白血病微小残留病的检测方法及其意义

蒋 惠

四川省凉山州第二人民医院检验科，四川 凉山 615000

微小残留病 (MRD)指的是白血病患者经过骨髓移植治疗或者诱导化疗获得完全缓解，体内残有的少量白血病细胞的一种状态［1］。为了能够提前的预测白血病的复发，以及指导临床用药或骨髓抑制效果，目前出现了流式细胞术 (FCM)检测微小残留病 (MRD)的试验。本研究跟踪40例急性白血病病人的140例骨髓标本进行微小残留病的动态监测分析，证明微小残留病在急性白血病复发的预测中有重要的临床指导意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2008年8月至2010年1月缓解后急性白血病患者40例，男22例，女18例，年龄27～73岁，平均年龄为50岁，共140份骨髓标本，进行MRD检测。病例AL诱导化疗采用标准的DA方案，巩固治疗采用MA、DA、IA方案［2］，临床CR参见全国急性白细胞化疗化疗治疗讨论会标准。仪器采用美国贝克曼库尔特公司EPICS－XL型流式细胞仪进行相应数据的采集，数据分析选用EXP3.2V1.2B软件程序。

1.2 检测方法

从诱导化疗的第21天起，根据病情1－3个月检测一次MRD指标。正常对照及MRD检测收集500000个细胞，如果在筛选时白血病细胞区域有细胞存在，则将这些细胞占骨髓总细胞数的比例作为MRD值［3］。参考值以MRD＞10－4为阳性，MRD ＜10－4为阴性。

1.3 统计学方法

所有数据均使用SPSS 13.0统计软件进行处理分析，数据以均数±标准差 (±s)表示，计量资料采用t检验，计数资料采用秩和检验，以P＜0.05为具有统计学意义。

2 结果

2.1 首次诱导化疗治疗后MRD水平与预后之间的关系

3年监测结果显示MRD＞0.01组6例复发后死亡，1例复发后缓解;MRD:0.01～10－4组2例复发，8例处于缓解状态，MRD＜10－4组23例MRD持续表现为阴性，处于缓解状态，故而可以作为预后良好的判定指标之一。MRD＞0.01组的复发率最高，MRD＜10－4组未见复发，两组的复发概率比较具有统计学差异 (P＜0.05)，MRD:0.01～10－4组与MRD＜10－4组的复发概率差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 40例AL首次化疗后MRD水平与复发率之间的关系

2.2 形态学完全缓解时MRD的提前判断准确性

本研究40例AL患者MRD动态监测3年，了解形态学呈现完全缓解状态时MRD水平与治疗效果之间的关系。形态学成缓解状态时，MRD检测出的阴性和阳性复发率有显著差异 (P＜0.01)，能够说明在形态学上呈现缓解状态时，MRD监测指标呈现持续阴性时，预后效果很好，当出现持续阳性时，可以判定为高风险复发的可能性。见表2。

表2 MRD水平与治疗效果

3 讨论

MRD作为一种白血病化疗或骨髓移植后的体内残留状态，可以为医师提供较好的用药判断以及作为白血病的复发的提前预警指标之一［4］。由于MRD的阳性出现比形态学可以较早的发现，故而对其连续的监测具有重要的临床指导意义，也即是本研究所要探讨的。

本研究中按照诱导化疗治疗后的第21天开始检测的MRD水平，将40例AL分为低、中、高三个组，选择的21天是骨髓的恢复期，细胞数量相对较多，MRD阳性率高。三组3年的复发率分别为0、20.0%、85.71%。其中MRD＞0.01组复发的风险最高，可以采用化疗强度大的治疗方案，而MRD＜10－4组无一例复发，故而可以将其看成预后良好的指标之一［5］。但是，也应该注意，偶然一次检测到的MRD阳性，并不能够有效的提示复发，应该连续监测其水平的变化情况，通过与自身多次的MRD结果进行比较，才能够有效的观察出白血病的复发趋势。当监测到的MRD呈现持续阳性，特别是持续出现MRD＞0.01，观察到的形态学分类中的原始细胞比值也逐渐增加，高度提示高复发风险。形态学上达CR时MRD检测为阴性的病例，无一例复发，说明缓解状态时MRD越低预后越好，相反当MRD呈现持续阳性时，复发的风险增加，白细胞负荷增大，如本组观察到的缓解状态MRD阳性的17例患者中，8例在1年内复发，所以用MRD检测白血病复发是早于形态学检查的。临床上习惯以原始细胞＞5%作为白血病化疗强度的区分标准，但是形态学上只能够检测到0.01水平的白血病细胞，有限的敏感程度限制了医师的判断，故而MRD值低的患者接收到了不必要的化疗治疗，而MRD值高的患者化疗强度又有可能出现不足，都会不利于患者的长期生存，而本研究中采用的动态检测方法可以解决这一问题，即出现MRD＜10－4的持续阴性状态时，可以选择强度较弱的化疗方案，相反，持续的阳性高指标状态，则提示需要提高化疗强度，可以做到有的放矢，开展相应的个体化治疗。

综上，利用流式细胞计数动态监测AL患者MRD水平，对于提前判断复发率改善治疗方案，以及有效的提高患者的预后有着十分积极的总用和临床应用价值，值得临床推广。

［1］刘艳荣，王亚哲，陈姗姗，等．610例急性髓系白血病免疫表型和白血病相关免疫表型分析［J］．中华血液学杂志2009，28(11):731．

［2］肖志坚，郝玉书。急性白血病诱导缓解治疗期间残留白血病检测的重要意义［J］．中华血液学杂志，2009，24(1):5．

［3］利军，顾龙君，陈静，等．急性淋巴细胞白血病治疗中微量残留病动态监测及其意义［J］．中华血液学杂志，2008，27(2):120．

［4］，冯茹．白血病MRD检测的临床研究进展［J］．广东医学，2007，28(5):837－839．

［5］刘小华，孙爱宁，吴德沛，等．流式细胞术对急性白血病微小残留病的检测及意义［J］．江苏医药，2007，33(5):455．