HPLC法测定小儿金翘颗粒中连翘苷的含量

李志成，邓 涛，杨永寿

（大理学院药学与化学学院，云南大理 671000）

HPLC法测定小儿金翘颗粒中连翘苷的含量

李志成，邓 涛，杨永寿*

（大理学院药学与化学学院，云南大理 671000）

目的：建立小儿金翘颗粒中连翘苷的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法，以0.1%磷酸-乙腈为流动相进行梯度洗脱，流速1.0 mL/min，检测波长277 nm。结果：连翘苷进样量在0.5~5.0μg范围内呈良好的线性关系，r=0.999 9；加样回收率为99.3%，RSD为0.25%（n=6）。结论：该方法准确可靠，重复性好，可用于小儿金翘颗粒的质量控制。

连翘苷；小儿金翘颗粒；高效液相色谱法

小儿金翘颗粒收载于《国家药品标准：中药新药转正标准》中（WS3-893（Z-178）-2004（Z）），由金银花、连翘、葛根、大青叶、山豆根、柴胡、甘草等中药组成，具有疏风清热、解毒利咽、消肿止痛的作用，常用于儿童咳嗽、咽痛、风热袭肺所致乳蛾等症〔1〕。金银花和连翘是该制剂的主药，连翘苷为连翘的主要成分〔2〕，研究表明连翘苷有一定的抑菌能力〔3〕，部分含有连翘的复方，多以连翘苷含量作为质量评价依据，但小儿金翘颗粒的现行质量标准中并未对其含量进行控制，为了有效控制该制剂的质量，本研究采用高效液相色谱法对小儿金翘颗粒中连翘苷的含量进行测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器Agilent 1100高效液相色谱仪（包含G1315B型DAD检测器，G1313A型自动进样器，G1311A型泵），超声波清洗器（SB5200DT，宁波新芝生物有限公司）。

1.2 试药连翘苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110821-200609），小儿金翘颗粒（四川凯京制药厂，批号：20100704，20101203，20110403），甲醇、乙腈为色谱纯，其它试剂均为分析纯，水为超纯水。

2 方法和结果

2.1 色谱条件色谱柱：Agilent色谱柱（4.6 mm× 250 mm，5μm）；0.1%磷酸-乙腈为流动相梯度洗脱：0~15 min（73∶27），15~20 min（60∶40），20~25 min（27∶73）；检测波长277 nm〔4-6〕；流速1.0 mL/min〔7〕；进样量10μL〔8〕。

图1 HPLC色谱图（A：对照品；B：供试品；C：阴性样品；1：连翘苷）

2.2 甲醇浓度的考察精密称取供试品8份，每份2.0 g，分别加浓度为30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%的甲醇溶液20 mL，精密称定，超声提取30 min，补重，用0.45μm的微孔滤膜滤过，进样，测定峰面积并计算连翘苷的含量，结果表明用80%的甲醇提取，连翘苷的含量最高。

2.3 超声提取时间的考察为研究供试品中连翘苷的最佳超声提取时间，实验过程中考察了20、30、40、50、60 min，结果表明2.0 g供试品加入20 mL 80%的甲醇超声提取30 min，供试品中连翘苷即可提取完全。

2.4 对照品溶液的制备精密称取连翘苷对照品2.5 mg，于10 mL量瓶中，加入甲醇适量，溶解，定容，摇匀即得。

2.5 供试品溶液的制备取供试品2.0 g，精密称定，置具塞烧瓶中，加80%甲醇溶液20 mL，精密称定，超声提取30 min，补重，即得。

2.6 阴性对照品溶液制备按小儿金翘颗粒的制备工艺制备缺连翘的阴性对照品，再按供试品溶液的制备方法同法操作，得阴性对照品溶液。

3 实验结果

3.1 标准曲线的制备分别取0.25 mg/mL的连翘苷对照品溶液2、5、10、15、18、20μL进样，按“2.1”项色谱条件进行测定，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线〔9〕，结果连翘苷进样量在0.5~ 5.0μg范围内线性关系良好，回归方程为Y= 567.10X+3.8789，r=0.999 9。

3.2 精密度试验取同一对照品溶液，在同一色谱条件下连续进样6次，每次进样10μL，记录峰面积并计算RSD为0.22%，结果表明仪器的精密度良好。

3.3 重复性试验取同一供试品（20110403）6份，精密称定，按供试品溶液制备方法处理，用0.45μm的微孔滤膜滤过，按“2.1”项下操作，记录峰面积，结果连翘苷含量的RSD为0.3%，表明本方法重复性好。

