姜黄素自微乳颗粒的研究

国大亮，朱晓薇，张艳军

(天津中医药大学，天津 300193)

姜黄素是从姜科植物姜黄(Curcuma longa L.)的干燥根茎中提取的一种二苯基庚二酮类化合物［1］。姜黄素是姜黄的主要有效成分之一，有重要的经济价值和广泛的药理作用，动物实验和文献报道表明其具有降血脂、抗肿瘤、抗氧化、抗凝、抗淀粉样蛋白聚合、抑制HIV－1整合酶活性等作用［2］。姜黄素亲脂性强，难溶于水，对酸、碱、光、热、金属离子均不稳定，口服吸收差，生物利用度低，因而限制了姜黄素在临床上的应用和进一步的研究开发［3］。

鉴于此，本实验在无水的条件下，首先将姜黄素、油相、非离子表面活性剂、助表面活性剂按适当比例混合，制备得较稳定的姜黄素自微乳。口服姜黄素自微乳后，在胃液中因胃蠕动和乳化剂作用下自发形成O/W型微乳，微乳可提高姜黄素的水溶性，提高其口服吸收和生物利用度［4］。由于姜黄素自微乳室温下呈液态，不宜携带与服用，因此本实验又筛选适宜的吸收剂，令姜黄素自微乳固化，制成了颗粒剂，使自微乳的携带与服用更加方便。

1 仪器与试药

1.1 仪器 TN－100B型托盘天平(上海精科天平)，恒温磁力加热搅拌器(江苏省金坛市荣华机器制造有限公司，85－2型)，精密电子天平(上海精密科学仪器有限公司，FA1004N)。

1.2 试药 肉豆蔻酸异丙酯(国药集团化学试剂有限公司，化学纯)，聚乙二醇400(天津市北方天医化学试剂有限公司，分析纯)，聚氧乙烯蓖麻油EL 35(徳国BASF公司)，淀粉(天津市干腌食品公司，食品级)，糊精(西安宏昌药业)，微晶纤维素(台湾明台化工股份有限公司)，葡萄糖(天津市北方天医化学试剂有限公司，分析纯)，蔗糖粉(天津中医药大学药物制剂实验室提供)，甘露醇、枸橼酸(天津市科密欧化学试剂有限公司，分析纯)，山梨酸(天津市北方天医化学试剂有限公司，分析纯)，聚乙二醇4000、聚乙二醇6000(天津市科密欧化学试剂有限公司，化学纯)，聚乙二醇8000(天津市瑞金物化学品有限公司，化学纯)，聚维酮(天津市科密欧化学试剂开发中心)，姜黄素标准品(中国药品生物制品检定所，批号0823－9802)，其余试剂均为分析纯。

2 实验方法

2.1 姜黄素自微乳的制备称取32g聚氧乙烯蓖麻油EL、8 g聚乙二醇400，置于100mL三角瓶中，37℃水浴加热，以恒温磁力加热搅拌器搅拌30min，加入10g肉豆蔻酸异丙酯，搅拌均匀。精密称取2g姜黄素，少量多次加入三角瓶中，室温搅拌24 h。

2.2 吸收剂的筛选 将吸收剂粉碎，分别过100目筛，备用。称取1.00g姜黄素自微乳，置于小蒸发皿中，少量多次加入吸收剂，以玻棒搅拌均匀，将吸附固化的自微乳过筛，以自由通过14目筛，轻压后可通过60目筛为度，记录加入吸收剂的质量，分别计算各吸收剂的吸收比(固化比=自微乳质量:吸收剂质量)，重复3次，计算平均值。

2.3 自微乳颗粒的制备 称取5 g姜黄素自微乳，加入吸收剂搅拌均匀，滴入适量30%聚维酮溶液，制成软材，以14目筛湿法制粒，50℃干燥，整粒，16目筛整粒，密闭保存。

2.4 自微乳颗粒的溶出 分别量取250mL人工胃液，加于溶出杯中，依2010版《中国药典》附录“溶出度测定法”，设定转速为 100 rpm，于 0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10min 吸取溶出液3mL，以0.45μm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液，以人工胃液为空白，于420 nm测定吸光度，以溶出液最大吸光度为100%，求算各时间点相对累积溶出率，以时间为横坐标，相对累积溶出率为纵坐标，绘制累积溶出曲线，以excel软件按式－1进行Weibull概率模型拟合［5］，求算Td和T50。

2.5 姜黄素自微乳颗粒的含量测定

2.5.1 供试品溶液的制备 取约20mg姜黄素自微乳颗粒，精密称定，置于50mL量瓶中，加入约40mL甲醇，超声震荡5min，溶液自然冷却至室温，以甲醇稀释至刻度，混匀，精密吸取5mL稀释至10mL，混匀，取适量溶液以0.45μm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液，以甲醇为空白，于420 nm测定吸光度，外标法计算含量。

