油菜花粉与油菜花粉内酯中总黄酮的对比分析

马丽萍 章 琦 章定生

（1 甘肃中医学院，兰州 730020；2 甘肃农业大学，兰州 730070；3 天水西联蜂业有限公司，天水 741000）

油菜花粉内酯是应用亚临界-超临界联合萃取工艺萃取油菜花粉所获取的以脂肪酸为主的化合物的总称。油菜花粉及油菜花粉内酯均具有降血脂、促进血液微循环、排毒养颜的功效，理论上分析，应该与其含有的类黄酮有关。为评价萃取工艺效果、探讨其作用机理，我们对油菜花粉内酯与油菜花粉中总黄酮的含量进行了对比分析。

1 材料与方法

1.1 方法：分光光度法

1.2 材料

1.2.1 实验用油菜花粉样品由天水西联蜂业有限公司提供，产地为甘肃张掖；实验用油菜花粉内酯也由该公司提供。

1.2.2 乙醇（95%）（AR）、无水乙醇（AR）：开封市芳晶化学试剂有限公司。

1.2.3 硝酸铝（AR）：天津光复精细化工研究所；硝酸铝溶液（100 g/100 l）：称取 Al(NO3)3.9H2O 17.60 g,加水溶解，定容至100 ml，均质。

1.2.4 乙酸钾（AR）：天津光复精细化工研究所；乙酸钾溶液(9.8g/100 ml)：称取乙酸钾9.814 g,加水溶解，定容至100 ml,均质。

1.2.5 芸香苷标准品（色谱纯）：中国药品生物制品检定所。

1.2.5.1 芸香苷标准品储备液（1mg/ml）:精密称取经120℃减压真空干燥至恒重的芸香苷标准品50mg,置于50ml的容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。

1.2.5.2 芸香苷对照品使用溶液（0.2mg/ml）：精密吸取芸香苷标准品储备液10ml置于50ml的容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。

1.2.6 实验用水为重蒸蒸馏水。

2 仪器设备

752紫外可见分光光度计（上海佑科仪器仪表有限公司）；分析天平（上海精密仪器有限公司）；恒温水浴锅（金坛市华峰仪器有限公司）；低温冰箱（海尔电器有限公司）。

3 分析步骤

3.1 试样制备

3.1.1 称取花粉样品约10 g，在研钵中研细。

3.1.2 精密称取花粉内酯样品和花粉样品各2g，精确到1mg，分别置烧杯中，加入95%的乙醇约30ml,置于65℃水浴中45min,搅拌，取出后冷却至室温，使用快速滤纸过滤。烧杯、漏斗、滤渣、滤纸用95%的乙醇洗涤。最后用95%的乙醇稀释至50ml,摇匀，静置1h,待测。

3.2 标准曲线的绘制及回归方程的建立

3.2.1 精密吸取芸香苷对照品使用溶液 1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml,分别置于 50ml容量瓶中；加 95%的乙醇至总体积15ml,依次加入硝酸铝溶液1ml、乙酸钾溶液1ml，摇匀；加水至刻度，摇匀，静置1h。

3.2.2 以1cm比色杯于415nm处，以30%乙醇溶液为空白，测定其吸光度。

3.2.3 以50ml芸香苷质量（mg）为横坐标，以吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线，并建立直线回归方程如式（1），并由标准曲线可以看出在0.4000～24.000μg的范围内呈良好线性关系（n=6）r=0.9998。

2.3.4 空白实验 精密吸取待测溶液1.0ml,置于50ml容量瓶中,加95%乙醇至14ml,用水稀释至刻度，摇匀。

3.3 测定

3.3.1 精密吸取待测溶液1.0ml,置于50ml容量瓶中,加95%的乙醇至15ml，依次加入硝酸铝溶液1ml、乙酸钾溶液1ml，摇匀；加水至刻度，摇匀，静置1h。

3.3.2 以空白为参比，用1cm比色杯于415nm处，测定试样溶液的吸光度。

3.3.3 查标准曲线或通过式（1）计算溶液中黄酮类化合物的浓度。

3.4 计算

试样中的黄酮类化合物的含量可用式（2）计算：

式中：X为试样中黄酮类化合物的含量（g/100g）；M为从回归方程（1）或工作曲线中求得的黄酮类化合物的浓度（mg）；W:样品质量（g）；1000：由 mg化为 g。

4 结果 见表1

表1 油菜花粉内酯与油菜花粉中总黄酮检测结果

5 实验的重复性与精确性

为验证实验结果的可靠性，我们用同一样品重复做了6次实验，结果见表2：

表2 油菜花粉内酯与油菜花粉中总黄酮检测重复实验结果

由表2可以看出：6次重复实验平行实验误差RSD≤3.0%。为此，认为方法可行，结果准确、可靠。

6 问题与讨论

6.1 分光光度法的检测原理是：溶于乙醇中的黄酮类化合物在弱碱性条件下，与显色剂三价铝离子生成有色物质，可在415nm波长附近产生最大吸收。在一定浓度范围内，其吸光度与黄酮类化合物成正比，与标准曲线比较，可定量测定黄酮类化合物的含量。

6.2 应用亚临界-超临界联合萃取工艺萃取油菜花粉所获取的花粉内酯其总黄酮含量远远超过了油菜花粉的含量，为油菜花粉的2.96倍。

6.3 黄酮类化合物是蜂胶主要的功能成分，蜂胶制品具有的降血脂、辅助治疗高脂血症的功用与其含有一定量的生物类黄酮密切相关。表3列出了市售几种蜂胶制品与花粉内酯的总黄酮含量[1]。由表3可以看出，油菜花粉内酯中的总黄酮含量虽低于蜂胶片和蜂胶胶囊，但高于蜂胶液中的含量，故可推断油菜花粉内酯与蜂胶制品具有等同的降血脂的功效。与油菜花粉相比，油菜花粉内酯由于含有更高的生物类黄酮，因而，理论上讲，油菜花粉内酯降血脂的功效要好于油菜花粉。

表3 市售几种蜂胶制品与花粉内酯的总黄酮含量（%）

6.4 对于油菜花粉和油菜花粉内酯中所含类黄酮的种类和其具体的含量，尚待进一步探讨。

[1]章定生等.分光光度法与RP-HPLC法测定蜂胶及其制品中总黄酮含量的分析与比较[J]中国蜂业，2009，（10）：38～39