蘑菇接种室无菌操作及空气消毒法

李大伟

平菇、香菇、金针菇、鸡腿蘑、口蘑、滑子菇等蘑菇均为传统的食料之一，向来以“味道鲜美，营养丰富”著称。近些年来，蘑菇需求量越来越大，全国每年消费蘑菇千万吨，随之广大蘑菇种植户的种植热情愈发高涨，但如果无菌操作及空气消毒方法不当，易导致蘑菇品相不好或产量偏低，造成经济效益低下。

对蘑菇而言，除要求培养的菌类以外的微生物都统称为杂菌，在蘑菇生长过程中一旦感染杂菌，杂菌就会迅速繁殖，与蘑菇争夺养料和空间，甚至分泌毒素或寄生在蘑菇上，影响蘑菇的正常生长发育，从而给生产上造成经济损失。因此，在蘑菇的制种和栽培中，应保证菌种优良纯正无杂，并且在接种过程中要树立严格的无菌观念，掌握和运用消毒、灭菌技术，严防杂菌污染，以此降低微生物对蘑菇正常生长发育的影响。

由于蘑菇种类的不同，对培养基质、工具、环境中的无菌程度要求也不同。因此，可以根據生产情况选用不同的方法，如灭菌、消毒、防腐等。

灭菌是指在一定范围内用物理或化学的方法，彻底杀灭物料、容器、用具和空气中的一切微生物，包括微生物的营养体和休眠体，使物料成为无菌状态。消毒是采用物理或化学的方法，杀灭或清除基质中、物体表面及环境中的部分微生物。除菌是一种机械方法（如过滤、离心分离、动态杀菌技术等），除去液体或气体中微生物的方法。防腐是用来防止或抑制微生物生长繁殖的技术，是一个抑菌过程。杀菌泛指杀死微生物菌体，通常不包括芽孢，有这种作用的药剂称为杀菌剂。

消毒灭菌是排除杂菌干扰，为蘑菇创造洁净生长环境的重要保证，也是蘑菇生产中的一项基本技术，是蘑菇生产成败的关键环节。

1.无菌操作环节

接种室应保持清洁，用煤粉酚皂液擦洗台面及墙壁，定期用乳酸或甲醛熏蒸。每次使用前，均应用紫外灯灭菌；使用过程中，采用动态杀菌机，此机器在工人上班时开机，过程中持续杀菌不允许关机，工人下班后同步关机，对人体无害处的同时，时时在线灭杀空气中的霉菌、枯草杆菌、沙门氏菌等杂菌。

进入接种室前，应先做好个人卫生工作。在缓冲间内要更换工作鞋帽、工作衣、戴口罩。工作衣、工作鞋、口罩只准在接种室内使用，不应穿到其他地方去，并要定期更换、消毒。

接种的试管、三角瓶等应做好标记，注明培养基、菌种的名称、日期。移入接种室内的所有物品，均须在缓冲室用70%酒精擦试干净。

接种前，双手采用自动感应消毒器对手部消毒，建议采用75%医用酒精作为消毒介质。流程为：“感应给皂机洗手→水龙头冲洗→感应式烘干→感应式手消毒”；以首次杀菌后时间计算，以后每隔60~90分钟对手部重新消毒一次，阻隔手部细菌的滋生及繁衍。

培养箱及接种工具应经常清洁消毒；操作过程不离开酒精灯火焰；棉塞不乱放；接种工具使用前后均需火焰灭菌。

2.接种室的空气消毒方法

2.1紫外线消毒法 其杀菌机理是当其作用于生物体时，可导致细胞内核酸和酶发生光化学反应，而使细胞死亡。另外，紫外线还可使空气中的氧气产生臭氧，臭氧具有杀菌作用。但对真菌效果差，只起辅助消毒作用，还需配合药物使用。由于紫外线对人体有伤害作用，不应在开启紫外灯的情况下工作。

2.2臭氧发生器消毒法 能高效、快速杀灭空气中和物体表面的各种微生物，接种成功率可达97％以上。同时具有性能稳定、操作简单、耗电小的特点，但对人体有伤害，不应在有人的情况下工作。

2.3动态空气消毒机对车间内的空气进行消毒，保证食品安全。该消毒技术对车间消毒时，人可同时在车间内工作，对人体没有任何危害，同时使受控环境保持在“无菌无尘”标准。

2.4甲醛和高锰酸钾熏蒸消毒法 使用方法是每m3空间用8～10mL 40%甲醛和5～7g高锰酸钾，先将高锰酸钾倒入陶瓷或玻璃容器内，再加入甲醛。加入甲醛后人立即离开，密闭房间消毒时20～30分钟。

3.接种室无菌程度检查方法

取无菌的营养琼脂平板，在接种室内台上和台下各放一套，把皿盖打开15分钟，然后盖好，倒置37℃恒温培养24～28小时，如果每个皿内菌落不超过4个，则可以认为无菌程度良好，若菌落很多，则应对接种室进一步灭菌。