HPLC法测定排毒养颜茶中大黄素、大黄酚的含量

王永泉 张建文▲ 徐德丽 董军梅

1.山东省潍坊市中医院，山东潍坊 261041；2.山东省潍坊市妇幼保健院，山东潍坊 261011

排毒养颜茶处方是本院应用多年，疗效确切的协定处方，根据临床及患者需求，本院制剂中心将对其进行简单开发，制成袋泡茶，便于患者携带服用，该制剂是由大黄、土茯苓、草决明、西洋参、红参、荷叶、芦荟等中药组成，具有润肠通便，排毒养颜，保肝利胆，降脂降压的功效，用于便秘、面部色素多、青春痘、高脂血症、高血压、口腔异味、腹痛腹胀、尿频尿急等。本文采用高效液相色谱法对排毒养颜茶中的大黄素、大黄酚建立了含量测定方法。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

电子分析天平（上海精密科学仪器有限公司）；恒温水浴锅（江苏金坛市中大仪器厂）；高效液相色谱仪（Agilent公司）；ANASTAR液相色谱工作站；十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（KromosilC18 5 μm 250×4.6 mm）。

1.2 试药

供试品：排毒养颜茶（批号：20111214，20111215，20111216），由潍坊市中医院制剂中心提供；大黄素对照品（批号：110756-200110），大黄酚对照品（批号：110796-201118），购于中国药品生物制品检定所；原药材购于山东海王中药饮片有限公司；甲醇、乙腈均为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

参考《中国药典》2010版一部大黄含量测定项下的条件，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：甲醇-0.1%磷酸（77∶23）；流速为 1.0 mL/min； 检测波长为 254 nm[1]。

2.2 对照品溶液的制备

取大黄素、大黄酚对照品适量，加甲醇制成每1 mL含大黄素21.8μg、大黄酚29.5μg的混合溶液，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取排毒养颜茶，研细，称取1 g，加入甲醇25 mL，称重，加热回流提取1 h，放冷，称重，补充甲醇至原重，摇匀过滤，取滤液10 mL，挥去溶剂，加入 8%盐酸10 mL，超声处理2 min，加入氯仿10 mL，加热回流1 h，放冷，置分液漏斗，取氯仿层（酸液用氯仿再提取3次，每次10 mL，合并氯仿），减压回收氯仿至干，加甲醇溶解，定容至10 mL。过滤，作为供试液。

2.4 阴性对照溶液的制备

取处方量，以相同工艺制备阴性对照（缺大黄）适量，依2.3项目下方法操作即得阴性对照液。

2.5 系统适应性试验与专属性试验

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图[2-6]，结果为：大黄素、大黄酚对照品和供试品色谱图中大黄素、大黄酚峰与其他组分峰基线分离，分离度大于1.5，保留时间分别为9.701 min、13.139 min；阴性对照色谱图中在与大黄素、大黄酚对照品中相对应的保留时间处无色谱峰出现，表明其他组分对大黄素、大黄酚的测定无干扰。见图1～3。

2.6 线性关系考察

精密称取大黄素对照品5.60 mg置25 mL容量瓶中，大黄酚对照品5.46 mg置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，分别精密吸取对照品溶液2 mL置于同一10 mL容量瓶中，甲醇定容至刻度（浓度分别为44.80μg/mL、43.68μg/mL），以此为母液，分别精密吸取对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8 mL置1 mL量瓶中，分别用甲醇稀释至刻度，摇匀，另分别取对照品溶液 1 mL，各取10μL进样，按2.1项色谱条件测定，以峰面积对进样浓度进行回归分析，结果大黄素在8.96～44.8μg范围内呈良好的线性关系，回归方程为：Y=12 572 X-89 104.8，R=0.998 5；大黄酚在 8.736～43.68 μg范围内呈良好的线性关系，回归方程为：Y=10 167X+617，R=9 996。

2.7 精密度试验

精密吸取对照品溶液10μL，连续进样6次，测定大黄素和大黄酚峰面积，结果RSD分别为1.30%、0.95%。

2.8 重复性试验

取本品（批号：20111214）5 份，各约 1 g，精密称定，分别按2.3供试品溶液的制备项目下方法制备供试品溶液，测定，结果大黄素、大黄酚的RSD分别为1.34%、1.07%。

2.9 加样回收率试验

取本品（批号：20111215，大黄素含量：0.467 0 mg/g，大黄酚含量：0.5267）研细，取约0.5 g，精密称定，共称取 6份，置具塞锥形瓶中，分别精密加入大黄素对照品溶液（224μg/mL）、大黄酚对照品溶液（218.4μg/mL）1 mL，按2.3供试品溶液的制备方法制成供试品溶液，如法测定大黄素、大黄酚的含量，计算回收率，大黄素的平均回收率为99.66%，RSD为1.19%；大黄酚的平均回收率为98.51%，RSD为2.77%。

2.10 供试品含量测定

取三批，每批样品取2份，分别按上述方法制得供试品溶液按确定的方法测定样品中大黄素、大黄酚的含量，结果见表1。

3 讨论

参考药典，选择流动相比例为甲醇-0.1%磷酸（85∶15），检测波长为254 nm，流速为1.0 mL/min，检测发现样品峰稍有拖尾，改变流动相极性至甲醇-0.1%磷酸（80∶20）和甲醇-0.1%磷酸（77∶23），检测发现前者拖尾现象消失，分离度略有改善，而后者分离度良好亦无拖尾，所以最终确定实验所用液相条件。

表1 样品的测定结果

对于供试品的处理方法，采用甲醇超声-0.8%盐酸酸化-氯仿萃取-甲醇定容的方法和甲醇加热回流-0.8%盐酸酸化-氯仿萃取-甲醇定容的方法进行处理，检测发现后者的测得含量要明显高于前者，表明甲醇加热回流提取的处理方法较好，所以采用甲醇加热回流-0.8%盐酸酸化-氯仿萃取-甲醇定容的样品处理方法。

采用HPLC法测定排毒养颜茶中大黄素和大黄酚的含量，方法简便、准确、重现性好，可以作为排毒养颜茶质量控制的方法。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010.

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