微粒子化学发光法检测梅毒螺旋体特异性抗体的性能评价

李 囡，金燕萍，阎 超

（中日友好医院 检验科，北京 100029）

目前，大多医院将梅毒螺旋体抗体检测作为术前常规检查和产前筛查项目，这使得传统的血清学手工实验难以满足日益增长的样本量需要。目前已有多种全自动免疫分析仪具备大量检测梅毒螺旋体抗体的能力，本文着重对Architect i2000SR全自动化学发光微粒子免疫分析仪检测梅毒螺旋体特异性抗体的灵敏度、精密度、携带污染率等方面进行评价。

1 材料

1.1 标本来源

收集130例血清为2011年10月～2012年8月间我院门诊和住院患者，均行TPPA和CMIA检测。

1.2 仪器和试剂

梅毒螺旋体特异性抗体明胶颗粒凝集试验（TPPA）试剂盒 （由日本富士株氏会社提供）；Architect i2000SR型微粒子化学发光免疫分析仪（CMIA）及其配套Syphilis TP诊断试剂（由美国雅培提供）。

2 方法

（1）明胶颗粒凝集法检测：严格按照TPPA试剂盒说明书对130例临床血清进行梅毒螺旋体特异性抗体检测。仪器法检测：用i2000重复检测130例临床样本，S/Co值≥1为阳性，＜1为阴性。（2）比较仪器法与TPPA的灵敏度：将弱阳性混合血清进行4个稀释度的倍比稀释，对每个稀释度的血清分别用CMIA法和TPPA试剂盒测定10次，比较两者的灵敏度。（3）精密度：将阳性混合血清制成3个稀释水平的样本，作为高值、中值、和低值血清。3个水平的样本每天测定3次，（每次测定间隔不得少于2h），每次测定均做3份，连续测定3d。对所得数据计算批间、日间及总变异。（4）携带污染率：选取强阳性血清为高值标本，均分为3管，标注为H1、H2、H3，选取阴性血清为低值标本，均分为 3管，标注为 L1、L2、L3，将低高值血清相互交叉排放，连续测定6管，利用以下公式计算携带污染率，携带污染率＝（L1－L3）/（H3－L3）×100%。 （5）用 SPSS11.0 统计软件进行分析。2种方法检测结果的差异用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

3 结果

（1）130例血清经CMIA法检测阳性103例，阴性27例；TPPA法检测阳性102例，阴性28例，两者差异无统计学意义（P＞0.05）。不一致样本3例（表1）。以TPPA法检测结果为标准，CMIA的敏感度为99%（101/102），特异性为93%（26/28）。（2）CMIA法检测弱阳性混合血清从1:4稀释度开始为阴性（S/Co 0.85）；TPPA法从1:2稀释度开始为阴性。CMIA法灵敏度高于TPPA法。（3）经重复性试验，CMIA法在3个不同水平测定值的批间和批内变异系数均小于10%（表2）。（4）根据公式计算，携带污染率=（0.093-0.09）/（29.78-0.09）×100%=0.01%（表 3）。

表1 2种方法检测结果比较

表2 CMIA的精密度检测结果

表3 携带污染实验结果

4 讨论

目前，临床实验室诊断梅毒螺旋体感染的主要方法是血清学实验，包括对梅毒螺旋体非特异性抗体和特异性抗体的检测。常用的检测非特异性抗体的实验包括甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）、快速血浆反应素环状卡片实验（RPR），检测特异性抗体的实验包括明胶颗粒凝集实验（TPPA）、血凝实验 （TPHA）和酶联免疫吸附实验 （TPELISA）[1]。由于前2种方法检测的不是梅毒螺旋体的特异性抗体，有较高的假阳性率和假阴性率，因此仅作为初筛实验。凝集法作为临床确证实验又有手工操作较为繁琐、肉眼判断结果受人为因素干扰等缺陷[2～4]。TP-ELASA在大样本量操作时又难于保证加样及反应时间的一致。

雅培Architect i2000SR全自动化学发光微粒子免疫分析 （CMIA）是以梅毒螺旋体重组抗原TpN15、pN17和TpN47包被磁性微粒，待检血清中如有相应的抗体，则可与磁微粒上的抗原结合，再加入吖啶酯标记的二抗以及激发液和预激发液。通过激发光的强度对血清中的特异性抗体进行相对定量。

以上实验证实，CMIA法具有很好的重复性和极低的携带污染率。与目前梅毒螺旋体特异性抗体的临床确证实验比较，该法具有更高的灵敏度，结果判定更为客观一致，适合大规模常规筛查。本文检测的130例血清中，2种方法检测一致的标本为127例，一致率为98%。不一致样本中，有1例为CMIA法检测阴性，TPPA检测弱阳性。TPPA可能会在某些患有慢性疾病如SLE、糖尿病、肝硬化，及长期使用免疫抑制剂的患者中出现假阳性的结果[5]，由于该患者为我院皮肤科门诊患者，未能进行跟踪随访。另外2例血清CMIA法检测阳性而TPPA阴性，这2例均来自本院住院患者，未被诊断为梅毒螺旋体感染。因此不排除CMIA法假阳性的可能[2]。这2份血清的S/Co值均在1～2之间，因此在临床应用中，对于CMIA法检测弱阳性的血清，进行TPPA的复检是必要的。

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