HPLC法测定清热化毒丸中黄芩苷的含量

赵 斐

山东省淄博职业学院，山东 淄博 255314

清热化毒丸原名犀角化毒丹，为卫生部标准［1］，是根据中医学理论，由水牛角，大黄，黄芩等中药加工而成的纯中药制剂。功能与主治为:清火化毒，消肿止痛。用于小儿身热烦躁，咽喉肿痛，口舌生疮，皮肤疮疖，口臭便秘，疹后余毒末尽。黄芩是方中的臣药，清热燥湿，泻火解毒，止血，安胎。用于湿温、暑湿，胸闷呕恶，湿热痞满，泻痢，黄疸，肺热咳嗽，高热烦渴，血热吐衄，痈肿疮毒，胎动不安［2］。未见有用HPLC法测定清热化毒丸中黄芩苷含量的报道。为进一步控制药品质量，本研究建立了用HPLC法测定清热化毒丸中黄芩苷的含量的检测方法。

1 仪器、样品与试剂

SHIMADZU LC－20ATVP高效液相色谱仪，SHIMADZU SPD－20AVP紫外检测器，CTO－20A柱温箱，SIL－20A自动进样器。甲醇为色谱纯，水为二次蒸馏水。清热化毒丸(北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂，批号:0013010，9013495，规格:3g/丸)，阴性对照为自制。黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号为:201016，含量为94.0%)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Agilent ZORBAX SB－C18(250 mm ×4.6 mm，5μm)，以甲醇－水－磷酸 (47∶53∶0.2)为流动相，检测波长为315nm 流速:1.0 mL·min－1，进样量10μL。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取黄芩苷对照品10.92mg，精密称定，置50ml量瓶中，加70%乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液 (每1ml含黄芩苷0.2055mg)。精密量取10ml，置50ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，即得 (每1ml含黄芩苷0.0411mg)。

2.3 供试品溶液的制备

取约3g，精密称定，剪碎，加硅藻土适量，研细，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理 (功率250W，频率50kHz)30分钟，放冷，再称定重量，加70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 阴性供试品溶液的制备

按处方比例制成缺黄芩的模拟制剂，按2.3供试品溶液的制备方法制成阴性供试品溶液。由图3可以看出在阴性样品中不含黄芩苷，由此可以看出黄芩苷只来源于黄芩，阴性无干扰。

黄芩苷对照品，供试品，阴性对照，3种色谱图如图1～3。

2.5 线性关系试验

分别精密吸取对照品储备液 (0.2055mg·ml－1)0.5μl，1μl，2μl，3μl，5μl，注入色谱仪，测定峰面积。结果以峰面积为纵坐标，进样量 (μg)为横坐标绘制标准曲线，得回归方程:y=10225920x－1083344(r2=0.9925)。结果表明黄芩苷在0.1028～1.0275μg范围内线性关系良好。结果见表1。

表1 黄芩苷线性关系试验

2.6 精密度试验

取黄芩苷对照品溶液进行实验，重复5次，每次进样10μl，结果黄芩苷平均峰面积为:2725736，RSD为:0.6%，n=5;说明精密度良好。

2.7 重复性试验

取清热化毒丸 (北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂，批号:0013010)，分别按正文方法制备供试品溶液，并进行实验，结果样品中黄芩苷含量的RSD为0.8%。表明重复性试验良好。

2.8 稳定性试验

将2.7项下第一份供试品溶液置室温下分别放置0，2，4，6，8，10，12 h，各进样10μl，平均峰面积为:2714238，RSD为:0.9%，n=7，表明样品在12h内稳定性良好。

2.9 回收率试验

采用加样回收法。取清热化毒丸 (北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂，批号:0013010)10丸，研细，精密称取样品5份，每份3g，分别加入黄芩苷对照品储备液(0.2055mg·ml－1)5ml，按“2.3”项下提取，制备供试品溶液，进样量均为10μl，测定峰面积，计算，平均回收率为99.61%，RSD=1.4%。见表2。

表2 加样回收率实验

2.10 样品测定

对照品溶液的制备 取黄芩苷对照品溶液 (每1ml中含黄芩苷0.0411mg)作为对照品溶液。进样量为10μl。

供试品溶液制备 按照2.3项下操作制备供试品溶液，进样量均为10μl，测定峰面积，计算。见表3。

表3 清热化毒丸含量测定

3 讨论

3.1 本实验采用70%乙醇超声处理30分钟，发现效果较好，提取简单，完全，且比甲醇对人体危害小，所以选择70%乙醇作为提取溶剂。

3.2 参考有关文献［2，3］以甲醇 －水 －磷酸 (47∶53∶0.2)为流动相，柱温:40℃，出峰时间短，分离效果好。故以此作为流动相。

［1］卫生部药品标准中药成方制剂第二册［S］.274.

［2］中国药典［S］.一部.2010:282.

［3］刘乃强，江云丽，张村，等.双黄连含片黄芩苷含量测定方法的改进［J］.中国药学杂志，2000，35(12):835－836.