HPLC在中药及其制剂有效成份分析中的应用

王喜明

HPLC在中药及其制剂有效成份分析中的应用

王喜明

目的分析HPLC在中药及其制剂有效成分分析中应用的价值。方法采用HPLC法分析中药中熊果酸和齐墩果酸的含量。结果熊果酸的平均回收率为102.6%，RSD为0.65%，齐墩果酸的平均回收率为103.4%，RSD为2.06%。结论在进行中药及其制剂有效成分分析中采用HPLC能够同时测定出熊果酸和齐墩果酸的含量，可有效用于进行测量中药材的质量。

高效液相色谱法；中药；有效成分；熊果酸；齐墩果酸

中药和中药制剂中所含的成分非常复杂，并且成分之间的相互干扰非常严重，在中药制剂质量标准和药材检验的研究中，通常采用具有生理活性的化学分成作为控制指标和质量评价的依据。高效液相色谱法（HPLC）是一种分离效率高、分析速度快、应用范围广、自动化程度高的一种分析方法，并且 HPLC能够用于分析样品中的热不稳定点、高沸点以及大分子量的有效成分，是中药及其制剂有效成分含量测定的一种应用广泛的方法[1]。本文主要研究采用HPLC法测定中药中熊果酸和齐墩果酸的含量，并测定每种中药成苷形式或游离形式的含量。

1 仪器与试药

1.1中药材女贞子、泽兰、毛冬青、白花蛇舌草、茵陈、紫苏、枇杷叶、夏枯草、连翘、山楂等，对照品为熊果酸、齐墩果酸（中国药品生物制品检定所）。

1.2检测仪器高效液相色谱仪 LC-10A，色谱数据工作站采用V4.0+。

1.3色谱条件色谱柱，CLC-ODS150mm× 6.0mm，5µm；流动相：甲醇:水:冰乙酸:三乙胺（87:13:0.04:0.02）。检测波长 210nm，灵敏度0.05AUFS。在此色谱条件下，熊果酸和齐墩果酸的理论塔板数均＞5000，拖尾因子均＜1.5。

2 方法与结果

2.1醇提取方法分别选取所检测药材粉末各1.0g，放置在100ml烧瓶中，加入50ml无水乙醇，水浴加热回流2h，冷却、过滤，取续滤液进行测定。

2.2酸解提取方法分别选取所检测药材粉末各1.0g，放置在100ml烧瓶中，然后加入盐酸和50ml乙醇回流提取2h，接着定量转移到容量瓶中滴加饱和NaOH，使其PH为5.0，乙醇定容、过滤、取续滤液1ml离心，取上清液进行测定[2]。

2.3对照品溶液的制备首先精密选取熊果酸对照品15mg，齐墩果酸对照品10mg，然后将选取的熊果酸和齐墩果酸对照品放进 50ml的容量瓶中，最后采用无水乙醇进行定容，其中熊果酸为1.44mg•ml-1，齐墩果酸0.98mg•ml-1。

2.4精密度试验首先选取同一批样品中的同一种药材 6份并进行精密称定，样品中的熊果酸峰面积 RSD为 1.86%，齐墩果酸峰面积 RSD为1.43%。

2.5线性实验分别吸取熊果酸和齐墩果酸对照溶液0.3ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml、10.0ml。然后将选取的熊果酸和齐墩果酸对照品放入容量瓶中，并采用无水乙醇进行定容，测定，以峰面积和对照品的浓度进行线性回归，其熊果酸和齐墩果酸的线性回归的计算方程式为：A=2.35394009C-7.4043782（r=0.9992），A=1.5136777C+3.7376834（r=0.9995），线性范围为10.2～408.0μg/ml、29.8～1192.0μg/ml，对照品检测的上下限值分别为10.2μg/ml、29.8μg/ml。

2.6重复性试验选取同一批样品中的同一种药材6份，进行精密称定，分别按照样品处理的醇提取的方法制备成样品液，测定、计算含量，熊果酸含量RSD为2.95%，齐墩果酸含量RSD为2.71%。

