HPLC法测定芪葛降糖胶囊中葛根素含量

翟 斌 张婷婷

（天年药业有限公司・哈尔滨 154800）

HPLC法测定芪葛降糖胶囊中葛根素含量

翟 斌 张婷婷*

（天年药业有限公司・哈尔滨 154800）

目的：建立测定芪葛降糖胶囊中葛根素含量的方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱条件：色谱柱：大连依利特Hypersil ODS2（5μm，5mm×150mm）；流动相：甲醇－水（23:77）；流速：1 ml/min；检测波长：250 nm。结果：建立的含量测定方法准确简便，重复性好。

芪葛降糖胶囊 葛根素 高效液相色谱法

* 哈药集团中药有限公司·黑龙江 150078

芪葛降糖胶囊是由黄芪、天花粉、葛根等药味组成，具有滋肾养阴，益气生津之功效。临床用于治疗多饮、多尿、消瘦、体倦无力、尿糖及血糖升高之气阴两虚型消渴症。该处方中葛根为君药，采用高效液相色谱法测定降糖胶囊中葛根素的含量，作为降糖胶囊的质量控制指标之一。

1 仪器和试药

1.1 仪 器

岛津SCL-10A高效液相色谱仪，岛津SPD-10A紫外检测器，浙大智达N2000工作站，昆山KQ-300DB型超声仪。

1.2 药 品

葛根素（中国药品生物制品检定所，批号110752-200209），芪葛降糖胶囊自制。

1.3 试 剂

甲醇为色谱纯（迪马公司），乙醇为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：大连依利特Hypersil ODS2（5μm，5mm×150mm）；流动相：甲醇－水（23∶77）；流速：1 ml/min；检测波长：250 nm。

2.2 对照品溶液的配制

精密称取葛根素对照品，加入30%乙醇制成每1ml含0.6mg葛根素的溶液，作为对照品溶液，进样10μl。

2.3 空白试验

按处方去掉葛根配制成阴性样品，按方法2.4对样品进行处理，测定结果表明在葛根素出峰位置上未见有吸收峰。

2.4 供试品溶液的配制与测定

精密称取样品0.5039g、0.4927g、0.5105g置于具塞锥形瓶中，分别精密加入30%乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率40KHz）30分钟，放冷，再称定重量，用30%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，进样10μl。

2.5 标准曲线的绘制

精密称取干燥至恒重的葛根素对照品10 mg，置50ml容量瓶中，加入适量的30%乙醇超声振荡使其溶解，加30%乙醇稀释至刻度，作为对照品溶液。分别精密吸取上述对照品溶液1、2、3、4、5ml于10ml容量瓶中，用30%乙醇稀释至刻度，再分别注入高效液相色谱仪各10μl，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标绘制标准曲线，回归方程为Y=421295.5X-3329.5，r=0.9996，线性范围0.2－1.0μg，峰面积RSD=1.20%。

2.6 精密度试验

取线性关系项下0.6mg/ml的葛根素对照品溶液，连续进样六次，峰面积RSD=0.91%。

2.7 重复性试验

取同一批号下样品进行五次平行试验，分别进行测定，测得葛根素的含量为2.3751 mg/粒，RSD=0.14%。

2.8 稳定性试验

取同一供试品溶液，室温下放置，在配制后的0、2、4、6、8、24依次测定，结果在24小时内的RSD=0.94%。

2.9 加样回收率试验

取已知含量的同批样品6份，研细，精密称定，分别精密加入葛根素对照品适量，按供试品制备方法处理，测定葛根素含量，计算回收率，结果见表1。

2.10 样品含量的测定

取三批样品，按上述方法制备成供试品溶液，每批测定3次，结果见表2。

表1

表2

3 讨 论

（1）在进行溶剂选择时，比较了50%乙醇、30%乙醇，结果以后者的葛根素提取完全，且分离较好。比较了回流和超声处理两种提取方法，结果表明超声的提取较完全，且简便易行。比较了20、30、40、50、60分钟不同超声处理时间对提取效果的影响，结果30分钟即可提取完全，所以确定超声处理30分钟。

（2）色谱条件筛选时，在流动相中曾选择加入磷酸，试验结果表明采用甲醇－水系统，葛根素的峰形对称，保留时间适中，分离效果好。

[1] 中国药典.一部[S].2010.273.

[2] 林少华，赫玉芳，南敏伦，等.高效液相色谱法测定降脂减肥颗粒中葛根素含量. 时珍国医国药[J]. 2006,17（2）,205.

（2012-05-18 收稿）