凤尾草化学成分研究Δ

舒积成，潘景行，张锐，任晓静，刘建群（江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室，南昌330004）

凤尾草为凤尾蕨科植物凤尾草Pteris multifida Poir.的全草或根，又名井栏边草，广泛分布于我国各省区。它性寒，味淡、微苦，归大肠、肝、心经；具有清热利湿、消肿解毒、凉血止血之功效，用于治疗肝炎、菌痢、淋浊、便血、痈肿疮毒及湿疹等[1]。凤尾草所含的化学成分主要有黄酮、倍半萜、二萜、酚酸和苯丙素等化合物[2～4]。现代药理研究表明，凤尾草具有很好的抗氧化、抗诱变、抗菌及抗肿瘤作用[5～7]。本课题组发现凤尾草对雷公藤甲素（治疗类风湿性关节炎最有效中药成分之一）具有减毒作用[8]。为寻找凤尾草的活性成分，笔者对其进行了化学成分研究，从中分离并鉴定出8个化合物，可为其活性的进一步研究奠定基础。

1 仪器与试药

Boetius熔点测定仪（温度计未校正）（上海精密科学仪器有限公司）；AV-500核磁共振波谱仪（瑞士Bruker公司）；1100 LC-MSD-Trap液相色谱-质谱联用仪（美国Agilent公司）；三用紫外分析仪（上海顾村电光仪器厂）。

Sephadex LH-20（瑞典法玛西亚公司）；硅胶（青岛海洋化工厂）；甲醇、正丁醇、丙酮、醋酸乙酯、氯仿、石油醚均为分析纯。凤尾草采自江西南昌市，经江西中医学院药用植物研究室赖学文教授鉴定为凤尾草P.multifida Poir.的全草或根，凭证标本（NO.070901）保存于江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室。

2 方法与结果

2.1 提取与分离

取干燥凤尾草15 kg，粉碎至约60目，用70%工业乙醇在室温下浸泡12 h后回流提取3次，每次2 h，滤过并合并滤液，减压回收乙醇得棕色黏状提取物约1550 g，加适量蒸馏水捏溶后依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，减压回收溶剂后得石油醚部位浸膏110 g、乙酸乙酯部位浸膏130 g、正丁醇部位浸膏310 g，水部位蒸干重约950 g。

取乙酸乙酯部位浸膏55 g，经硅胶（200～300目，1.5 kg）柱色谱，以二氯甲烷-甲醇（100∶1、50∶1、20∶1、10∶1、5∶1）梯度洗脱，每份收集1000 mL，薄层色谱（TLC）检测合并的流出液中成分，得12个组分（Fr.1～Fr.12）。其中，Fr.2组分浓缩后析出白色针状晶体化合物（7）80 mg。Fr.3组分浓缩后析出白色粉末，经二氯甲烷-甲醇（1∶1）混合溶剂重结晶得化合物（8）26 mg；母液经反复凝胶柱色谱分离（洗脱剂为二氯甲烷-甲醇（1∶1）），得化合物（6）7 mg。Fr.5组分经硅胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇（25∶1、20∶1、10∶1、5∶1）梯度洗脱，其中二氯甲烷-甲醇（20∶1）洗脱流分26个（Fr.5.1～Fr.5.26），合并Fr.5.6～Fr.5.10，再反复经凝胶柱色谱分离（洗脱剂为二氯甲烷-甲醇（1∶1）），得化合物（4）28 mg和化合物（5）9 mg。Fr.10组分经硅胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇（10∶1、8∶1、4∶1、1∶1）梯度洗脱，其中二氯甲烷-甲醇（4∶1）洗脱液中所含成分32个（Fr.10.1～Fr.10.32），合并Fr.10.4～Fr.10.6，再反复经凝胶柱色谱分离（洗脱剂为甲醇），得化合物（3）12 mg；合并Fr.10.11～Fr.10.14，再经硅胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇（5∶1、3∶1、1∶1）梯度洗脱，将二氯甲烷-甲醇（3∶1）洗脱液合并后反复经凝胶柱色谱分离（洗脱剂为甲醇），得化合物（1）9 mg；合并Fr.10.25～Fr.10.28，再反复经凝胶柱色谱分离（洗脱剂为甲醇），得化合物（2）7 mg。

