RP-HPLC测定感冒消炎片中咖啡酸的含量

邢学锋 许文学,2*

（1南方医科大学中医药学院；广州510515；2南方医科大学附属中西医结合医院，广州510515）

RP-HPLC测定感冒消炎片中咖啡酸的含量

邢学锋1许文学1,2*

（1南方医科大学中医药学院；广州510515；2南方医科大学附属中西医结合医院，广州510515）

目的建立感冒消炎片的含量测定方法。方法色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱，流动相为甲醇-磷酸0.1%（25∶75），检测波长323nm，流速1ml•min-1。结果在此色谱条件下，咖啡酸在0.072～1.44μg范围内呈良好的线性关系，标准曲线为Y=1287.436X-23.697，R2=0.9997。结论本方法可有效控制感冒消炎片的质量。

感冒消炎片；咖啡酸；高效液相色谱法

感冒消炎片由中药蒲公英、臭灵丹、千里光三味组成，为临床上较为常用的中药[1]。国家卫生部药典委员会部颁中药成方制剂第十八册中收载的感冒消炎片质量标准（WS3-B-3510-98）未对含量进行有关规定。本研究采用高效液相法对感冒消炎片中所含的咖啡酸的含量进行测定，从而使该品种的质量控制达到一个更为完善的水平。

1 仪器与材料

1.1 仪器HP1100高效液相色谱仪（美国惠普），KQ-500D医用数控超声清洗器（昆山超声仪器有限公司），CP324S高精度电子天平（德国Sartorious）。

1.2 材料与试剂乙腈（色谱纯）；磷酸为分析纯；咖啡酸对照品（供含量测定用，中国药品生物制品检定所）；感冒消炎片（市售）。

2 绿原酸含量测定方法研究

2.1 对照品溶液的制备精密称取咖啡酸对照品约8mg（用五氧化二磷真空干燥24h，经归一法测定含量为95.81%），置25ml容量瓶中，加甲醇适量，振荡使溶解后，稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液（含咖啡酸0.288mg•ml-1）。

2.2 供试品溶液的制备取本品10粒，研成细粉，精密称定，精密加入甲醇50ml，称重后超声处理30min，取出，放冷，再称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液10 ml，取续滤液过0.45μm微孔滤膜，即得供试品溶液。

2.3 色谱条件与系统适用性试验通过最大吸收波长和流动相的选择，最终确定采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇∶0.1%磷酸（25∶75）为流动相，流速1.0ml•min-1，检测波长为323nm。理论板数按咖啡酸峰计算应不低于3×103。

对照品、供试品及阴性对照品图谱见图1。

2.4 标准曲线与线性范围精密吸取“2.1”项下对照品溶液0.25、1、2、3、4、5ml，分别置10ml量瓶中，加甲醇适量，振摇使完全溶解后，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，依次吸取10μl进样。每一浓度进样2次，求峰面积平均值；以咖啡酸峰面积平均值为纵坐标，咖啡酸进样量（μg）为横坐标，绘制标准曲线，见图2。

标准曲线回归方程如下式：

Y=1287.436*X-23.697 R2=0.9997结果表明，咖啡酸在0.072～1.44μg范围内的线性关系良好。

图1 对照品、供试品、阴性对照品HPLC图谱

图2 咖啡酸标准曲线

2.5 精密度试验精密吸取咖啡酸对照品溶液，重复进样6次，每次10μl，测定峰面积值，RSD=0.33%（n=6）。表明仪器精密度良好。

2.6 重现性试验取同一批号感冒消炎片5份，分别按“2.4”项下方法测定样品中咖啡酸，按对照品的回归方程计算供试品中咖啡酸的含量，平均含量为0.148mg•g-1，RSD=1.48%，方法重现性良好。

2.7 稳定性试验精密吸取同一份供试品溶液，间隔2h进样1次，重复进样6次，每次10μl，测定峰面积值，RSD=0.30%（n=6）。表明供试品溶液在10h内稳定。

2.8 加样回收率试验称取已知含量的感冒消炎片5份，精密称定后，精密移入“2.1”项下新鲜配制的咖啡酸对照品溶液2.0ml（含咖啡酸0.576mg），依法处理、测定按对照品的回归方程计算供试品中咖啡酸含量，平均加样回收率为101.15%，RSD=2.45%。

3 供试品溶液咖啡酸含量的测定

取供试品溶液，进样10μl，进样2次，测定样品中咖啡酸，求峰面积平均值，按对照品的回归方程计算供试品中咖啡酸含量，感冒消炎片中咖啡酸含量为0.148mg•g-1。

4 讨论

选用DAD检测器，对咖啡酸对照品在200～400nm波长范围内进行扫描，对照品溶液在323nm处有最大吸收，故选择323nm作为测定波长[2-3]。

采用甲醇∶0.1%磷酸（20∶80），出峰时间为10.549min，但供试品溶液在10.231min有干扰峰存在，两者相连不能分离；采用甲醇∶0.1%磷酸（25∶75），出峰时间为14.994min，且可实现完全分离。故选择甲醇∶0.1%磷酸（25∶75）为流动相。

部颁中药成方制剂第十八册中收载的感冒消炎片质量标准（WS3-B-3510-98）未对含量进行有关规定。蒲公英所含的咖啡酸具有广谱抗菌和消炎利胆作用，因此，本研究将咖啡酸作为感冒消炎片质量控制的指标是可行的，这为控制药品质量和保障人民用药安全提供了保障，为全面控制产品质量提供了方法。

[1]中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京∶中国医药科技出版社,201∶331.

[2]张才煜,孙权,刘敬阁.不同地区蒲公英中咖啡酸的含量测定[J].中国中药杂志,2006,31(9)∶776-777.

[3]吴波,张巍,张应成.高效液相色谱法测定蒲公英颗粒中咖啡酸含量[J].中国药业,2006,15(7)∶41.

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中国中医药现代远程教育杂志社

2011年11月18日

Determination of caffeic acid in Ganmaoxiaoyan tablet by RP-HPLC

Xing Xuefeng1Xu Wenxue
(1 College of Traditional Chinese Medicine,Southern Medical University,Guangzhou 510515; 2 Integrative Medicine Hospital,Southern Medical University,Guangzhou 510515)

∶ObjectiveAim To establish an HPLC method for the determination of caffeic acid in Ganmaoxiaoyan tablet.Methods A ODS-3 C18 column was used.The mobile phase was methol-phosphoric acid(25∶75)with the flow rate 1.0ml•min-1.The detection wavelength was set at 323 nm.Results The linear regression equation of caffeic acid was Y=1287.436 X-23.697，R2=(0.9997)within the range of0.072～1.44μg.Conclusion This method was successfully used for quantitation of Ganmaoxiaoyan tablet.

∶Ganmaoxiaoyan tablet;Caffeic acid;RP-HPLC

10.3969/j.issn.1672-2779.2012.14.111

：1672-2779（2012）-14-0160-02

：韩世辉

2012-06-29）

*通讯作者