HPLC测定养血当归片中芍药苷的含量

肖 焕 马再鸿



HPLC测定养血当归片中芍药苷的含量

肖 焕1马再鸿2

（1 广州中医药大学第二附属医院药学部，广州 510120；2 中山大学孙逸仙纪念医院药学部，广州 510120）

建立养血当归片中芍药苷的含量测定方法。采用HPLC法，以Diamonsil C18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱，0.1%磷酸溶液:乙腈（82:18）为流动相，检测波长为230nm。在上述色谱条件下，芍药苷线性范围为0.583～58.3μg•mL-1，平均回收率101.45%，RSD 为2.52%。该方法可靠，简单可行，为控制养血当归片的内在质量提供了科学依据。

养血当归片；芍药苷；高效液相色谱法

养血当归片为养血当归糖浆改剂型而成，由当归、白芍、川芎、黄芪等药材提取，加工制得的口服制剂，具有补气血、调经的功效。目前主要用于月经不调，行经腹痛，贫血虚弱，产后体虚，萎黄肌瘦，产后血虚等症状。白芍的有效成分为芍药苷、白芍苷、氧化芍药苷和苯甲酞芍药苷等苷类化合物，简称白芍总苷。芍药苷为白芍总苷的主要成分，具有镇静、解痉、抗炎、抗应激性溃疡病、扩张冠脉血管、对抗急性心肌缺血以及抑制血小板凝聚等多方面的作用。在含量测定方面周坚等测定了养血当归糖浆中总阿魏酸的含量[1]，为了更好控制该制剂单一药材的质量，建立了臣药芍药苷含量测定方法。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药 高效液相色谱仪（美国WATERS，515泵，2487紫外检测器，浙江大学N3000色谱工作站）；AUY120D分析天平（SHIMADZU）；芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：110736-200501）；当归、白芍、川芎、黄芪等药材购于广州市致信药业有限公司；养血当归片（自制）；所用试剂乙腈为色谱纯，其它试剂均为分析纯。

1.2 实验方法

1.2.1 色谱条件与系统适应性试验 色谱分析条件：色谱柱为Diamonsil C18（250mm×4.6mm，5μm），Diamonsil C18预柱，流动相为0.1%磷酸溶液:乙腈（82:18）；检测波长为230nm，温度为室温，进样量为10μl，理论塔板数按芍药苷色谱峰计算不低于3000。分别精密吸取芍药苷对照品、供试品、阴性对照液（取处方中除去白芍以外的其它药材，按样品制备方法制成缺白芍阴性样品，并按供试品溶液制法制成阴性对照溶液）各1010μl进样，记录色谱图。结果芍药苷对照品和供试品色谱图中芍药苷峰与杂质峰达基线分离，分离度不小于1.5，相对保留时间约为24.3min，而阴性对照色谱图中相同位置无干扰，见图1。

图1 高效液相色谱图

1.2.2 线性关系的考察 精密称取芍药苷对照品5.83mg，置100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得58.3μg•mL-1的标准品储备液。然后将储备液进行分别稀释至29.15、11.66、2.332、1.166、0.583μg•mL-1，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为系列对照品溶液。分别吸取上述 5份对照品溶液各10μl，按2.1项下色谱条件测定，以其浓度C（μg•mL-1）为横坐标，峰面积积分值（A）为纵坐标绘制标准曲线，得到回归方程为A=1100.9C -462.9，R=0.9995，线性范围为0.583～58.3μg•mL-1。

1.2.3 供试品溶液的制法 根据参考文献的方法[3-4]，取本品（批号30110301）10片，研细，精密称取0.2g于具塞三角瓶中，加70%乙醇30ml，精密称重，超声15min，补足损失量，取上清液，用0.45μm微孔滤膜滤过后，作为供试品溶液。

1.2.4 精密度试验及供试液稳定性试验 精密吸收质量浓度11.66μg·mL-1的对照品溶液10μl，连续进样6次，结果芍药苷峰面积积分值平均值为12497.2，RSD为1.35%，表明仪器精密度良好；另取同一样品供试液（批号30110301），每隔2h进样一次，12h内各图谱中芍药苷峰面积积分值平均值为12831.3，RSD为1.16%，说明供试液在12h内稳定性良好。

