北沙参活性成分与药材质量的动态监测

张会敏，宋 健

(1.山东省中医药研究院，山东济南250014;2.山东中医药大学，山东济南250355)

北沙参为伞形科植物珊瑚菜Glehnia littoralis Fr.Schmidt ex Miq.的干燥根。山东为北沙参主产地，而莱阳为“道地”产区，素以产量大、质量好、疗效佳而驰名中外。目前，北沙参的引种区域不断扩大，河北安国与内蒙古赤峰均有大面积种植，质量不一［1］。北沙参根含欧前胡素、异欧前胡素、补骨脂素等多种香豆素类和糖类化合物，还有生物碱、挥发油、油酸、氨基酸等。在成分分析的研究方法中，文献记载的主要有薄层－紫外、薄层扫描。目前2010年版《中国药典》也未对其进行含量测定分析。为保证北沙参的质量，建立和完善北沙参的质量控制关键技术和评价标准，我们采用HPLC方法对不同批次北沙参中欧前胡素、异欧前胡素的含量同时进行了测定，并考察了其多糖、水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物的含量动态变化。

1 北沙参中欧前胡素、异欧前胡素含量的动态检测

1.1 仪器与试药、试验材料

1.1.1 仪器与试药 Agilent 1100 LC高效液相色谱仪;Agilent Chemstation工作站(美国安捷伦科技公司);检测器:Agilent DAD;色谱柱:Phenomenex－C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);KQ－250E型医用超声波清洗器(江苏昆山市超声仪器有限公司);欧前胡素(中国药品生物制品检定所，批号: 110826－200308);异欧前胡素(中国药品生物制品检定所，批号:0827－9502);甲醇(一级色谱纯，天津市四友生物医学技术有限公司，批号:080907101)等。

1.1.2 试验材料 产地均为山东莱阳胡城，详见表1。

表1 不同批次北沙参药材样品

1.2 实验方法

1.2.1 色谱条件 色谱柱:Phenomenex－C18柱(4.6 mm× 250 mm，5 μm);柱温:30℃;流动相:甲醇－水(65∶35);流速:1.0 mL·min－1;检测波长:248 nm。

1.2.2 对照品溶液的制备 分别精密称取干燥至恒重的欧前胡素、异欧前胡素对照品，加甲醇溶解，分别制成0.066 mg ·mL－1、0.060 mg·mL－1的对照品溶液。

1.2.3 供试品溶液的制备 取样品，粉碎，过40目筛，精密称取10 g，置具塞锥形瓶中，加乙醚100 mL，超声提取30 min，提取2次，回收溶剂，残渣用甲醇溶解并定容于5 mL容量瓶中，用0.45 μm滤膜过滤，作为供试品溶液。

1.2.4 线性试验 分别精密吸取对照品溶液0.5、1、2、4、6、8、10、15、20 μL进样，按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标绘制标准曲线，得回归方程:欧前胡素Y=104.04+485.35X，r=0.999 5，线性范围:0.033～1.32 μg;异欧前胡素Y=44.25+181.69X，r=0.998 9，线性范围:0.03～1.2 μg。结果表明，欧前胡素、异欧前胡素峰面积与进样量均有良好的线性关系。

1.2.5 精密度试验 取同一对照品溶液10 μL，连续进样5次，测其峰面积，欧前胡素RSD为0.83%、异欧前胡素RSD为1.23%。

1.2.6 重复性试验 取北沙参药材1号供试品5份，按1.2.3制备供试品溶液，测定，计算含量，欧前胡素RSD为1.70%、异欧前胡素RSD为1.67%。

1.2.7 回收率实验 采用标准加入法，精密称取已测知含量的样品5份，分别加入一定量的对照品溶液，按样品测定项下方法操作，计算回收率。欧前胡素和异欧前胡素平均回收率分别为98.23%、96.94%，RSD分别为1.36%、0.98%，见表2。

表2 欧前胡素、异欧前胡素加样回收试验结果(n=5)

1.3 样品测定 按供试品溶液制备项下方法制备样品溶液，用0.45 μm滤膜过滤后，进样20 μL，按上述色谱条件测定。山东道地药材北沙参中欧前胡素异欧前胡素含量动态分析结果见表3。

表3 不同年份北沙参欧前胡素、异欧前胡素含量比较(n=3)

2 糖类成分、浸出物、灰分、水分分析

北沙参含有较多的糖类成分，药理研究表明北沙参多糖对巨噬细胞(MΦ)吞噬功能有非常显著促进作用;对血清抗体产生有显著增强作用;对细胞免疫功能和T、B细胞的增生均有抑制作用;对免疫系统有免疫调节作用。糖类成分可能是其滋阴作用的物质基础之一，本文按照文献方法［2］对其可溶性糖和粗多糖进行了含量测定。北沙参含香豆素类和糖类等多种化学成分，浸出物的含量测定也是质量控制的重要指标，尤其当活性成分不明确时，更具有实际意义。对北沙参进行水溶性、醇溶性和醚溶性浸出物测定，不同批次山东北沙参中多糖类成分、浸出物、灰分、水分含量的动态检测结果见表4。

表4 不同批次北沙参多糖、浸出物、灰分、水分含量表(n=3)

3 小结与讨论

3.1 实验结果显示，以2009年样品中欧前胡素、异欧前胡素含量最高分别为0.021 2%和0.014 25%，两种香豆素总含量平均值为0.034 77%。三批北沙参样品总糖含量均值为77.38%，其中粗多糖含量均值为45.63%，可溶性糖均值为31.74%;水溶性浸出物含量均值为35.68%，醇溶性浸出物含量均值为18.02%，醚溶性浸出物含量均值为4.66%;灰分、水分含量均值分别为3.43%、9.12%。不同批次北沙参样品中欧前胡素、异欧前胡素、多糖、浸出物、灰分及水分含量均呈现出良好的稳定性，表明山东道地药材北沙参具有良好的质量稳定性，同时说明本研究采用的质量评价方法稳定可控。

3.2 目前，北沙参质量评价的研究报道较多［3～5］，但药典并未规定北沙参含量检测指标性成分，本研究同时以欧前胡素、异欧前胡素、多糖、浸出物、灰分及水分含量为指标，较为系统的对不同批次山东北沙参进行评价，并追踪考察三年的北沙参药材化学活性成分动态变化规律，对山东道地药材北沙参的质量评价有重要意义。

［1］ 李宝国，石俊英.近十年来北沙参的研究概况［J］.时珍国医国药，2002，13(5):309－311.

［2］ 石俊英，李宝国，牟彩萍.山东地产药材北沙参多糖含量测定［J］.山东中医药大学学报，2002，26(2):139－142.

［3］ 石俊英，张永清，李宝国，等.北沙参栽培品种与药材质量的相关性研究［J］.中药材，2002，25(11):776－777.

［4］ 李宝国，石俊英.HPLC法测定不同产地北沙参药材中香豆素的含量［J］.中药材，2005，28(6):475－476.

［5］ 李宝国，石俊英.HPLC法同时测定不同部位中3种香豆素的含量［J］.山东中医药大学学报，2005，29(5): 383－384，409.