畜禽免疫抗体监测血样采集与血清分离保存技术

罗承金 （云南省宁洱县动物疫病预防控制中心 665100）



畜禽免疫抗体监测血样采集与血清分离保存技术

罗承金 （云南省宁洱县动物疫病预防控制中心 665100）

畜禽血样的采取是动物免疫抗体监测和疫病监测工作中的重要内容。在畜禽血样的采取过程中，其做好采前准备、采血方法、采集时机、血样运送、保存和处理等环节，都直接关系到免疫抗体检测结果的准确性及可靠性，笔者通过多年的实际操作，积累了一定的方法和经验，供同行参考。

1 采血前的准备

采血前应穿好工作服，备好保定器械，V形管、V形管架，一次性注射器(采血针)、记号笔、酒精棉球、干棉球、相关表格等。16号针头、9号和7号头皮针若干，镊子、剪刀、酒精(75%)、药棉若干、保定棍和绳2副、一次性5ml真空管若干。

2 血样的采集

根据畜禽种类、所需血样或血清的数量确定采血部位、器械及采血量。禽类采翅静脉、猪采前腔静脉或耳静脉、牛采颈静脉或耳静脉、羊采颈静脉；禽类用5ml一次性医用注射器，猪、牛、羊用10~20ml一次性医用注射器；禽类采血量不少于2ml，猪、牛、羊不少于5ml。

2.1 猪血样采集

2.1.1 猪的保定 （1）徒手保定法：适用于中、小猪，可根据具体情况采用正提、倒提或横卧方法保定。保定人抓住猪的双耳向上提起，两腿夹住猪背。也可用双手抓住猪的两后肢，向上倒提后，两腿夹住其肩胸部。保定中猪时，保定者应背靠圈栏增加稳定性。横卧保定由一人或二人操作。保定者从背侧将猪后肢及前肢或耳抓住后，用力提起横卧放倒，并紧压其头部及后躯。（2）器械保定法：适用于成年公猪、母猪或野性较强的猪。一种为鼻绳保定，即用直径1cm、长3~4m的一根绳子，一端结成直径为20cm的活套，将其套于猪的猪的上颌犬齿后方后，收紧环套，另一端拉紧或缠绕于栏杆上。另一种为鼻捻棒保定，即用1m长木棒，一端栓一直径20cm的绳套，同上法套用于猪上颌犬齿后方后，捻转收紧绳套将猪保定。

2.1.2 采血 猪血样采集耳静脉或前腔静脉，猪的采血最好是空腹，在早上或午后进行。采血场所有充足的光线；室温夏季最好在25~28℃，冬季l5~20℃为宜。（1）耳静脉采血：猪保定后，将猪耳根捏紧，显露静脉。局部常规消毒采血部位后，用较细的针头刺入耳静脉采血。采血完毕，做好血液样品的编号和填写好采样表。（2）前腔静脉采血：将要采血的猪保定后，把猪的头部拉直，使前腔静脉紧张，胸前窝充分显露，用套针管的注射器斜向对侧或向后内方，与地面呈60°角刺入2~3cm抽取血液。采血前后应按常规消毒。采血完毕，做好血液样品的编号和填写好采样表。

2.2 牛血样采集

2.2.1 牛的保定 主要采用站立保定，对于脾性温顺的牛可用，其方法是一手抓住牛鼻绳或鼻中隔，另一手抓住牛角即可；对于脾性暴躁的牛必须有保定架，在条件许可时，也可将牛置于两树之间，保定好牛的头部，使其向上一侧上仰，对侧颈静脉便暴露出来。

2.2.2 采血方法 牛的采血最好是空腹，在早上放牧前进行。采血场所有充足的光线；室温夏季最好在25~28℃，冬季l5~20℃为宜。（1）耳静脉采血法，即一手保定牛，一手协助采血者握住牛耳根使其耳静脉怒张，术者对术部消毒后，用带乳胶管的9号头皮针进行采血，免疫抗体监测用的是微量法，采集约5ml析出血清即可。并做好血液样品的编号和填写好采样表。（2）颈静脉采血法，将牛头向一侧保定后，先在颈静脉中1/3与下1/3交界处剪毛、消毒，采血者紧压颈静脉下端，待血管怒张使颈静脉充分显露，取16号针头，以拇指、食指和中指夹住，依靠腕力，垂直扎进颈静脉的皮肤，然后调整位置，一旦进入血管，血液即会喷射出，采血完毕，止血消毒。同时做好血液样品的编号和填写好采样表。（3）尾静脉采血法，牛尾静脉位于尾椎腹侧正中的脉管沟内，采血者站立于牛的正后方，将牛尾向上抬起180°，在第一尾椎与第二尾椎之间的尾中线上进针采血。此法简便快速，是牛血样采集的常用方法。采血完毕，做好血液样品的编号和填写好采样表。