2.5.2 线性范围 精密称取2.8mg姜黄素标准品，置于10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，精密吸取此溶液，分别稀释成浓度为 4.48、3.36、2.24、1.12、0.56 μg·mL－1的溶液，于420 nm测定吸光度，以姜黄素浓度为横坐标，吸光度为纵坐标进行线性回归，建立回归方程。姜黄素在0.26～5.20 μg·mL－1范围内线性关系良好，回归方程为Y=0.1964X－0.0048，相关系数 R2=0.9999。

2.5.3 精密度 以甲醇为空白对照，分别取姜黄素标准品溶液高浓度(4.48 μg·mL－1)、中浓度(2.24 μg·mL－1)、低浓度(1.12 μg·mL－1)，以甲醇为空白，于 420 nm 下测定吸光度，连续测定5次，求算RSD。高浓度的RSD为0.15%，中浓度的RSD为0.39%，低浓度的RSD为0.97%。

2.5.4 稳定性 将2.24 μg·mL－1的姜黄素标准品溶液室温放置，分别于 0、2、4、6、8、10 h 取样，以甲醇为空白，于 420 nm测定吸光度，计算RSD。姜黄素标准品溶液在测定条件下10 h内稳定，RSD为1.13%。

2.5.5 回收率 取空白颗粒适量，置于50mL量瓶中，加入姜黄素标准品溶液0.5mL，以甲醇稀释至刻度，超声震荡5min，取适量溶液以0.45μm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液，以甲醇为空白，于420 nm测定吸光度，外标法测定姜黄素含量，计算回收率和RSD。姜黄素平均加样回收率为100.31%，RSD 为 0.80%。

3 实验结果

3.1 吸收剂的选择 多糖类辅料对姜黄素自微乳有较好的吸附性，糖醇酸类辅料的吸附性次之，聚乙二醇类辅料的吸附性较差，但枸橼酸和山梨酸吸附性最差。固化比详见表1。

表1 吸收剂的固化比

3.2 自微乳颗粒的溶出速率 从每类吸收剂中选择吸收比最小的两种吸收剂制备自微乳颗粒，以人工胃液为溶出介质测定颗粒的溶出速率，经Weibull概率模型拟合，可见微晶纤维素和甘露醇的Td和T50明显小于其他吸收剂，由于纤维素类吸收剂一般对药物都有一定吸附损失，综合考虑以甘露醇作为吸收剂制备姜黄素自微乳颗粒剂较为合适。以甘露醇为吸收剂的姜黄素自微乳颗粒外标法测得姜黄素含量为0.63%。结果如图1和表2所示。

图1 各吸收剂的相对累积溶出百分率

表2 溶出曲线的Weibull概率模型拟合

4 讨论

以糊精作为吸收剂，颗粒的成型性较好，但颗粒硬度较大，崩解缓慢;以淀粉作为吸收剂，颗粒软硬适中，颗粒成型率较高，但崩解速度不及微晶纤维素快。多糖类吸收剂制得的颗粒的溶出液较混浊，不溶性辅料可能会对药物有一定吸附，因此对于姜黄素而言不宜选用多糖类吸收剂。

以柠檬酸为吸收剂时发现柠檬酸吸附自微乳后粘度增大，易结成片状，不易过筛。曾经尝试以聚乙二醇2000为吸收剂，但发现聚乙二醇2000质软，极易互相粘结成球状，难于制剂成型。总体来看聚乙二醇的颗粒成型性不如多糖类和糖醇酸类。

姜黄素对水、对热均不稳定，因此湿法制粒中制软材时的粘合剂使用了30%的PVP乙醇溶液，粘性适中，且PVP有助于颗粒迅速崩解，使颗粒的自乳化时间缩短。以本实验条件下，以甘露醇为吸收剂制备姜黄素自微乳的颗粒，成型良好，颗粒易溶于水，溶出时间短，而且溶液澄清，姜黄素无吸附损失。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版(一部)［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:247.

［2］冯为，胡林峰.姜黄素的研究进展及其抗肿瘤作用概况［J］.中国现代药物应用，2011，5(13):117 －118.

［3］张立康，汪小珍，李婉姝，等.姜黄素在大鼠体内药代动力学和生物利用度研究［J］.中国药理学通报，2011，27(10):1458－1462.

［4］崔晶，翟光喜，赵宇，等.姜黄素微乳的体内吸收研究［J］.中草药，2007，38(3):368 －372.

［5］张莉，夏运岳.用电子表格 Excel计算药物溶出度Weibull分布参数［J］.药学进展，2002，26(1):48－50.