2.7稳定性试验在试验的过程中，分别精密吸取同一样品溶液，在24h内根据分配的时间进行重复选取样品 6次，每次进样5μl，样品中熊果酸的峰面积 RSD为 1.77%，齐墩果酸峰面积 RSD为1.088%[3]。

2.8回收率测定精密称取已测含量的药材白花蛇舌草6份，然后分别加入相应量的熊果酸和齐墩果酸对照品，并按照样品处理的醇提取的方法进行测定，计算含量和加样回收率，通过分析，熊果酸和齐墩果酸的平均回收率分别为96.63%、96.42%，RSD分别为2.65%、2.06%。详细数据见表1。

表1 白花蛇舌草加样回收率检测结果（n=6）

2.9样品的测定通过采用醇提取法和酸解提取方法对女贞子、泽兰、毛冬青、白花蛇舌草、茵陈、紫苏、枇杷叶以及夏枯草等药材中熊果酸和齐墩果酸进行测定，其测定的结果如表2。

表2 酸解提取法与醇提取法对样品的测定比较

3 讨论

中药及中药制剂的化学成分非常复杂，为了能够安全合理、有效的使用药物，需要对药物的特点及有效成分、作用机理、制剂的体内过程、药物反应等全面分析，在分析检测的过程中采用HPLC检测不仅分析时间短、自动化程度高、选择性好，而且分析质量可靠，是临床药学研究和多数实验研究的一种有效的分析方法[4]。

在分析检测的过程中，采用醇提法进行检测分析中药中的游离形式，而酸解提取方法主要是检测游离形式和皂苷形式的总和，通过试验可以看出两种方法测定结果差异无统计学意义，并且从中可以分析得出很多中药成分中的熊果酸和齐墩果酸主要是以游离的形式存在。本研究主要采用高效液相色谱法对中药及其试剂中的熊果酸和齐墩果酸的含量进行测定，从而为一些中药及其制剂的研究分析提供思路。在对熊果酸和齐墩果酸进行分离以及含量测定的过程中采用高效液相色谱法进行测定熊果酸和齐墩果酸的测量，虽然分离不够理想，但是如果加入适当的三乙胺和冰乙酸其分离效果也是非常良好的，并且还能够产生弱酸性环境。

高效液相色谱法是目前中药及其药剂检验中最为常见的一种方法，但是目前仍然存在样品分离效率低、色谱柱容易感染以及分析时间长等缺点，但是随着HPLC检测方法的研究工作的开展，各种自动化技术、联用技术等科学技术不断的更新发展，HPLC将会以高效、高速、灵敏准确及其自动化等优点，在中药及其制剂有效成分分析测定中发挥重要的作用和价值。

[1]姚干,何宗玉,闫光凡,等.大孔吸附树脂纯化女贞子中齐墩果酸和熊果酸的研究[J].中草药,2007,38(10):1498-1501.

[2]李曼玲,冯伟红,康琛.高效液相色谱法测定女贞子药材及饮片中齐墩果酸和熊果酸的含量[J].国际中医中药杂志,2007,29(6): 333-335.

[3]汪秋兰,王文清,马永贵.高效液相色谱法在中药有效成分含量测定中的应用[J].医药导报,2011,30(11):1474-1475.

[4]刘春丽,刘满仓,朱彭龄.高效液相色谱法分析中药及植物药的进展[J].分析化学,2000,28(5):631-643.

[5]秦少容,余佳文,岳廷哲,等.高效液相色谱法蒸发光散射检测器测定红参及育精胶囊中人参皂苷Rg1和Re的含量[J].中国中药杂志,2001,26(8):544.

[6]罗新根,蒋琳兰,赵树进.高效液相色谱法同时测定白花蛇舌草中两组分的含量[J].中国药房,2004,15(3):175-176.

山西省医药与生命科学研究院，山西太原 030006