2.2 结构鉴定

化合物1：白色粉末（甲醇）。ESI-MS m/z：461[M-H]－。1H-NMR（500 MHz，MeOH-d4）δ：6.68～6.71（2 H，m，H-2，5），6.55（1 H，dd，J＝2.0，8.0Hz，H-6），5.17（1 H，br.s，H-rha-1），4.31（1 H，d，J＝8.0Hz，H-glc-1），3.28～4.05（12 H，m，rha-2，3，4，5与H-8和glc-2，3，4，5，6），2.78（2 H，m，H-7），1.26（3 H，d，J＝6.5Hz，H-rha-6）。13C-NMR（125MHz，MeOH-d4）δ：Aglyco-ne：131.5（C-1），117.1（C-2），146.0（C-3），144.5（C-4），116.3（C-5），121.2（C-6），36.4（C-7），72.2（C-8）；glucose：104.1（C-1），75.5（C-2），84.4（C-3），70.0（C-4），77.7（C-5），62.6（C-6）；rhamnose：102.6（C-1），72.1（C-2），72.0（C-3），73.9（C-4），70.1（C-5），17.8（C-6）。对照文献[9，10]，确认为去咖啡酰基洋丁香苷（Decaffeoylactecoside）。

化合物 2：白色粉末（甲醇）。ESI-MS m/z：511[M+Na]+。1H-NMR（500MHz，MeOH-d4）δ：7.59（1 H，d，J＝16.0Hz，H-7′），7.07（1 H，br.s，H-2′），6.96（1 H，d，J＝8.0 Hz，H-6′），6.78（1 H，d，J＝8.0Hz，H-5′），6.25（1 H，d，J＝16.0Hz，H-8′），5.14（1 H，br.s，H-rha-1），4.85（1 H，overlapped），3.28～4.08（10 H，m，rha-2，3，4，5和 glc-2，3，4，5，6），1.09（3 H，d，J＝6.5Hz，H-rha-6）。13C-NMR（125MHz，MeOH-d4）δ：Caffeoyl：127.68/127.65（C-1），115.27（C-2），147.96/147.85（C-3），149.67/149.63（C-4），116.52（C-5），123.17（C-6），146.72（C-7），115.85/114.72（C-8），168.32/168.42（C-9）；glucose：98.09/93.98（C-1），74.66/71.18（C-2），81.69/79.16（C-3），70.80/70.70（C-4），77.32/76.04（C-5），62.45/62.33（C-6）；rhamnose：103.00/102.93（C-1），71.40/71.00（C-2），72.27/72.20（C-3），73.80/73.76（C-4），70.36/70.31（C-5），18.40（C-6）。 对 照 文 献[11]，确 认 为 肉 丛 蓉 苷 F（Cistanoside F）。

化合物3：白色粉末（甲醇），FeCl3及α-萘酚试验呈阳性反应；硫酸-乙醇反应显橙色。ESI-MS m/z：625[M+H]+。1H-NMR（500MHz，MeOH-d4）：δH：7.60（1 H，d，J＝15.5Hz，H-7′），7.06（1 H，d，J＝2.0Hz，H-2′），6.96（1 H，dd，J＝2.0，8.5 Hz，H-6′），6.77（1 H，d，J＝8.5Hz，H-5′），6.71（1 H，d，J＝2.0 Hz，H-2），6.69（1 H，d，J＝8.0Hz，H-5），6.56（1 H，dd，J＝2.0，8.0Hz，H-6），6.27（1 H，d，J＝15.5Hz，H-8′），5.19（1 H，br.s，H-rha-1），4.38（1 H，d，J＝8.0Hz，H-glc-1），3.27～4.07（12 H，m，rha-2，3，4，5与H-8和glc-2，3，4，5，6），2.80（2 H，m，H-7），1.09（3 H，d，J＝6.5Hz，H-rha-6）。13C-NMR（125MHz，Me-OH-d4）：δC：Caffeoyl：127.8（C-1），114.9（C-2），149.9（C-3），148.2（C-4），116.7（C-5），123.4（C-6），146.3（C-7），116.5（C-8），168.4（C-9）；Aglycone：131.5（C-1），115.4（C-2），146.9（C-3），144.8（C-4），117.3（C-5），121.3（C-6），36.7（C-7），72.4（C-8）；glucose：104.4（C-1），76.3（C-2），81.7（C-3），70.5（C-4），76.3（C-5），62.5（C-6）；rhamnose：103.1（C-1），72.3（C-2），72.4（C-3），73.9（C-4），70.7（C-5），18.6（C-6）。对照文献[12]，确认为洋丁香苷（Acteoside）。

