凝血酶激活纤溶抑制物基因启动子区-438A/G多态性与脑梗死的关系①

陈煜森，曾志良,2，林智君，冼文川，钟望涛，赵斌，许志恩

凝血酶激活纤溶抑制物基因启动子区-438A/G多态性与脑梗死的关系①

陈煜森1，曾志良1,2，林智君1，冼文川1，钟望涛1，赵斌1，许志恩1

目的分析中国汉族人群凝血酶激活纤溶抑制物基因启动子区-438A/G(TAFI-438A/G)多态性与动脉粥样硬化性脑梗死(ACI)发病的关系。方法 225例ACI患者(病例组)和184例健康体检者(对照组)采用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性分析方法(PCR-RFLP)检测TAFI-438A/G多态性。结果TAFI-438A/G基因型及等位基因频率在病例组与对照组之间无显著性差异。性别分层后，男性脑梗死组A等位基因频率为28.6%，高于对照组20.6%(P=0.039)；AA基因型为9.0%，高于对照组1.9%(P= 0.019)；在女性中无显著性差异。结论TAFI-438A/G可能与男性脑梗死的发病有关，AA基因型可能增加男性脑梗死患病风险。

凝血酶激活纤溶抑制物；启动子；基因多态性；动脉粥样硬化；脑梗死

[本文著录格式]陈煜森，曾志良，林智君，等.凝血酶激活纤溶抑制物基因启动子区-438A/G多态性与脑梗死的关系[J].中国康复理论与实践,2012,18(5):406-408.

动脉粥样硬化性脑梗死(atherosclerotic cerebral infarction,ACI)是一种复杂性疾病，是多种环境因素、多基因相互作用的结果。大量家系研究和流行病学研究表明，遗传易感性在脑卒中的发生中起重要作用[1-2]。脑梗死相关的易感基因主要涉及肾素血管紧张素系统、脂代谢、凝血/纤溶和动脉硬化[2-4]。凝血酶激活纤溶抑制物(thrombin-activatable fibrinolysis inhibitor,TAFI)在凝血和纤溶系统中起着重要的作用，参与动脉血栓形成[5-7]，TAFI基因可能是脑梗死发病相关的候选基因。TAFI基因启动子-438A/G(TAFI-438A/G)多态性对TAFI抗原表达有调控作用[8]，可能与脑梗死的发病相关。

1 资料与方法

1.1 一般资料 病例组(n=225)：其中男性145例，女性80例；年龄38～80岁，平均(67.60±10.61)岁；为本院2006年8月～2007年11月在神经内科住院的ACI患者，病程1周以内，均为汉族人，并经过临床及CT和/或MRI确诊(依照第四届全国脑血管病学术会议诊断标准)。排除心脏源性栓塞、动脉炎、血液病等其他原因引起的脑梗死。

对照组(n=184)：其中男性107例，女性77例；年龄37～78岁，平均(66.11±11.02)岁；为本院健康体检者，均为汉族人，无脑卒中史，并经临床检查和/或影像学检查排除脑卒中。排除感染、发热及炎症性疾病、肝肾功能不全、血液病、自身免疫性疾病等。

详细记录入选者的脑血管病危险因素，包括高血压、糖尿病、吸烟、血脂等。所有标本的收集均经本人或家属同意。

1.2基因组全血DNA提取 用QIAGEN酶法提取全血DNA。

1.3 多态性检测 应用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性分析方法(PCR-RFLP)检测TAFI-438A/G多态性，引物设计参考Henry[8]。

1.4 统计学分析 采用SPSS 11.5统计软件和遗传学数理统计方法进行统计分析，采用基因计数计算各组基因型频率和等位基因频率，Hardy-Weinburg平衡吻合度和基因频率和基因型统计分析采用χ2检验或Fisher确切概率法。显著性水平α=0.05。

2 结果

2.1 电泳图 TAFI-438A/G的HpyCH4IV酶切结果显示，GG基因型包括344 bp和41 bp 2个片段，AA基因型只有385 bp 1个片段，AG基因型包括385 bp、344 bp和41 bp 3个片段(图1，41 bp片段由于过小未能显示)。选取1和2号标本送上海生物工程技术服务有限公司进行测序，测序结果与PCR-RFLP结果吻合。

图1 TAFI-438A/G位点扩增片段HpyCH 4IV酶切产物电泳图

2.2 Hardy-Weinburg平衡检验 病例组与对照组人群的TAFI-438A/G基因型分布经χ2检验均符合Hardy-Weinburg平衡，表明TAFI-438A/G的多态性位点的基因型分布在所研究的人群中已达到遗传平衡。见表1。

表1 基因型分布的Hardy-Weinburg平衡吻合度检验

2.3 基因型及等位基因频率 病例组A等位基因频率为26.4%，与对照组23.0%无显著性差异(P=0.271)；AA基因型7.1%，与对照组4.9%无显著性差异(P= 0.351)；GG基因型54.2%，与对照组58.7%无显著性差异(P=0.364)与对照组均无显著性差异。见表2。

性别分层后，病例组男性A等位基因频率28.6%，高于对照组20.6%(P=0.039，OR=1.549，95% CI：1.020～2.353)；AA基因型9.0%，高于对照组1.9%(P=0.019，OR=5.170，95%CI：1.142～23.419)；GG基因型51.7%，与对照组60.7%比较无显著性差异(P=0.154，OR=5.170，95%CI：0.417～1.149。见表3。

