山西部分种猪场猪伪狂犬病分子流行病学调研

樊振华，姚敬明，孟帆，米瑞娟，罗甜甜，吴忻，刘文俊 ，王娟萍

（1.山西省农业科学院畜牧兽医研究所，山西 太原 030032；2.山西省动物疫病预防控制中心，山西 太原 030024）

猪伪狂犬病（Pseudorabies，PR）是由猪伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）引起的一种高度接触性传染病。其可通过消化道、呼吸道、精液传播，也可通过胎盘垂直传播从而使母猪出现繁殖障碍，通常引起妊娠母猪流产、木乃伊胎、死胎和产弱仔；初生仔猪出现神经症状[1-2]，感染率和死亡率可达100%。感染仔猪出现发热、腹泻、呼吸困难、肌肉震颤、麻痹、共济失调；成年猪感染后多呈隐性感染，造成长期带毒排毒，成为最危险的传染源，严重影响种猪场生产。该病广泛分布于世界各地[3]，在我国自1984年刘永纯首次报道此病后，迄今为止已有20多个省份相继发生，并在许多种猪场呈暴发流行趋势，给我国的养猪业特别是集约化养猪造成了巨大的经济损失[4-7]。

为了查清山西猪伪狂犬病流行情况，2009—2011年山西省畜牧兽医研究所课题组深入到全省11个地市58个规模化种猪场进行了调查，同时采集病死猪的病料和不同日龄猪群血样，应用聚合酶链反应（PCR）和酶联免疫吸附试验（ELISA）进行了病原和感染抗体、免疫抗体检测，初步查明了猪伪狂犬病在山西种猪场的流行特点、感染率和免疫情况，为有效预防和控制该病的流行提供了科学依据。

1 材料和方法

1.1 流行病学调查方法

重点对太原、晋城、长治、晋中、阳泉、吕梁、朔州、忻州、运城、临汾、大同11个地市饲养的200头以上能繁母猪的58个规模化种猪场进行调研，调查内容包括猪群饲养管理、疫病防控、母猪的生产性能、繁殖障碍、仔猪与育肥猪是否有呼吸道和运动失调等症状、是否有高热高死亡情况。对病死猪进行剖检，观察皮肤、浆膜、黏膜、淋巴结、内脏器官等病变并采集病料组织，以便进行实验室诊断，并进行详细记录。

1.2 病料的样品采集与处理

严格按照动物疫病实验室病料样品采集方法的相关规定，从调研猪场采集病死猪的肺、肝、脾、肾、淋巴结等脏器组织，经过处理后-70℃低温冰箱冷冻保存备用。

试验采用PCR的方法进行猪伪狂犬病病毒的检测。同时，随机对各猪场存栏的不同日龄猪群前腔静脉采血后分离血清，-70℃保存，采用ELISA的方法对猪伪狂犬病的感染抗体和免疫抗体进行检测。

1.3 PCR方法检测猪伪狂犬病病毒

猪伪狂犬病病毒检测，采用北京世纪元亨动物防疫技术公司的猪伪狂犬病病毒PCR检测试剂盒对待检病料进行扩增，扩增产物在2%琼脂糖凝胶上电泳，溴化乙锭染色，在紫外光下观察，可见一个217 bp的特异性片段，则判定为阳性。

1.4 ELISA方法检测猪伪狂犬病感染抗体

猪伪狂犬病病毒感染抗体检测，采用美国IDEXX公司生产的猪伪狂犬病病毒gE抗体检测试剂盒，对待检猪血清进行检测，诊断猪群是否感染猪伪狂犬病野毒株。

用样品与阴性对照比率（S/N）作为判定标准，即S/N≤0.6为阳性，S/N＞0.7为阴性，0.6＜S/N≤0.7的样品应重测。

1.5 ELISA方法检测猪伪狂犬病免疫抗体

猪伪狂犬病免疫抗体检测采用美国IDEXX公司生产的猪伪狂犬病病毒gB抗体检测试剂盒，对待检猪血清进行检测，可诊断猪群免疫猪伪狂犬病疫苗后产生的抗体。判定标准：S/N≤0.6为阳性，S/N＞0.7为阴性，0.6＜S/N≤0.7的样品应重测。

2 流行病学调研与检测结果

2.1 流行病学调研结果

通过对山西11个地市58个规模化种猪场调查，发现大部分种猪场都给母猪免疫进口或国产猪伪狂犬病gE基因缺失弱毒疫苗，常规的免疫程序为：公猪、母猪春、秋季各普免1次，每次4 mL/头；仔猪在40日龄时免疫1次，剂量为2 mL/头。也有一些猪场不进行免疫，或只免疫母猪。种猪场母猪繁殖障碍病较严重，母猪表现发热、厌食、繁殖障碍，妊娠母猪早产、流产、死胎、弱胎、木乃伊胎等，尤其在妊娠后期，产前1个月左右多发；成年母猪呈慢性经过。