1.2.5 重复性试验 分别称取本品同一批号样品6份，依法制备6份供试品溶液，进行6次测定，结果芍药苷峰面积积分值平均值为12618.1，RSD为2.39%，说明该方法重复性较好。

1.2.6 回收率试验 采用加样回收试验法，在已知含量芍药苷的样品中，定量加入高、中、低剂量的芍药苷对照品溶液，依供试品溶液制法操作，进样测定，计算芍药苷回收率和RSD，结果见表1。

表1 芍药苷的回收率试验结果

结果表明本方法平均回收率101.45%，且RSD＜2%，说明本方法准确性良好。

1.2.7 养血当归片中芍药苷的含量测定 分别取3批样品，按照上述2.3供试品溶液制备方法制备样品溶液，每批平行做3个样，与质量浓度11.66μg•mL-1的对照品溶液随行进样，各10μl，测定。

2 结果

以峰面积积分值比计算芍药苷的含量，3批样品测定结果见表 2。

表2 不同批次养血当归片中芍药苷的含量

根据3批中试结果，可暂定本品每片芍药苷的含量不低于0.30mg。

3 讨论

在试验过程中，参考文献采用甲醇:水（25:75）、乙腈:水（26:74）等多种流动相，色谱峰分离效果均不太理想。参考《中国药典》适当调整，以0.1%磷酸溶液:乙腈（82:18）为流动相时，分离效果较好，无其它干扰的杂质峰，峰形较好，可以用于本制剂中芍药苷的含量测定。

在供试品制备时，单纯采用甲醇制备样品时，有杂质干扰，参考文献以70%乙醇作为提取溶媒[2-5]，基本消除其他组份的干扰。同时在超声时间和乙醇用量上均进行了优选，最终确定以70%乙醇30ml，超声提取15min为提取条件，不仅杂质无干扰，且测得含量高，稳定可靠，操作方法简单有效。

[1] 周坚,王宓.养血当归糖浆质量标准的研究[J].南京中医药大学学报, 2003,23(1):61-62.

[2] 周祖坤,孙代华,凌飒.高效液相色谱法测定当归芍药颗粒剂中芍药苷的含量[J].药物分析杂志,2006,26(7):1001-1003.

[3] 李衫,王亚楠,刘小宇,等.白芍总昔提取和纯化工艺的研究[J].食品科学,2007,28(5):173-175.

[4] 邓一鸣,孙晓霞,薛立安.赤芍中芍药苷的提纯工艺研究[J].南京中医药大学学报,2004,20(6):363-365.

[5] 周洪伟,许文博,王玉蓉,等.赤芍总苷提取与大孔树脂纯化工艺研究[J].中医药学报,2011,39(1):48-50.

Determination of Paeoniflor in Yangxue Danggui Tablets by HPLC

XiaoHuan, MaZaihong

（1.Department of Pharmacy, the Second Affiliated Hospital, Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine, Guangzhou 510120, China; 2.Department of Pharmacy, Sun Yat-sen Memorial Hospital, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510120, China）

To set up a method for content determination of Paeoniflor in Yangxue Danggui Tablets.The HPLC analysis was performed on a Diamonsil C18 (250mm×4.6mm, 5μm) column, mobile phase was 0.1% phosphoric acid:acetonitrile (82:18), detecting wavelength was at 230nm.The standard curve was linear within a range of 0.583-58.3μg•mL-1.The average recovery and RSD were 101.45% and2.52%, respectively.This method is accurate, reliable, and can provide a scientic index for controlling the qualities of Yangxue Danggui Tablets.

Yangxue Danggui Tablets; Paeoniflor; HPLC

10.3969/j.issn.1672-2779.2012.02.108

1672-2779（2012）-02-0154-02

2011-12-18

（本文校对：韩世辉 ）