Syk与NF-κB在直肠癌组织中的表达及意义

问 明，任莉莉，马振峰，张卓奇，崔乃鹏，陈保平

(河北大学附属医院，河北保定071000)

近年研究显示，非受体型酪氨酸激酶Syk作为恶性肿瘤预后判断的指标受到越来越多的关注。直肠癌是胃肠道中常见的恶性肿瘤，研究探寻与其密切相关的生物学标记物对临床治疗有重要意义。2009年6月，我们应用免疫组化法检测了Syk及NF-κB在直肠癌组织中的表达，旨在探讨Syk在直肠癌发生、发展过程中的可能作用机制为临床治疗提供新的思路。

1 材料与方法

1.1 材料 随机选取我院2007～2008年手术切除的直肠癌病理标本共50例(直肠癌组)，手术前均未经任何治疗，术前肠镜活检病理及术后病理均证实为原发性直肠癌。患者平均年龄52.3岁(其中≥60岁32例，＜60岁18例)，男33例、女17例;腺癌36例，黏液腺癌9例，未分化癌5例;根据TNM分期标准(UICC 2009年)Ⅰ及Ⅱ期18例(无淋巴结转移)，Ⅲ及Ⅳ期32例(有淋巴结转移);根据细胞异型性及排列极性情况低度分化及未分化10例，中度分化31例，高度分化9例。另选癌旁正常组织10份(经病理HE染色证实)作为对照组。

1.2 Syk及NF-κB表达检测 取两组标本，经甲醛液浸泡固定后常规石蜡包埋，4 μm厚度连续切片3张，HE染色1张，免疫组织化学染色2张，70℃烤箱烤片2 h，免疫组化染色步骤依照试剂盒说明书进行(其中通用型免疫组化SP 试剂盒购自福州迈新生物技术公司，兔抗人NF-κB单克隆抗体购自Santa Cruz公司，鼠抗人单克隆Syk抗体购自NeoMarkers公司)。染色结果判定:应用光学显微镜于高倍视野(×400)下对细胞进行计数，计算阳性细胞百分比，以棕黄色颗粒定位明确、明显染色者为阳性，弱染色或不染色者为阴性;阳性细胞＜10%为(－)、10%～25%为(+)、26%～50%为(++)、＞50%为(+++)，其中(－)及(+)判为阴性、(++)及(+++)判定为阳性。

1.3 统计学方法 采用SPSS13.0软件进行统计学处理。率的比较及相关性分析采用四格表法及χ2检验，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 Syk、NF-κB表达及其相关性 直肠癌组NF-κB阳性表达33例(66.0%)、Syk表达缺失(阴性) 20例(40.0%)，对照组NF-κB表达均为阴性、而Syk表达均呈阳性，组间比较P分别＜0.01及0.05; Syk与 NF-κB表达存在显著负相关关系(P＜0.05)，见表1。

表1 直肠癌组Syk、NF-κB表达(例)

2.2 Syk表达与直肠癌临床病理参数的关系 Syk表达与直肠癌肿瘤细胞分化、淋巴结转移有关(P＜0.05)，与年龄、性别无显著相关(P＞0.05)，见表2。

表2 Syk表达与直肠癌患者临床病理指标的关系(例)

3 讨论

Syk编码基因为SYK，广泛表达于造血细胞中，是磷酸化免疫受体活化基序首选招募的对象，与ZAP-70属于同一酪氨酸激酶家族［1］。近期研究显示，Syk与多种恶性肿瘤的发生、发展有关，如正常乳腺组织及非侵袭性乳腺癌细胞株中均可检测到Syk表达，而侵袭性乳腺癌细胞株Syk的表达降低甚至缺失;Syk具有抑制乳腺癌细胞增殖及促其凋亡的作用，Syk阴性乳腺癌细胞株转染野生型Syk后接种裸鼠形成的肿瘤较未转染者接种裸鼠形成的肿瘤直径小，且出现肝转移的风险明显降低［2，3］。研究发现，Syk与消化道肿瘤的发生存在密切关系［4～8］。甲基化是肿瘤抑制因子基因沉默的主要机制［9，10］，Yun等［11］研究发现，乳腺癌组织的SYK基因出现超甲基化，而癌旁正常乳腺组织的SYK基因不发生甲基化，推测Syk表达缺失发生在转录水平，可能由SYK基因CpG岛超甲基化所致SYK基因沉默引起。本研究显示，直肠癌组Syk表达缺失者占40.0%，而对照组均为阳性表达，组间比较存在明显差异;Syk表达与肿瘤侵袭性及肿瘤细胞分化程度关系密切。提示Syk表达缺失与直肠癌发生、发展有密切关系，Syk表达缺失的直肠癌具有更高的侵袭性和转移倾向，Syk对直肠癌细胞的生长和转移有一定抑制作用。

NF-κB是重要的核转录因子，参与多种基因调控、机体免疫应答和细胞死亡的信号传导过程，已有研究证明其活化与多种肿瘤的发生、发展有关［12］。研究显示，在乳腺癌细胞中Syk可通过抑制磷脂酰肌醇3-激酶(PI3-k)抑制NF-κB活化。NF-κB可调节尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)的激活、分泌，而uPA的激活、分泌与多种恶性肿瘤的发生、发展及转移密切相关。还有研究显示，NF-κB(p65)移位活化后可与血管内皮生长因子(VEGF)-C启动子上的特定区域结合而上调VEGF-C表达，而VEGF-C被认为是目前最强的促淋巴管新生的因子，其过表达可导致淋巴管过度增生。本研究显示，直肠癌组NF-κB阳性表达33例(66.0%)，而对照组表达均为阴性，组间比较有显著差异;NF-κB与Syk表达呈显著负相关，Syk表达缺失病例中可见到NF-κB高表达。提示NF-κB活化与直肠癌存在密切关系;Syk可能通过调节NF-κB表达而影响细胞信号的转导及淋巴管生成，进而导致肿瘤的发生与进展。其具体机制尚需扩大样本进行深入研究。

总之，Syk可能通过抑制NF-κB的活化抑制直肠癌发生及进展，有望作为新靶点用于直肠癌的治疗。

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