RP-HPLC法测定六味地黄软胶囊中马钱苷的含量

张兰杰，谢 程

(1.吉林省人民医院 中医科，吉林 长春 130021；2.吉林大学中日联谊医院 药剂科，吉林 长春 130033)

六味地黄软胶囊为药典品种六味地黄丸改剂品种，由山茱萸、牡丹皮等6味药精制而成，具有滋阴补肾的功能，用于肾阴亏损，头晕耳鸣，腰膝酸软，骨蒸潮热，盗汗遗精，消渴，使用该药配合针灸对肾虚腰痛疗效更佳。原标准中采用薄层扫描法测定制剂中山茱萸所含熊果酸含量，但在实际应用中发现，该测定方法繁琐而不够稳定，故笔者参考有关文献[1-3]，研究建立了六味地黄软胶囊中马钱苷的含量测定方法。实验结果表明，该方法简便、灵敏、稳定、可靠，可作为本品的质量控制方法。

1 仪器及试药

仪器:岛津LC-10ATvp高效液相色谱仪；岛津SPD-10Avp紫外检测器；n-2000色谱工作站(浙大智达信息工程有限公司)；梅特勒电子分析天平(上海梅特勒一托利多有限公司)。药品与试剂：马钱苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号:111640-200503，供含量测定用)；六味地黄软胶囊(吉林草还丹药业有限公司，批号：090101、090102、090103；乙腈为色谱纯；其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Aichrom Reliasil-C18(4.625 0 mm，5 μm)；流动相：乙腈-0.05%磷酸溶液(9∶91)；检测波长为238 nm；流速：1 mL/min；进样量：10 μL。样品中马钱苷峰能达到基线分离，理论板数按马钱苷峰计算，不得低于4 000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 取马钱苷对照品适量，加50%甲醇制成每1 mL含40 g的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品装量差异项下的内容物约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25 mL，密塞，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，移至具塞离心管中,密塞，离心(4 000 r/min)10 min，精密量取上清液10 mL，置中性氧化铝柱(100～200目，3 g，内径1 cm，干法装柱)上，用40%甲醇40 mL洗脱，收集流出液及洗脱液，蒸干，残渣加50%甲醇适量使溶解，并转移至10 mL量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 取不含山茱萸的六味地黄软胶囊阴性样品，按供试品溶液制备方法制备。

2.3 阴性对照试验 分别精密吸取马钱苷对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10 μL，按“2.1”项下色谱条件测定。结果，供试品溶液色谱图中，在与马钱苷对照品溶液色谱图相应保留时间处有相应的马钱苷峰出现，且与临近的色谱峰分离度大于1.5，符合《中国药典》要求；而在阴性对照溶液色谱图中，在与马钱苷对照品溶液色谱图相应保留时间处没有相应的马钱苷峰出现，表明处方中其它组分对马钱苷的测定无干扰。

2.4 线性关系考察 精密称取马钱苷对照品适量，加50%甲醇制成80.2 g/mL的溶液，分别精密吸取2、4、6、8、10 mL，注入液相色谱仪，按“2.1”项色谱条件测定，记录峰面积。结果：马钱苷进样量在0.160 4～0.802 0 μg范围内，马钱苷进样量与峰面积积分值呈良好线性关系。回归方程Y=869 348.5X-7 983.9，相关系数r=0.999 8。

2.5 精密度试验 精密吸取马钱苷对照品溶液(40 μg·mL)连续进样5次，每次10 μL,测定峰面积。结果，RSD为0.9%(n=5)，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别在0、2、4、8 h测定1次，记录峰面积。结果，供试品在8 h内基本稳定，RSD为0.8%(n=4)。

2.7 重复性试验 取同一批号六味地黄软胶囊样品(批号：090101)5分,分别按“2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，计算含量。结果，平均含量0.745 7 mg/g，RSD为1.89%(n=5)。

2.8 加样回收率试验 取已知含量样品(批号：090101，含量0.745 7 mg/g)6分，分别精密加入马钱苷对照品溶液的储备液(0.748 mg/mL)0.5 mL，按“2.2”项下的方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，计算回收率。

2.9 样品含量测定 取样品，按“2.2”项下的方法制备供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10 uL，按“2.1”项下色谱条件测定，用外标法(峰面积)计算含量，结果批号：20090101、20090102、20090103的每粒含量为0.282 7、0.255 3、0.2238 mg。

3 讨论

在供试品溶液制备方法的选择上，为了使样品中马钱苷提取完全，考察了不同提取方法(超声与回流)、提取溶媒 (甲醇、50%甲醇、50%乙醇)及提取时间(0.5、1、1.5 h)对含量测定的影响。最后选择最佳提取方法为样品用50%甲醇，回流提取1 h。

在流动相的选择上，本试验分别对如下流动相：乙腈-0.05%磷酸溶液(10∶90)、乙腈-0.05%磷酸溶液(9∶91)、乙腈-0.05%磷酸溶液(8∶92)、四氢呋喃-乙腈-甲醇-0.05%磷酸溶液(1∶8∶4∶87)进行了考察，结果发现在乙腈-0.05%磷酸溶液(9∶91)条件下,对于样品中马钱苷和其它杂质的分离度最好，且保留时间适中，故选择此流动相。

[1]杨来秀,鞠爱华,温爱平,等.HPLC测定明目地黄胶囊中的马钱苷[J].华西药学杂志,2007,22(4):451-453.

[2]徐桂香,杨婕,陈钟文.HPLC法测定知柏地黄丸浓缩丸中马钱苷的含量[J].河南中医学院学报,2007,22(4):30-31.

[3]冯茔.HPLC法测定浓缩六味地黄丸中马钱苷含量[J].郑州大学学报,2008,43(4):790.