HPLC法测定小儿肺热咳喘口服液中连翘苷和连翘酯苷A的含量

蔡 颖

(南京市白下区建中中医院，江苏 南京 210004)

小儿肺热咳喘口服液是由黄芩、连翘、金银花、麻黄等十一味中药组成，具有清热解毒，宣肺化痰的功效。用于风寒感冒，胸闷咳喘，支气管炎等症［1］，其主要有效成分为麻黄碱、伪麻黄碱、苦杏仁苷﹑黄芩苷﹑绿原酸和连翘苷、连翘酯苷A。现文献报导有对其中麻黄碱、伪麻黄碱、苦杏仁苷、黄芩苷等成分的测定［1～4］，没有连翘的含量研究。本文采用HPLC法同时测定小儿肺热咳喘口服液中连翘苷和连翘酯苷A的含量。

1 仪器与试药

1.1 仪器 HP－1100高效液相色谱议(美国 Agilent公司)，包括四元梯度，DAD紫外可见检测器，Agilent Chem－Station色谱工作站(Agilent科技有限公司)，自动进样器;Mettl ER220电子天平(美国，梅特勒公司)，SG1200H超声波清洗器(上海冠特超声仪器厂)，DL－1溶剂过滤器(天津市东康科技有限公司)。

1.2 试药 连翘苷对照品(中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，编号:110736－200629);连翘酯苷A对照品(上海诗丹德生物技术有限公司提供，纯度98%编号:11－091125);小儿肺热咳喘口服液由黑龙江葵花药业股份有限公司 提 供 (批 号 为:201103115、201104006、201106030、201108012、201110112、201111018)。甲醇为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:Phenomenex Lunas C18(4.6mm×250mm，5μm);流动相:甲醇 －0.2% 磷酸溶液梯度洗脱，流动相A 0.2%磷酸溶液，流动相B甲醇，梯度洗脱顺序:0～12min 15% ～30%B，12～30min 30% ～40%B，30～40min 40% ～35%B，40～60min 50% ～37%B:流速 1.0mL·min－1;柱温:30 ℃;检测波长:280 nm。

图1 HPLC色谱图

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取连翘苷和连翘酯苷A对照品适量，用50%甲醇制成每1mL含连翘苷30.3 μg连翘酯苷A 1.98 μg的混合对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取小儿肺热咳喘口服液1.0mL置，50mL量瓶中精密加入50%甲醇至刻度，摇匀，经0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液即得供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液 分别取对照品溶液，供试品溶液，按小儿肺热咳喘口服液的处方比例和生产工艺制备成缺连翘的阴性供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录色谱图，结果见图1。结果表明在连翘苷和连翘酯苷A相同的保留时间处基本无色谱峰。说明阴性制剂对所测组分无干扰。

2.2.4 线性关系考察 精密吸取各对照品溶液1、2、4、8、10、12、18μL分别注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积积分值Y对对照品进样量X进行处理，绘制标准曲线，得回归方程为:连翘苷 Y=5.1136 ×102X+1.4126，r=0.9995;连翘酯苷 A Y=4.1426 ×102X+6.3241，r=0.9996。结果表明，在上述色谱条件下，连翘苷在 0.0303 ～0.5454 μg;连翘酯苷A在0.0198～0.3564 μg;的范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.2.5 精密度试验 精密量取对照品溶液，按上述色谱条件重复进样6次测定，结果连翘苷和连翘酯苷A的峰面积分别为 RSD 为1.03%(n=6)、0.7%(n=6)，表明精密度良好。

2.2.6 稳定性试验 取同一供试品溶液，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件于0、2、4、6、8、12、24 h分别进行测定，结果连翘苷和连翘酯苷A峰面积RSD分别为1.66%、2.01%，表明供试品在24 h内稳定性。

2.2.7 重复性试验 取同一批号样品(201103115)，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液各6份，按“2.1”项下色谱条件测定峰面积，计算连翘苷和连翘酯苷A含量，RSD分别为1.04%、1.65%，表明该方法的重现性良好。

2.2.8 加样回收试验 精密称取已知含量的样品(批号为201104006)1.0mL，加入一定量的连翘苷 0.4586mg·mL－1和连翘酯苷A 0.2652mg·mL－1置50mL量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，各平行操作6份，按2.2.2供试品制备方法制成供试品溶液，并按上述色谱条件进行分别测定，以外标法计算回收率，结果见表1、2。试验结果表明，该测定方法回收率良好。

2.2.9 样品测定 取小儿肺热咳喘口服液，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，并按外标法测定连翘苷和连翘酯苷A含量，结果见表3。

表1 连翘苷加样回收试验结果(n=6)

表2 连翘酯苷A加样回收试验结果(n=6)

表3 样品含量测定结果

3 讨论

3.1 通过方法学验证，表明本试验方法用于小儿肺热咳喘口服液中连翘苷和连翘酯苷A的含量测定，分离度好﹑重现性好，可以用于小儿肺热咳喘口服液的质量控制。

3.2 对供试品提取方法进行了对比分析:①精密量取本品2mL，置50mL量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀;②精密量取本品2mL，置50mL量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，经超声处理(250 W，40 kHz)提取30min，冷却至室温。测定两者峰面积，结果比较，无明显差异。考虑到方法的简单，可行性，故选用方法①。

［1］刘译.RP－HPLC法测定小儿肺热咳喘口服液中黄芩苷的含量［J］.中国药师，2008，11(10):1213 －1215.

［2］太成梅，那微，赵晓霞，等.HPLC法测定小儿肺热咳喘口服液中盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱的含量［J］，中国药品标准，2010，11(5):380 －383.

［3］张志根，宋剑峰.RP－HPLC法测定小儿肺热咳喘口服液中黄芩苷的含量［J］.中国民族民间医药，2010，19(12):107－108.

［4］赵文明，承伟.RP－HPLC法同时测定小儿肺热咳喘泡腾颗粒中盐酸麻黄碱和苦杏仁苷的含量［J］.沈阳药科大学学报，2010，27(6):474 －476.

［5］杜英峰.张兰桐.靳怡然，等.多波长RP－HPLC法测定双黄连口服液中黄芩苷、绿原酸和连翘苷［J］.中成药，2009，31(9):1368 －1371.