2.3 羊血样采集

2.3.1 羊的保定 羊的保定有骑胯保定法、侧卧保定法和栓系保定法3种。（1）骑胯保定法：骑胯保定法就是保定人员骑胯在羊的肩部，用两腿用力夹住羊的颈部和肩部，同时用两手紧握羊的两角或两耳，将羊固定的保定方法。（2）侧卧保定法：侧卧保定法就是将羊按倒侧卧，一手按住前肢上侧，另一手按压羊的臀部，捆住四肢保定。（3）栓系保定法：栓系保定法就是用绳子栓系在羊角或羊的颈部，并将绳子固定在木桩或护栏上，使羊不能大幅度活动的保定方法，此法在保定人员的协助下可对羊进行采血。

2.3.2 采血方法 羊主要采用颈静脉采血，方法同牛的颈静脉采血。采血完毕，做好血液样品的编号和填写好采样表。羊的采血最好是空腹，在早上放牧前进行。采血场所有充足的光线；室温夏季最好在25~28℃，冬季l5~20℃为宜。

2.4 家禽血样的采集

2.4.1 家禽的保定 根据采血的部位对家禽进行保定。对翅内静脉采血时的保定，助手用左手抓住禽的两肢脚，右手将两翅重叠后捏紧掌骨，使禽背部贴住助手上腹部助手右手稍高于左手，两手轻轻用力，使禽体伸展，暴露出翅内侧；对跖骨内侧静脉采血时的保定，助手取一凳，右手抓住两翅根部，保定于凳上，背侧靠近保定者，左手压住禽体，禽脚靠近采血者，采血者左手拉住下面一只脚，即可看见跖骨内侧暴露的静脉。

2.4.2 采血方法 家禽的采血最好是喂料前(早上或下午)进行。采血场所有充足的光线；室温夏季最好在25~28℃，冬季l5~20℃为宜。（1）翅内静脉采血法：采血者左手拨开左侧翅内侧静脉上的羽毛使静脉暴露，消毒后右手持采血针与皮肤呈45°角方向进针，持针时手要稳，进针不宜过深，如刺穿血管，则很快引起皮下血肿，导致采血失败。一旦刺入皮肤，即可回抽活塞，使管内形成负压，这样能够准确判定是否进入血管，采血完毕后压迫止血30s后放回鸡舍。采血完毕，做好血液样品的编号和填写好采样表。（2）跖骨内侧静脉采血法：保定把采血部位消毒后，右手持注射器，针头与跖骨呈l0°角方向进针，同时缓慢回抽活塞，抽取2ml血液。采血完毕，局部消毒并适当按压止血，做好血液样品的编号和填写好采样表。家禽的心脏采血和颈静脉采血容易造成死亡，常规免疫监测一般不采用这两种方法。

3 血清分离与保存及运送

3.1 血清分离

（1）采集的血液样品可保存于一次性5ml真空管中，在常温下静置1~2h可自然析出血清。也可将装入血液的真空管置于37℃温箱中1h，待其析出血清。分离好的血清加盖编号，造册登记。（2）利用离心机分离血清，首先将采集的血液样品置室温30min，待血液凝固后2000~3000转/分离心5~10min，试管上层清液即为血清，如离心后有轻微的溶血，用牙签将血凝块挑出，将混有红细胞碎片的血清再次离心，用干净吸管收集于干燥的指型管中，贴上标签备用，如血清溶血，应剔出样品。

3.2 血清的保存

合格的血清应无溶血、不浑浊、不变质。所分离出的血清若不能及时送检，应保存在2~8℃的冰箱中，可存15d，-15℃以下血清可保存2年。

3.3 血清的运送

如果血清能在24h内送往实验室，运送时把血清放在装有冰块且保存于4℃的保温瓶内送检，如果24h内不能抵达或送往外地实验室时，血清必须冷冻处理，并在低温下运送。运送途中防止血清泄漏，密闭封装并加冰袋运送，也不能剧烈震荡。

4 体会

（1）采血人员应认真做好自身防护工作，特别是大家畜的采血时。（2）血样的采集要求技术熟练，一针见血。既可以节省时间，又能得到畜主对这项工作支持和了解，强化畜主对动物疫病防疫的认识，增强防疫意识。（3）对猪进行采血，猪只不能过饱，个体要适中，动作过大有可能对猪只胃肠移位或采血后发生呕吐。助手配合默契，保定姿势要正确，有利于采血一次成功。（4）在抽血过程中，拉动活塞不能过快过猛，随时观察针头深度和抽血情况，耳静脉、翅内侧腋下静脉、跖骨内侧静脉采血宜缓宜慢。（5）耳静脉、翅内侧腋下静脉采血，针头拔出后容易出血，特别是禽类容易出现血肿，短期内局部难恢复，畜主有一定的反感情绪。因此，要求采血技术要熟练，止血是关键。（6）采血前后要保持环境的安静，避免畜禽剧烈运动。（7）采血部位要严格消毒，采血后可服用一定量的抗菌素，防止感染，增强保护力。（8）消毒采血部位时，酒精未干，即行采血，有可能混入酒精引起溶血；血清未分离前，携带血液剧烈震荡，使血液不断振荡引起溶血；采取多次离心，可达到分离作用。（9）离化验室较远，不能及时送检，将血液分离出的血清或长时间存放冰箱的冷藏层，又不能马上送检，保存不当，放置时间较长，从而造成变质。采血过程中，部位或器械被污染等因素也可造成血清变质。

（2011–12–02）

S851.34+7

B

1007-1733(2012)02-0048-02