1周龄仔猪、断奶前后仔猪病死率高，表现发热、呼吸困难、发育不良、运动障碍，有的猪耳部和体表腹侧皮肤充血出血。育肥猪呼吸道病综合征（PRDC）时有发生，表现喘气、咳嗽、呼吸困难。表现间歇性抽搐、肌肉痉挛性收缩、癫痫发作等典型的猪伪狂犬病神经症状的乳猪较少看到。

猪病以混合感染和继发感染为主，特别是猪瘟和猪蓝耳病、猪伪狂犬病、猪圆环病毒Ⅱ型（PCV2）、猪肺炎支原体、猪传染性胸膜肺炎、副猪嗜血杆菌等病经常发生混合感染，或者继发感染。

2.2 PCR检测猪伪狂犬病病毒结果

共对58个规模化种猪场采集的329份病料，用PCR试剂盒进行了猪伪狂犬病病毒检测，结果表明，感染率最高的地区是朔州，为28.57%，感染率最低的地区是晋中，为2%，平均感染率为9.12%（图 1、表 1）。

表1 11个地市部分规模化种猪场猪伪狂犬病病毒PCR检出结果

2.3 ELISA检测猪伪狂犬病感染抗体结果

共对58个规模化种猪场采集的2221 份血清，用猪伪狂犬病病毒gE抗体检测试剂盒进行了猪伪狂犬病感染抗体检测，结果表明，猪伪狂犬病病毒感染gE抗体阳性率，最高的地区是朔州，为14.86%；最低的地区是吕梁，为1%，平均为 3.20%（表 2）。

表2 11个地市部分规模化种猪场猪伪狂犬病感染抗体ELISA检出结果

2.4 ELISA检测猪伪狂犬病免疫抗体结果

共对58个规模化种猪场采集的2221 份血清，用猪伪狂犬病病毒gB抗体检测试剂盒进行了猪伪狂犬病免疫抗体检测，结果表明，猪伪狂犬病疫苗免疫gB抗体阳性率，最高的地区是晋城，为94.82%，最低的地区是长治，为41.26%，平均为 79.33%（表 3）。

表3 11个地市部分规模化猪场猪伪狂犬病免疫抗体ELISA检出结果

3 小结与分析

（1）山西大部分种猪场母猪繁殖障碍病比较严重，以猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬病、猪圆环病毒Ⅱ型（PCV2）、猪肺炎支原体、猪传染性胸膜肺炎等混合感染，或继发感染为主。典型的猪伪狂犬病神经症状的乳猪较少看到。大型猪场发生较少，较小规模猪场感染情况较重。说明大型猪场的管理和对该病的防疫工作较好。用PCR试剂盒检测猪伪狂犬病病毒感染率，最高的地区是朔州，为28.57%，最低的地区是晋中，为2%，平均为9.12%。用猪伪狂犬病病毒gE抗体检测试剂盒检测其感染gE抗体阳性率，最高的地区是朔州，为14.86%，最低的地区是吕梁，为1%，平均为3.20%。说明地区之间猪群感染率差异比较大，这可能与当地引种、免疫防疫等有关。

（2）大部分种猪场都免疫猪伪狂犬病gE基因缺失弱毒疫苗，应用猪伪狂犬病病毒gB抗体检测试剂盒检测其疫苗免疫gB抗体阳性率，最高的地区是晋城，为94.82%，最低的地区是长治，为41.26%，平均为79.33%。说明地区之间免疫抗体阳性率差异比较大，可能与有些地区不重视免疫、或免疫程序不合理，或猪群感染猪瘟、猪繁殖与呼吸障碍综合征、猪圆环病毒Ⅱ型等免疫抑制性疾病有关。

（3）通过对山西11个地市58个种猪场猪伪狂犬病分子流行病学调研证明，猪群普遍感染猪伪狂犬病病毒，大部分猪场免疫情况较好，但也有一部分猪场不重视免疫。猪伪狂犬病对种猪场危害性很大，传染性很强，今后要进一步加强该病的防疫免疫工作。姚敬明等[8]研究证明，无论免疫国产或进口猪伪狂犬病gE基因缺失弱毒疫苗都可以对猪伪狂犬病产生良好的免疫效果。给公猪和母猪采用跟胎免疫、或一年2次普免、或每隔4个月定时免疫均可取得良好的效果。给仔猪40日龄首免后，75日龄抗体逐渐降低，120日龄后基本消失。为了使猪体免疫力更强，不给野毒入侵的机会，建议适当时间给仔猪进行2次加强免疫。国内外许多学者使用基因缺失疫苗，结合检疫淘汰净化猪伪狂犬病[9-10]，如：荷兰自1989年在全国范围实施广泛的免疫接种，2 a后种猪的猪伪狂犬病阳性率由81%降至18%，育肥猪的阳性率由49%降至1%[9]。通常种猪场采取的净化方法是：种猪在10～12周龄和14～16周龄进行2次免疫，25周龄进行第3次免疫，以后每4个月加强免疫一次。并且所有被检测出感染伪狂犬病的繁殖母猪一经检出即予淘汰[11]。今后，山西也应逐步净化猪伪狂犬病。

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