山西省水产品氯霉素药物残留分析与评价

武 栋

（山西省水产品质量安全检测中心，山西 太原 030002）

1 引言

氯霉素（chloramphenicol，以下简称 CAP）为1947年从委内瑞拉链霉菌（Streptomycesvenezuela）的培养滤液中分离出的结晶性抗菌素，是第一个采用化学合成法生产的抗生素，是一种有效的广谱抗生素，对多种病原菌有较强的抑制作用。在水产养殖业中，常用氯霉素治疗各种传染性疾病，但同时也带来了水产品中氯霉素残留的严重问题。研究表明，氯霉素有严重的毒副作用，能抑制人体骨髓造血功能，引起人类的再生障碍性贫血、粒状白细胞缺乏症、新生儿、早产儿灰色综合症等疾病，低浓度的药物残留还会诱发致病菌的耐药性。因此，氯霉素残留问题已引起国际组织和世界上许多国家和地区的高度重视，欧盟、美国等均在法规中规定CAP残留限量标准为“零允许量”，即不得检出。

从20世纪90年代起，随着山西省水产养殖业快速向高密度集约化方向发展，养殖水域自身污染日益加重，养殖病害日趋增多，滥用渔药、化肥、饲料、饲料添加剂等渔业投入品的现象屡禁不止，加之工矿企业和生活排污对养殖水域造成一定的污染，导致养殖水产品品质下降，给渔业生产经营造成极大损失，对消费者的健康产生不利影响。为此，加强水产品质量安全监控已势在必行。

水产品质量安全监控要以源头治理为重点，严把渔业投入品尤其是药物使用关，大力推进渔业标准化生产；以推进市场准入制度和无公害水产品认证为契机，实现水产品质量安全全程可追溯管理；依照国家法律法规和有关标准，对水产品（包括产地环境和渔业投入品）质量安全实施监测检测。下面以酶联免疫法对全省69个水产养殖场的132份水产品进行氯霉素药物残留检测。

2 材料与方法

2.1 样品及仪器

本次共抽检132个样品，其中鲤鱼54个、草鱼49个、虹鳟鱼13个、鲢鱼10个、鳙鱼6个，样品取自山西省的69个水产养殖场。

实验仪器采用MK3酶标仪，试剂采用氯霉素酶联免疫反应测试盒（美国REAGEN）。

2.2 实验方法

2.2.1 样品采集

每个样品均抽取3尾鱼，去鳞去皮取背部肌肉绞碎混合均匀；试样量为400g，分为两份，其中一份用于检测，一份作为留样。

2.2.2 样品前处理

取适量样品用组织捣碎机捣碎，称3g捣碎样品置50mL离心管中，加入6mL乙酸乙酯，以最大转速旋涡振荡3min；25℃下离心力4000g、离心5min；移取4mL乙酸乙酯上清液至玻璃管中，在60℃～70℃水浴氮气吹干；在玻璃试管中加入2mL正己烷完全溶解干燥物，再加入1mL单倍SampleEstractionBuffer，旋涡振荡2min；25℃下离心力4000g、离心10min，去除上层正己烷层，下层液作为样品液备用。

2.2.3 检测步骤

取100μL的标准品和样品液于所设定的孔中，在每孔中加入50μLCAP-HRPConjugate，轻敲微孔板边缘混匀30s，25℃避光孵育1h。将微孔中液体甩掉，每孔加入250μL单倍WashSolution洗板，重复3次，最后一次使板尽量甩干并在吸水纸上拍干。每孔加入 100μL的 TMBSubstrate，25℃避光孵育 15～20min，加入 100μL的 StopBuffer，用酶标仪在450nm波长下读取数据。

3 结果

3.1 氯霉素标准曲线

以相对吸光度值为纵坐标，标准浓度为横坐标建立标准曲线，从标准曲线上读取质控和样品的浓度值。氯霉素标准品检测结果见表1。据图1得出，相关系数为0.9913。

表1 氯霉素标准品检测结果

图1 氯霉素标准曲线

3.2 样品检测结果

本次实验共检测132个样品，均为阴性，合格率100%，详见表2。

表2 样品氯霉素检测结果

3.3 回收率检测结果

试剂盒对水产品的检测下限为0.025μg/kg，采用5倍检测下限为加标浓度，选取一个鲤鱼样品，添加37.5μL的Spiking10μg/L，做3个平行的回收。回收率检测结果见表3。

表3 回收率检测结果

由表3知，最低回收率84%，最高回收率89.6%，平均回收率86%，结果表明试剂盒回收率高。

4 注意事项

氯霉素酶联免疫反应测试盒具有高回收率、高灵敏度、检测时间短的特点，对大批量的样品检测非常适用。但影响其数据准确性的因素也很多，在检测操作过程中应注意如下几点：第一，环境温度。检测过程中保证环境温度在25℃最为适宜。避免在通风口操作，防止温度过低；也不要在阳光直射下实验，防止过热及蒸发。第二，加样。加入样品或者试剂到空的微孔板时，吸嘴靠近微孔接近底部，并保持接触，使液体加在孔底，避免加在孔壁上部，并避免出现气泡。加标准品时从低浓度到高浓度，以确保标准品曲线质量。第三，洗涤。洗涤在ELISA中虽不是反应步骤，却是决定实验成功与否的关键。洗涤如不彻底，特别在最后一次，如有酶结合物的非特异吸附，将使空白值升高。而且洗涤时最容易造成微孔间的交叉污染，因此，在甩板时动作要干净利索且不要用力太猛，以防液体飞溅污染，最后一次甩板后在吸水纸上把液体拍干时，板要垂直，用力不可太猛。第四，时间。孵育时间的计算越规范越好，保持添加标准品的一致性，先添加标准品，后添加样品。

5 分析评价

本次对山西省69个水产养殖场的132份水产品进行了氯霉素药物残留检测，所有样品均为阴性，未出现不合格样品，表明养殖过程中未添加氯霉素。

水产品质量安全管理工作是一个长期、复杂、艰巨的社会系统工程，山西省水产品质量安全起步较晚，虽然近几年取得了一定成效，但仍存在诸多问题。此次检测虽未出现不合格样品，但由于抽检覆盖率较小，尚不能全面代表全省水产品质量现状，今后仍应继续加强健康养殖推广力度，严格控制苗种来源，积极推进市场准入制度，建立较为牢固的长效监管机制，探索建立全过程质量安全追溯体制，确保水产品质量安全。