银冬颗粒中总黄酮含量的测定

李金玲，张聪聪，薛强，张辉，徐晓玉

山银花性寒，味辛，有散风热，解热毒的功效[1]。银冬颗粒是在中医药理论的指导下精心研制的中药复方保健品，具有自主知识产权。主要用于春夏之交瘟疫流行、热毒所伤，阴虚口渴；或夏季伤暑，烦热口渴；或嗜食香燥，火毒内生等。它是课题组科技扶贫项目“秀山金银花产业开发”的产业链深加工产品，是从秀山灰毡毛忍冬（山银花）、天冬等物质中提取的有效成分，制成的一种药食两用保健品，已经申报国家技术发明专利。为了控制银冬颗粒的质量，保证其疗效，本文采用紫外分光光度法对制剂中的总黄酮进行了含量测定。

1 仪器与试药

JA2003N电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；超声清洗器KQ5200E型（江苏省昆山市淀山湖镇）； U3100紫外分光光度计(日立)。

银冬颗粒（西南大学中药研究所研制，批号：09112601、09112603、09112704），芦丁对照品(中国药品生物制品检定所，批号: 100080-200707)；三氯化铝、硝酸铝、氢氧化钠、乙醇等试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备

精密称取芦丁对照品12.9 mg，置于100 mL容量瓶中，加60%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得芦丁的对照品溶液。

2.2 供试品溶液的制备

精密称取样品1.5000 g，置25 mL容量瓶中，加入60%乙醇适量超声溶解30 min，60%乙醇定容，取1.5 mL样品溶液置10 mL容量瓶中，60%乙醇定容。

2.3 标准曲线的绘制

分别精密吸取芦丁对照液（129 μg/ml）0.50、1.00、2.00、4.00、5.00 mL于10.00 ml容量瓶中，分别加入5%亚硝酸钠溶液0.30 mL，摇匀，静置6 min；再加10%氯化铝溶液0.30 mL，摇匀，静置6 min，摇匀；再加4%氢氧化钠溶液4.00 mL，用水稀释至刻度，摇匀，静置15 min，以试剂作空白参比液，于510 nm波长处测吸光度。确立所得标准曲线回归方程为：Y=80.325X–0.0919（r = 0.9997，n=5）。

2.4 精密度试验

取对照品溶液，连续测定5次，记录吸光度值。吸光度平均值为9.82，RSD%=0.51，表明仪器精密度良好。

2.5 稳定性试验

取供试品溶液分别于0、0.5、1、2、4 h时，测定其吸光度并记录。总黄酮含量的 RSD%=3.55，表明供试液在4h内显色稳定。

2.6 重复性试验

取同一批供试品6份按照供试品溶液的配制方法配置，以试剂（未加对照品的溶液）为空白参比液在510 nm波长扫描其最大吸收波长。总黄酮的平均含量为48.08 mg/g，RSD %=2.08，表明方法重现性良好。

2.7 加样回收率试验

取09112601批样品0.2000 g，共五份，芦丁标准品0.011 g五份于25 mL容量瓶中，按照2.2项下供试品溶液的配制方法配置，以试剂（未加对照品的溶液）为空白参比液在510 nm波长扫描其最大吸收波长，记录吸光度值。结果见表1，计算得平均回收率为：99.85%，RSD= 2.35%。

表1 回收率实验Tab.1 Rate of recovery experiment

2.8 样品总黄酮含量的测定

取供试品溶液以试剂（未加对照品的溶液）为空白参比液在510 nm波长扫描其最大吸收波长，记录吸光度值，计算09112601批样品中总黄酮的含量为： 44.54 mg/g、43.03 mg/g、45.06 mg/g。

3 讨论

以芦丁为对照品，采用硝酸铝-亚硝酸钠为显色剂，根据黄酮化合物母核中含有碱性氧原子能与游离的铝离子生成络合物，在亚硝酸钠的碱性溶液中呈红橙色进行比色测定，方法简便、准确、灵敏度高。

金银花的花、茎、叶中所含的主要药用成分是绿原酸和总黄酮，《中国药典》也将绿原酸作为金银花生药的质量控制指标，因此银冬颗粒以绿原酸和总黄酮为银冬颗粒剂的质量控制指标，实验室前期以绿原酸含量测定作为制剂质量控制的主要部分，为了更好的对其进行质量控制，本文以芦丁为对照品，采用分光光度法对制剂中的总黄酮进行了含量测定方法的研究，结果表明银冬颗粒中总黄酮的含量均符合《中国药典》对颗粒剂的要求[2～3]。

[1] 石钺,石任兵,陆蕴如.我国药用金银花资源、化学成分及药理研究进展[J].中国药学杂志,1999,34(11):724.

[2] 张宝国,王学礼,刘庆芳.中药配方颗粒的现状与发展动态[J].中国药学杂志,2000,35(7):487.

[3] 王智民,叶祖光,肖诗鹰,等.对中药配方颗粒发展的几点建议和应用前景分析[J].中国中药杂志,2004,29(1):1.