病例组女性A等位基因频率22.5%，与对照组26.6%比较无显著性差异(P=0.396，OR=0.800，95% CI：0.478～1.339)；AA基因型3.8%，与对照组9.1%比较无显著性差异(P=0.204，OR=0.390，95%CI：0.097～1.565)；GG基因型58.8%，与对照组55.8%比较无显著性差异(P=0.713，OR=1.126，95%CI：0.598～2.120)。见表4。

表2 两组TAFI-438A/G基因型及等位基因频率比较

表3 两组男性TAFI-438A/G基因型及等位基因频率比较

表4 两组女性TAFI-438A/G基因型及等位基因频率比较

3 讨论

血液凝固和纤维蛋白溶解系统在血栓形成过程中起着重要作用，TAFI在血液凝固和纤维蛋白溶解的平衡中发挥纽带作用。人血浆TAFI抗原水平的变异很大，难以用环境因素解释，可能主要受遗传控制。TAFI基因启动子区多态性与TAFI抗原水平密切相关，TAFI-438A/G可以解释41%的遗传可能性[8]。

血浆TAFI水平的变异可能与脑血管病有关。Montaner等报道，缺血性脑卒中患者发病后平均4.6 h测量TAFI血浆浓度，发现TAFI浓度高于健康对照组，而且神经系统症状恶化组TAFI浓度最高，其次为神经系统症状改善组，最低的是症状稳定组，提示TAFI浓度与脑梗死的发生、急性期病情的变化相关[9]。Leebeek等研究显示，缺血性脑卒中患者功能性TAFI血浆水平高于健康对照组，TAFI抑制剂使缺血性脑卒中患者血凝块溶解时间增加，功能性TAFI血浆水平最高组比最低组的患缺血性脑卒中的风险高[10-11]。

Franco等认为，TAFI-438A/G多态性位点非常靠近转录因子结合的位置，位于Vitelogenin基因结合蛋白(VBP)转录因子结合位置下游1 bp[12]，其多态性可能会通过影响特异转录因子的结合或者改变染色质在TAFI基因座位上的结构，从而改变启动子的转录活性，影响抗原水平[13]。因此TAFI基因启动子区多态性可能与脑梗死的发病相关。

TOAST(the Trial of Org 10172 in Acute Stroke Treatment)分型是缺血性脑卒中病因学研究最常用的方法。Ladenvall等根据TOAST分析了TAFI基因11个不同的单核苷酸的多态性(SNP)及TAFI血浆水平与缺血性脑卒中的相关性，其中包括TAFI-438A/G，结果发现TAFI活化释放肽与4种主要的缺血性脑卒中相关，未激活的TAFI血浆水平与大血管缺血性脑卒中及隐源性脑卒中相关，TAFI基因SNP与缺血性脑卒中无相关性[14]。本研究显示，TAFI-438A/G各基因型及等位基因频率在病例组与对照组均无显著性差异，但经性别分层分析，在男性中，A等位基因及AA基因型与脑梗死有关。这结果与Ladenvall等报道不一致。值得一提的是，本研究选取的病例组是动脉粥样硬化性脑梗死，而Ladenvall等选取的病例组是依据TOAST病因分型法选取，两者并不完全一致。

本研究首次对中国人群中TAFI基因启动子区SNP与急性脑梗死关系进行研究，由于样本量不大，其结果有一定局限性，其确切结论需大规模多中心研究进一步证实。如同时测定活化的TAFI抗原水平、多个多态性位点与动脉粥样硬化性脑梗死结合起来一同研究分析，更能反映相互关系。

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Relationship between Prom oter Polym orphism-438 A/G of Throm bin-activatab le Fibrinolysis Inhibitor Gene and Cerebral In farction

CHEN Yu-sen,ZENG Zhi-liang,LIN Zhi-jun,et al.Department ofNeurology,The Hospital ofGuangdong Medical College,Zhanjiang 524001,Guangdong,China

Ob jectiveTo research the relationship between promoter polymorphism-438 A/G of thrombin-activatable fibrinolysis inhibitor gene(TAFI-438 A/G)and atherosclerotic cerebral infarction(ACI)in Chinese Han population.M ethodsTAFI-438A/G genotypes and their allele frequencies were identified with the polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism(PCR-RFLP)in 225 ACIpatients and 184 healthy controls.Resu ltsTherewas no significant difference of TAFI-438A/G polymorphism between ACIgroup and control group.Stratified by gender,inmales,the incidence of A allelew as 28.6%in ACIgroup,and 20.6%in control(P=0.039);of the AA genotype was 9.0%in ACI group,and 1.9%in control(P=0.019).But no significant difference was found in females.ConclusionTAFI-438A/G polymorphism isassociated with the risk of ACIinmales,thatAA genotypemay increase the risk of ACI.

thrombin-activatable fibrinolysis inhibitor;promoter;polymorphism;atherosclerosis;cerebral infarction

R743.3

A

1006-9771(2012)05-0406-03

2012-01-06)

教育部留学回国人员科研启动基金(教外司留[2005]546号)。

1.广东医学院附属医院神经内科，广东湛江市524001；2.东莞市太平人民医院，广东东莞市523900。作者简介：陈煜森(1966-)，男，广东湛江市人，博士，主任医师，主要从事脑血管病、帕金森病的基础与临床研究。

10.3969/j.issn.1006-9771.2012.05.002