化合物4：无色针晶，mp 246～247℃。ESI-MS m/z 321[M+H]+。1H-NMR（DMSO-d6，500MHz）δH：5.01（1 H，s，H-17 a），4.96（1 H，s，H-17 b），3.94（1 H，s，H-14），3.62（1 H，m，H-2），3.61（1 H，s，H-15），0.99（3 H，s，H-20），0.88（3 H，s，H-19），0.81（3 H，s，H-18）。13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz）δC：51.0（C-1），65.5（C-2），53.7（C-3），35.8（C-4），57.6（C-5），19.7（C-6），29.3（C-7），53，9（C-8），57.6（C-9），41.6（C-10），18.8（C-11），33.6（C-12），51.9（C-13），76.7（C-14），83.3（C-15），159.5（C-16），109.4（C-17），35.0（C-18），24.4（C-19），19.7（C-20）。对照文献[13]，确认为 2 β，14 β，15 α-trihydroxy-ent-kaur-16-ene。

化合物5：无色针晶，mp 258～259℃。ESI-MS m/z 337[M+H]+。1H-NMR（DMSO-d6，500MHz）δH：5.20（1 H，s，H-17 a），5.13（1 H，s，H-17 b），3.96（1 H，s，H-14），3.72（1 H，m，H-2），1.00（3 H，s，H-20），0.85（3 H，s，H-19），0.79（3 H，s，H-18）。13C-NMR（DMSO-d6，125MHz）δC：51.1（C-1），65.3（C-2），53.8（C-3），35.1（C-4），57.4（C-5），19.9（C-6），29.4（C-7），51.0（C-8），56.3（C-9），41.5（C-10），19.7（C-11），40.0（C-12），81.3（C-13），79.7（C-14），82.7（C-15），161.6（C-16），110.4（C-17），35.8（C-18），24.4（C-19），19.5（C-20）。对照文献[13]，确认为2 β，13 β，14 β，15 α-tetrahydroxy-ent-kaur-16-ene。

化合物6：黄色粉末，mp 222～223℃。ESI-MS m/z 163[M+H]+。1H-NMR（CH3COCH3-d6，500MHz）δH：7.93（1 H，d，J＝9.5 Hz，H-4），7.78（1 H，d，J＝8.0 Hz，H-5），7.02（1 H，dd，J＝2.5，8.0 Hz，H-6），6.92（1 H，d，J＝2.5 Hz，H-8），6.27（1 H，d，J＝9.5 Hz，H-3）。对照文献[14]，确认为7-羟基香豆素（7-Hydroxy coumarin）。

化合物7：白色针状结晶，mp 146～147℃。Libermann-Burchard反应呈阳性，硫酸-乙醇反应显紫红色斑点。ESI-MS m/z 415[M+H]+，分子式为C29H50O。与β-谷甾醇对照品进行对照，在多种溶剂系统中经TLC检查，两者Rf值一致，且混合熔点不下降，确认为β-谷甾醇（β-Sitosterol）。

化合物8：白色粉末，Libermann-Burchard反应呈阳性，硫酸-乙醇反应显紫红色斑点。ESI-MS m/z 577[M+H]+，分子式为C35H60O6。与胡萝卜苷对照品进行对照，在多种溶剂系统中进行TLC检查，两者Rf值一致，确认为胡萝卜苷（Daucosterol）。

3 讨论

本文采用色谱和光谱法，从凤尾草中分离并鉴定出3个苯乙醇苷、2个贝壳杉烷型二萜、2个甾体及1个香豆素类化合物，其中化合物1～6为首次从该植物中分离得到，化合物1、2、3、6为首次从该属中分离得到。本结果可为凤尾草活性的进一步研究奠定基础。

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