎作用起效快、时间持久,且比水提取物的作用强。

牛蒡子主要含有木脂素、挥发油、生物碱、甾醇和维生素等[6],而木脂素和生物碱的镇痛抗炎作用在其他中药有明显的体现[6,7]。实验结果表明牛蒡子有一定的镇痛抗炎作用,而木脂素和生物碱可能是牛蒡子提取物镇痛抗炎的药效部位。而该药的具体作用机制不详,有待进一步的深入研究。镇痛抗炎药研究成为现代药物研究的热点,尤其是中药、天然药的更为广泛深入。目前对抗炎镇痛药物的探索研究中,中药、天然药已越来越凸显其药效良好、无成瘾性、不良反应少及资源丰富等优势,引起人们的重视。为此牛蒡子是一类值得大力开发应用的资源植物。

[1]南京中医药大学.中药大辞典:上册[M].2版.上海:上海科学技术出版社,2005:588-591.

[2]李兰芳,李存满,张勤增,等.苜蓿提取物抗炎镇痛作用的实验研究[J].河北医药,2010,32(7):789-791.

[3]徐淑云,卞如濂,陈修.药理实验方法学[M].3版.北京:人民卫生出版社,2005:906-916.

[4]陈奇,沈映君,刘青云,等.中药药理学实验[M].上海:上海科学技术出版社,2001:24.

[5]徐淑云.药理实验方法学[M].3版.北京:人民卫生出版社,2002:882-888,911.

[6]李燕,孙敬勇,武海艳,等.牛蒡子化学成分及药理作用研究进展[J].齐鲁药事,2009,28(12):738-740.

[7]张永康,何生虎,李勇.牛心朴子生物碱的镇痛抗炎作用试验[J].动物医学进展,2006,27(11):99-100.