黄柏妇科颗粒中黄柏的提取工艺与质量控制研究

李伟婧

（牡丹区中医医院，山东 菏泽 274009）

黄柏妇科颗粒是我院妇科专家多年来在清热燥湿，收敛止带、调经止痛的指导原则下，遵循中医辨证理论，选用清热燥湿药黄柏为主，辅以健脾利湿、滋阴养血的五味子、当归、龟板等药物，经精心筛选、科学组方而成，适用于慢性子宫颈炎、子宫内膜炎、阴道黏膜炎等引起的湿热型赤白带症。方中黄柏主要有效成分小檗碱约含1.4%～4%，其药材的提取溶剂采用了妇科止带片的乙醇回流提取［1］，以盐酸小檗碱浸出率为指标，首先确定黄柏的提取次数，再用正交试验确定乙醇的浓度、用量和提取时间。现将结果报道如下。

1 试验材料、仪器

黄柏购自菏泽市牡丹医药有限公司，山东省菏泽市药品检验所鉴定为芸香科植物黄皮树Phellodendron chinense Schneid的干燥树皮，粉碎后备用。

岛津LC-10ATVP高效液相色谱仪；XS 105电子分析天平（十万分之一）；盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号：110808-200905）；乙腈、磷酸为色谱纯，水为纯化水，其余试剂为分析纯。

2 提取方法

2.1 黄柏提取次数的确定

2.1.1 供试品溶液制备 称取10.0 g黄柏药材三份，分别置圆底烧瓶中，用8倍量85%乙醇各提取一次、两次和三次，每次1.5 h。提取液均定容于500 mL量瓶中，摇匀，再精密吸取5 mL，置100 mL量瓶中，用85%乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

2.1.2 对照品溶液制备 精密称取在100℃干燥5 h的盐酸小檗碱对照品10.30 mg，置100 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（0.103 mg/mL）。

2.1.3 色谱条件 《中国药典》2010年版一部［2］黄柏项下，色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（250×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.1%三氯乙酸溶液-磷酸（50：50）；流 速：1.0 mL/min；检测波长：265 nm。理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于4000。

2.1.4 线性关系 高效液相色谱法，精密吸取对照品溶液2 μL、4 μL、6 μL、8 μL、10 μL，依次注入液相色谱仪，测定峰面积。以盐酸小檗碱对照品进样量（μg）为横坐标，盐酸小檗碱峰面积为纵坐标进行线性回归，得回归方程为Y=4 021 535.9X-18 631.8，相关系数r=0.999 7。结果表明：小檗碱进样量在0.206 μg～1.03 μg范围内，峰面积与进样量呈良好的线性关系。

2.1.5 供试品溶液中小檗碱的测定 精密吸取对照品溶液5 μL和供试品溶液15 μL，分别注入液相色谱仪，测定结果表明，黄柏药材提取以三次为宜。

2.2 正交试验

2.2.1 以乙醇浓度、加醇量、提取时间三个因素，每个因素三个水平，以小檗碱浸出率为指标进行提取工艺优选［3］。

因素水平:水平1：乙醇浓度为75%，加醇量6倍、4倍、4倍，提取时间性1 h。水平2：乙醇浓度为85%，加醇量8倍、6倍、6倍，提取时间性1.5 h。水平3：乙醇浓度为95%，加醇量10倍、8倍、8倍，提取时间性2 h。

称取10.0 g黄柏，按上述条件进行回流提取，提取液过滤均定容于500 mL量瓶中，摇匀，精密吸取上述溶液5 mL，置100 mL量瓶中，分别用其相应的提取溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。

2.2.2 精密吸取对照品溶液5μL和供试品溶液15 μL，分别注入液相色谱仪，测定其峰面积，计算，即得。L9（34）正交试验见表1。

表1 正交试验表及小檗碱浸出率（%）

2.2.3 影响因素 加醇量对实验结果影响最大，其次为乙醇浓度，提取时间影响最小。故理论最佳提取工艺为A2B3C2，即药材用85%乙醇提取三次，用量分别为10倍、8倍、8倍，每次1.5 h。对B因素，由极差表可以看出，R（-）=0.97，二者的实验结果差别很小，说明药材用10倍量、8倍量、8倍量的85%乙醇提取和药材用8倍量、6倍量、6倍量的85%乙醇提取小檗碱的浸出率基本无差别。为降低成本，节约溶剂，故优选出如下提取工艺：用85%乙醇提取三次，第一次加8倍量，第二、三次各6倍量，每次1.5 h。

3 质量控制

3.1 精密度试验 精密吸取对照品溶液5 μL，供试品（批号∶091001，3 g/袋）溶液15μL，重复进样测定5次，对照品峰面积的RSD=0.52%（n=5），供试品中小檗碱峰面积的RSD=0.67%（n=5），说明精密度良好。

3.2 稳定性试验 精密吸取对照品溶液5μL，供试品溶液15μL，每隔1 h进样测定一次，对照品峰面积的RSD=1.21%（n=5），供试品中小檗碱峰面积的RSD=0.91%（n=5）。结果表明对照品溶液和供试品溶液至少在4 h内稳定。

3.3 重复性试验 同一批样品取五份，分别制备成供试品溶液，进行测定，测得平均值为22.08 mg/袋，RSD值为0.57%。说明本方法重复性良好。

3.4 回收率试验 取已知含量22.08 mg/袋的样品约0.1 g，精密称定共6份，分别置事先准备好的50 mL量瓶中（量瓶均精密加入浓度为1.68 mg/mL对照品溶液0.5 mL），制成供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液5 μL与供试品溶液各15 μL，注入液相色谱仪，测定，计算结果表明：回收率在95%～105%之间，加样回收良好，该方法准确性较高。

3.5 稳定性 取三批样品各10 g装入塑料袋中，密封，分别按室温试验法（置室温环境）和加速试验法（在37～40℃和相对湿度75%的环境中）测定其质量，结果表明该产品外观和内在质量均无变化，因此按拟定标准检验，均符合规定。

4 讨论

该制剂优点:黄柏妇科颗粒在我院临床应用多年，疗效显著，它不仅保持了汤剂吸收快、显效迅速、载药量大的特点，还克服了汤剂服用不方便的缺点，因此该制剂具有较好的社会和经济利益。

通过验证该提取工艺，生产成本低，有效成分提取率高，生产工艺稳定；通过线性关系、精密度、稳定性、重复性、回收率等试验验证，用高效液相色谱法测定小檗碱的含量，方法简便，数据准确，重复性好，能有效地控制该制剂的质量，同时也适合于医院制剂小规模的生产。

［1］《中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂》第一册［S］.79［2］中国药典2010年版一部［S］.2010：286.

［3］王振华，杜勤，许晓峰，等.黄柏提取工艺的均匀设计优选［J］.中成药，2000，22（7）：466-468.