文│伋兆法(安徽省和县畜牧兽医局)
安徽和县肉鸭生产规模较大,据监测显示:肉鸭禽流感(AI)血清抗体水平普遍低,多数循环抗体水平在保护线以下,保护力很低,免疫接种达不到预期的免疫效果。为此,我们对和县樱桃谷肉鸭禽流感母源抗体水平的消长规律进行了研究,为制定合理的免疫程序提供参考依据。
1.试验材料。
(1)疫苗。重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1亚型,Re-1株)(250毫升/瓶,肇庆大华农生物药品有限公司)。
(2)试验动物。1日龄健康状况良好的樱桃谷雏鸭400只,自由饮水和采食,饲喂同一种饲料,试验期间不注射疫苗、不使用药物。
(3)检测试剂。禽流感H5亚型标准抗原、阳性血清、阴性血清(中国农业科学院哈尔滨兽医研究所生产),由省动物疫病预防与监测中心免费提供。PBS缓冲液自配。
(4)红细胞悬液。为减少非特异性凝集反应,采集了健康、未免疫禽流感鸭的血液,制备成鸭1%红细胞悬液,用于抽样鸭血清样品的检测。
(5)试验器材。96孔V型微量反应板,微量加样器等。
表1 不同日龄雏鸭母源平均抗体效价
2.试验方法。
(1)采血。采用随机抽样方式,从1日龄开始每3天采一次血,每次采血32只,不重复采样。
(2)血清学检测。应用血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验进行抗体效价检测,具体操作方法参考《高致病性禽流感诊断技术规范》(GB/T18936-2003)进行,抗体效价以log2表示。
(3)判断标准。以完全抑制凝集的血清最大稀释孔倍数为该血清的滴度,即血清效价HI效价≥4log2,判定为合格;HI效价<4log2,判定为不合格。
1.不同日龄雏鸭的母源抗体效价。不同日龄雏鸭母源抗体效价检测结果见表1。从表1可见,雏鸭母源抗体水平最高值在1日龄,平均达到9log2,4、7、10、13日龄的母源抗体平均效价分别为8.4log2、5.9log2、3.6log2、2.4log2,说明在7~10日龄之前,母源抗体尚能达到保护值。但10日龄以后抗体效价已起不到保护作用。
2.不同日龄雏鸭个体间保护性母源抗体的比例。由表1可见,1、4、7、10日龄雏鸭个体间的HI抗体效价在(5.9~9)log2之间,说明所有个体的母源抗体都有效,其保护性抗体的比例达到100%;到10日龄时,50%的个体达到保护要求,从22日龄开始,雏鸭母源抗体的合格率为0%。31日龄雏鸡母源抗体基本为0。
3.雏鸭的母源抗体消长规律。雏鸭的母源抗体消长变化见表1。随着雏鸭日龄的不断增大,母源抗体效价呈现逐渐下降的趋势。
本试验结果表明,雏鸭在31日龄前均能检测到母源抗体,且在7~10日龄的HI效价在临界点(4log2)之上,此时母源抗体能起到保护作用。但随着日龄的增长,母源抗体有逐渐下降的趋势,31日龄之后,雏鸭的母源抗体效价基本为0。因此,该县樱桃谷肉鸭雏鸭的母源抗体有效保护期应为7~10日龄。