3.4 稳定性试验按“2.5”项制备供试品溶液，分别测定2、4、6、8、10、12、24 h后的峰面积，结果连翘苷的RSD为1.4%，表明供试品在24 h内稳定。

3.5 加样回收率试验精密称定已知含量的同一批号（20110403）供试品6份，按“表1”精密加入连翘苷对照品适量，按“2.5”项处理，按“2.1”项色谱条件测定峰面积，结果连翘苷的平均回收率为99.3%，RSD为0.25%，表明该方法的加样回收率好。

表1 加样回收率试验（n=6）

3.6 样品含量测定取3个不同批号的供试品，按“2.5”项进行处理，按“2.1”项色谱条件进行测定，并计算测定结果。见表2。

表2 样品含量测定结果（n=3）

4 讨论

本实验分别以不同提取时间、不同甲醇浓度优化连翘苷的提取工艺，最终得出80%甲醇超声提取30 min可将连翘苷提取完全。

曾试验用0.1%磷酸-甲醇（65∶35）作为流动相，结果发现连翘苷峰与杂质峰分离效果不理想，目标峰对称性差。后采用0.1%磷酸-乙腈〔10〕作为流动相进行梯度洗脱，结果表明供试品中连翘苷能达到基线分离，峰的对称性好，杂质峰少。

本方法操作简单、重复性好，建议在修订小儿金翘颗粒质量标准时加入对连翘苷的含量测定，以确保该药品的质量。

〔1〕国家药典委员会.国家药品标准.新药转正标准〔S〕.66册.北京：化学工业出版社，2008：46-49.

〔2〕冯卫生，李珂珂，郑晓柯.连翘化学成分的研究〔J〕.中国药学杂志，2009，13（7）：490-492.

〔3〕段飞，张双民，杨建雄，等.连翘叶提取物抑菌作用的研究〔J〕.西北药学杂志，2005，20（2）：66-67.

〔4〕李坚，冼婉筠，周建因，等.HPLC法测定银翘解毒颗粒中连翘苷的含量〔J〕.郧阳医学院学报，2010，29（2）：165-166.

〔5〕张国彪.HPLC测定清灵感冒颗粒中连翘苷的含量〔J〕.海峡医药，2008，20（8）：49-51.

〔6〕迟芳振，丁始阳，王金洲.HPLC法测定岑连片中连翘苷的含量〔J〕.中国药师，2010，13（5）：688-699.

〔7〕夏伯侯，朱晶晶，王智民，等.连翘苷新增药材定量标准研究〔J〕.中国中药杂志，2010，35（16）：2110-2111.

〔8〕黄永刚，顾旭霞.HPLC法同时测定清热解毒片中黄岑苷和连翘苷含量〔J〕.中国药师，2009，12（6）：771-773.

〔9〕李清芳，张健.高效液相法测定桑菊连化痰口服液中连翘苷含量〔J〕.中医研究，2011，24（9）：12-14.

〔10〕谢秉湘，李志梅，陈善超.连花清瘟胶囊中连翘苷和盐酸麻黄碱的HPLC法测定〔J〕.中国医药工业杂志，2010，41（9）：690-691.

*通信作者：杨永寿，高级实验师.

（责任编辑 毛本勇）

Determination of Forsythin in Xiaoerjinqiao Granules by HPLC

LI Zhicheng,DENG Tao,YANG Yongshou*
（College of Pharmacy and Chemistry,Dali University,Dali 671000,China）

Objective:To establish a method to determine the content of Forsythin in Xiaoerjinqiao Granules.Methods:High performance liquid chromatography（HPLC）was applied with the condition of 0.1%phosphoric acid-acetonitrile as mobile phase for gradient elution,the flow rate was 1.0 mL/min,the detection wavelength was 277 nm.Results:The calibration curve was linear in the range of 0.5-5.0μg for Forsythin,r=0.999 9;the average recovery was 99.3%,and relative standard deviation RSD=0.25%（n=6）. Conclusion:The established method is accurate and reliable,and can be used to determine the Forsythin in Xiaoerjinqiao Granules.

Forsythin;Xiaoerjinqiao Granules;HPLC

R917

A

1672-2345（2012）06-0023-03

大理学院大学生科研基金资助项目（DXS201114）

2011-11-18

2012-03-27

李志成，药学专业2009级本科生.